平蘭芝，唐徐韻，廖瑩瑩，何艷芹，張海濤，潘 莉

（貴州中醫(yī)藥大學針灸推拿學院，貴州 貴陽 550025）

膽石癥（cholelithiasis）又稱膽系結石病或者膽石病，是指膽管或者膽囊任何部位發(fā)生結石的疾病，是最常見的膽道疾病[1]，以上腹疼痛、寒戰(zhàn)發(fā)熱、黃疸、惡心嘔吐等為主要表現(xiàn)，并易誘發(fā)膽道梗阻、膽道感染、膽源性胰腺炎等，嚴重者可引起膽囊穿孔甚至危及生命[2]。膽石癥的類型按其所含成分可分為膽固醇結石、膽色素性結石、混合性結石3 類[3]。根據(jù)流行病學調查結果顯示[4，5]，膽石癥在我國的發(fā)病率從過去的3.1%升高至10.7%，隨著生活水平的增高和飲食結構改變，發(fā)病率呈現(xiàn)出逐年上升趨勢。膽石癥的發(fā)病機制尚未明確，目前的治療方法有藥物治療、體外沖擊波碎石治療、手術治療等方法[6]，療效顯著，但是復發(fā)率高。中醫(yī)治療膽石癥具有療效好、副作用小、安全性高、創(chuàng)傷小等優(yōu)勢，并在臨床中進行運用推廣[7]。穴位埋線是針灸學的一種延伸和發(fā)展，也是長效針灸，它是將羊腸線埋入穴位，利用羊腸線對穴位的持續(xù)刺激，達到調整機體功能、改善病理狀態(tài)的效果[8]。本實驗通過對膽固醇膽石癥大鼠進行穴位埋線干預實驗，觀察其血清總膽固醇（TC）及甘油三酯（TG）含量的變化，旨在為臨床治療膽固醇膽石癥提供參考和依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF 級健康雄性Wistar 大鼠32 只，體質量（250±10）g，購自斯貝福（北京）生物技術有限公司，合格證號：SCXK（京）2018-0012。本實驗操作均符合動物倫理要求。

1.2 分組及造模 大鼠適應性飼養(yǎng)1 周后，采用隨機數(shù)字表法將32 只大鼠隨機分為空白組8 只，給予普通飼料喂養(yǎng)；其余24 只建立膽固醇膽石癥模型，本項目在既往研究的致石飼料方法基礎上進行改良，建立膽固醇膽石癥大鼠動物模型[9-11]，以蔗糖50%、酪蛋白20%、膽固醇1%，膽酸0.5%、豬油15%的比例配制致石飼料，喂食6 周后，將24 只造模大鼠隨機分成模型組、埋線組、針刺組，每組8 只。

1.3 主要儀器與試劑 9 號一次性埋線針（江西格蘭斯醫(yī)療有限公司），4-0 號羊腸線（山東博達醫(yī)療用品有限公司），華佗牌不銹鋼毫針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司，規(guī)格：0.25 mm×25 mm），離心機（Thermo Fisher Scientific，美國），多功能酶標儀（Molecular Devices，美國）?？偰懝檀技案视腿ピ噭┖校暇┙ǔ缮锕こ萄芯克?。

1.4 方法

1.4.1 治療方法 埋線組將9 號埋線所用4-0 號羊腸線按穴位所需剪成3～4 mm的長度，置于95%酒精中浸泡備用。將大鼠固定于鼠臺，參照全國高等中醫(yī)院校規(guī)劃教材《實驗針灸學》及中國針灸學會實驗針灸分會制定的《動物針灸穴位圖譜》選取并定位“陽陵泉”“膽囊穴”“足三里”“第10 胸椎夾脊”穴，局部脫毛，穴位處用75%酒精常規(guī)消毒，采用9 號埋線針，3～4 mm 羊腸線，刺入穴位4～5 mm，向內(nèi)推針芯，同時緩慢退出針頭，將羊腸線植入穴區(qū)肌肉內(nèi)。檢查有無出血，按壓針孔片刻。每7 d 為1 個療程，共2 個療程，每療程間隔2 d。針刺組將大鼠固定于鼠臺，用1寸的針灸針針刺大鼠“陽陵泉”“膽囊穴”“足三里”“第10 胸椎夾脊”穴，穴位取穴方法同埋線組，1 d/次，每7次為1 個療程，共2 個療程，每療程間隔2 d?？瞻捉M和模型組在干預期間正常飼養(yǎng)，不予治療。

1.4.2 指標檢測 最后1 次治療結束后，各組大鼠禁食不禁水12 h，取材前大鼠腹腔注射4%的戊巴比妥0.1 ml/100 g，麻醉后將大鼠仰臥固定于大鼠手術板上，打開腹腔，在十二指腸中找到白色透明的膽總管，觀察膽囊和膽總管成石情況；后經(jīng)腹主動脈取血，將取到的8 ml 血液靜止2 h，3000 r/min 離心15 min，取血清，放于-80 ℃冰箱。1 d 后，根據(jù)血清總膽固醇及甘油三酯試劑盒說明書操作，測定各組大鼠血清中總膽固醇及甘油三酯含量。觀察造模前、造模后、治療后各組大鼠的一般情況，包括進食情況、精神狀態(tài)、活動情況、背毛情況。比較各組大鼠膽囊膽固醇結石成石率，治療后血清總膽固醇及甘油三酯含量。肉眼可見膽囊或膽管內(nèi)有絮狀沉淀或肉眼可見膽囊有泥砂樣沉積物，可視作膽囊結石生成。膽囊膽固醇結石成石率（%）=每組生成膽囊結石大鼠數(shù)/每組大鼠數(shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計學分析 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計，正態(tài)分布資料用（）表示，各組間比較使用單因素方差分析，兩兩比較用LSD 檢驗，以P＜0.01 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠一般情況觀察 造模前各組大鼠飲水正常，精神狀態(tài)良好，活動自如，反應靈活，動作敏捷，背毛有光澤，進食及大小便正常，無異常狀態(tài)出現(xiàn)；造模后空白組大鼠體重自然增長，狀態(tài)良好，飲食及大小便正常；其余各組大鼠飲食減少，活動遲緩，拱背，反應遲鈍，背毛松散無光澤，提示造模成功。治療后與模型組比較，針刺組和埋線組大鼠飲食、體重、精神狀態(tài)、拱背情況、背毛狀態(tài)等方面均有較好改善，實驗過程中未發(fā)生動物死亡。

