周 凡，彭 建，陳劉浦，朱凝瑜，姚高華，貝亦江，馬文君，丁雪燕

（浙江省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站，杭州310023）

0 引言

大口黑鱸(Micropterus salmoides)，俗稱加州鱸，隸屬鱸形目(Perciformes)、太陽魚科(Cehtrachidae)、黑鱸屬(Micropterus)，原產(chǎn)地北美洲，1983年引入中國(guó)廣東省開展養(yǎng)殖；具有適宜集約化養(yǎng)殖、生長(zhǎng)快、肉質(zhì)鮮美、無肌間刺、營(yíng)養(yǎng)豐富等特點(diǎn)，深受養(yǎng)殖戶和消費(fèi)者歡迎[1-2]。2019年全國(guó)大口黑鱸養(yǎng)殖產(chǎn)量已達(dá)47.78萬t[3]，是一種極具發(fā)展前景、符合養(yǎng)殖供給側(cè)調(diào)整需求的特色淡水魚。目前大口黑鱸養(yǎng)殖品種包括國(guó)家水產(chǎn)新品種‘優(yōu)鱸 1號(hào)’（品種登記號(hào)：GS-01-004-2010）[4]和‘優(yōu)鱸3號(hào)’（品種登記號(hào)：GS-01-001-2018）[5]，也有部分地區(qū)使用未選育群體養(yǎng)殖；主要養(yǎng)殖模式有池塘精養(yǎng)[6]、池塘流水“跑道”養(yǎng)殖[7-8]和工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖[9-10]等。

開展魚類不同選育品系之間生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)和抗逆性能的評(píng)估，對(duì)于提高魚類經(jīng)濟(jì)性狀遺傳改良和新品種選育，促進(jìn)優(yōu)良品系的推廣應(yīng)用具有重要的意義[11-12]。目前關(guān)于大口黑鱸不同品系之間的養(yǎng)殖性能研究較少[13]，基于循環(huán)水系統(tǒng)的養(yǎng)殖對(duì)比試驗(yàn)未見報(bào)道。本試驗(yàn)選擇大口黑鱸‘優(yōu)鱸1號(hào)’、‘優(yōu)鱸3號(hào)’，以及本團(tuán)隊(duì)搜集自浙江省衢州市瓦窯水庫(kù)的大口黑鱸野生群體（暫名為‘浙鱸2號(hào)’，2020年已選育至F4代）等3個(gè)品系，開展基于室內(nèi)循環(huán)水系統(tǒng)的養(yǎng)殖生長(zhǎng)性能和生理生化指標(biāo)對(duì)比評(píng)估，旨在為大口黑鱸的選育研究、優(yōu)良品種和配套養(yǎng)殖模式的推廣應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 養(yǎng)殖試驗(yàn)系統(tǒng)

室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)位于浙江省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站西壩綜合試驗(yàn)基地（浙江，杭州）。養(yǎng)殖魚缸材質(zhì)為玻璃纖維缸，缸體直徑1.2 m、高度0.7 m，有效養(yǎng)殖容積500 L。每個(gè)養(yǎng)殖設(shè)有獨(dú)立的進(jìn)水口和排水口，水流速為2 L/min。養(yǎng)殖尾水經(jīng)沉淀區(qū)、生物填料過濾區(qū)、增氧曝氣區(qū)、紫外燈消毒區(qū)等環(huán)節(jié)處理之后循環(huán)使用。養(yǎng)殖試驗(yàn)期間，定期向尾水處理系統(tǒng)的沉淀池中加注新水，每周視情況對(duì)魚缸清理1～2次。養(yǎng)殖水質(zhì)監(jiān)測(cè)結(jié)果為：水溫28±2℃，溶氧≥6.0 mg/L，pH 7.2～7.8，氨氮≤0.5 mg/L，亞硝酸鹽0.04～0.22 mg/L。