2.2 各組大鼠膽囊膽固醇結石成石率比較 經(jīng)解剖，大體觀察可見空白組大鼠膽汁清澈透亮；模型組大鼠全部可見有絮狀沉淀，埋線組成石率低于針刺組，可見絮狀沉淀。與模型組比較，埋線組和針刺組明顯降低了膽汁的渾濁度，抑制了膽固醇結石的形成，見表1。

表1 各組大鼠膽囊膽固醇結石成石率（n，%）

2.3 各組大鼠血清總膽固醇、甘油三酯含量比較 模型組血清總膽固醇、甘油三酯含量高于空白組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；埋線組和針刺組血清總膽固醇、甘油三酯含量低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見表2。

表2 各組大鼠血清總膽固醇、甘油三酯含量（，mmol/L）

表2 各組大鼠血清總膽固醇、甘油三酯含量（，mmol/L）

注：與空白組比較，*P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.01

3 討論

膽固醇膽石癥在中醫(yī)學中歸屬“黃疸”“脅痛”“膽脹”等范疇，以“肝郁膽逆”“脾胃虛弱”為病機[12]。現(xiàn)代研究表明[13]，膽固醇膽石癥的發(fā)病機制主要與脂質代謝相關基因表達異常、腸道吸收膽固醇增加、膽固醇轉運的載體等有關，而血清甘油三酯水平與膽結石發(fā)病也具有密切的關系[14，15]。脂代謝異常可導致膽固醇合成限速酶活化，增加肝臟膽固醇的合成，從而造成膽汁中膽固醇的過飽和狀態(tài)，影響膽汁酸、膽固醇和磷脂三者的比例，使膽固醇更易析出形成結石[16]。本研究通過觀察大鼠一般狀態(tài)、膽囊和膽管成石率，檢測分析總膽固醇及甘油三酯的含量變化，可以評估膽固醇膽石癥的治療效果。

穴位埋線是針灸的延伸和進展，以線代針，對穴位持續(xù)刺激，以激發(fā)經(jīng)絡氣血，協(xié)調機體機能、調和氣血、平衡陰陽，從而達到扶正祛邪的目的[17]?！鹅`樞·邪氣臟腑病形》記載：“膽合入于陽陵泉，膽病者……其寒熱者取陽陵泉。”故陽陵泉有通暢膽腑、清利濕熱之功；膽囊穴具有利膽通腑、清利濕熱之功，膽囊出現(xiàn)病變時，該穴為痛敏點，常為膽道疾病的定性穴；足三里為陽明經(jīng)穴，陽明經(jīng)多氣多血，且足三里為“強壯保健要穴”，對足三里進行埋線，具有健脾和胃、扶正培元、調補氣血，可增強人體免疫力；第10 胸椎夾脊可調節(jié)臟腑；故本實驗選取大鼠陽陵泉、膽囊穴、足三里、第10 胸椎夾脊共同疏泄肝膽之氣，調節(jié)臟腑，扶正祛邪。

葉露[18]研究發(fā)現(xiàn)，膽固醇膽石癥豚鼠表現(xiàn)為進食較少，皮毛干枯無澤，精神萎靡，活動緩慢。本實驗結果顯示，從大鼠的一般情況可以看出，與模型組相比較，埋線組和針刺組的飲食情況、精神狀態(tài)、拱背、背毛等情況均有明顯改善，提示穴位埋線和針刺可以緩解膽固醇膽石癥的癥狀表現(xiàn)。李炯等[19]研究發(fā)現(xiàn)肉眼可見膽囊有泥沙樣或絮狀沉淀，可視作膽囊結石生成。本實驗通過肉眼觀察膽囊及膽管的狀態(tài)提示造模成功，模型組大鼠全部成模，與模型組比較，經(jīng)穴位埋線與針刺治療后，成石率明顯下降，說明穴位埋線和針刺均可有效降低膽固醇膽石癥的成石率，且穴位埋線效果優(yōu)于針刺。

飲食中過多的膽固醇攝入可引起血液中膽固醇、甘油三酯等指標的升高，膽汁中膽固醇過飽和，隨后膽固醇結晶逐漸形成。本實驗結果顯示，膽固醇膽石癥大鼠經(jīng)治療后，總膽固醇及甘油三酯含量較模型組均有改善，其中埋線組改善最為明顯且優(yōu)于針刺組，說明穴位埋線療法可以通過刺激相應腧穴，能夠有效促進膽固醇膽石癥血清脂類代謝，降低血清膽固醇、甘油三酯含量，從而達到治療膽固醇膽石癥的目的，但其作用機制還需要進一步研究。

綜上所述，穴位埋線對于膽固醇膽結石具有良好的防治作用，為臨床開展穴位埋線防治膽固醇膽石癥提供了參考依據(jù)。