1.2 試驗(yàn)魚和試驗(yàn)飼料

3個(gè)品系的大口黑鱸試驗(yàn)魚由浙江省湖州市某省級(jí)良種場(chǎng)提供，其中優(yōu)鱸系列親本購(gòu)自廣東省珠江市，‘浙鱸2號(hào)’(F4)為從衢州市瓦窯水庫(kù)捕獲親本后培育和連續(xù)選育而成。所用魚種前期已經(jīng)過馴化，可以自主攝食配合飼料。試驗(yàn)魚在室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中集中暫養(yǎng)2周后進(jìn)行分組，其中大口黑鱸‘優(yōu)鱸1號(hào)’、‘優(yōu)鱸3號(hào)’、‘浙鱸2號(hào)’等3個(gè)品系各設(shè)3個(gè)重復(fù)組（分別命名為YL1、YL3和ZL2），隨機(jī)放養(yǎng)于9個(gè)養(yǎng)殖缸中，每個(gè)魚缸各30尾試驗(yàn)魚(6.08±0.12 g)。正式養(yǎng)殖試驗(yàn)8周，每天投喂時(shí)間2次，分別為上午8:00和下午17:00。每14天對(duì)試驗(yàn)魚進(jìn)行稱重并計(jì)算調(diào)整投喂量。

試驗(yàn)選用的大口黑鱸專用膨化配合飼料購(gòu)自浙江某水產(chǎn)飼料公司。以進(jìn)口美國(guó)白魚粉、大豆類蛋白、花生粕等為主要蛋白源，以魚油、豆油等為主要脂肪源。飼料基本營(yíng)養(yǎng)組成實(shí)測(cè)值為：粗蛋白47.6%、粗脂肪8.2%、粗灰分12.3%、鈣2.7%、總磷1.8%，賴氨酸3.1%。

1.3 采樣與檢測(cè)

8周養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取樣前禁食24 h，分別稱量各缸魚的體重和測(cè)量體長(zhǎng)。從每缸隨機(jī)選擇9條試驗(yàn)魚，以80 mg/L三氯叔丁醇麻醉后，用2 mL的一次性無菌注射器進(jìn)行尾靜脈取血，采用氟化鈉-草酸鉀（2%氟化鈉+4%草酸鉀）抗凝。血液樣本以6000 r/min離心10 min后收集血清；每3尾魚的血清合并為一個(gè)樣本保存于-20℃冰箱中，用于檢測(cè)血清中的葡萄糖、甘油三酯、膽固醇、皮質(zhì)醇、溶菌酶、超氧化物歧化酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、補(bǔ)體3以及免疫球蛋白G含量（南京建成生物工程研究所試劑盒）。

將采血之后的樣品魚置于冰盤上，取其背部肌肉裝自封袋于-20℃冰箱保存待測(cè)；隨后對(duì)內(nèi)臟團(tuán)及胃、腸道和腸系膜脂肪團(tuán)進(jìn)行解剖與分離。將胃和消化道內(nèi)容物剔除后，用去離子水沖洗干凈并剪成小塊，按樣品重的9倍加入預(yù)冷去離子水配制成的緩沖液，在高速組織勻漿機(jī)中冰浴勻漿，10000 r/min，4℃離心30 min，取上清液置于-80℃冰箱中保存。使用南京建成生物工程研究所試劑盒分別檢測(cè)胃和腸道的蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活性，以及肝臟的胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、堿性磷酸酶和酸性磷酸酶的活性。飼料和肌肉的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分依照國(guó)標(biāo)方法檢測(cè)：水分用常壓干燥法測(cè)定(GT/T 6435—2014)；粗蛋白用凱氏定氮法測(cè)定(GB/T 6433—2006)；粗脂肪用索氏抽提法測(cè)定(GB/T 6433—2006)；灰分用馬弗爐灼燒法測(cè)定(GB/T 6438—2007)。氨基酸檢測(cè)按國(guó)標(biāo)GB 5009.124—2016，使用HITCHI L-8900全自動(dòng)氨基酸分析儀進(jìn)行測(cè)定。

1.4 指標(biāo)測(cè)算

試驗(yàn)魚的存活率(%)、增重率(%)和特定生長(zhǎng)率(%/d)等生長(zhǎng)指標(biāo)按公式(1)～(3)計(jì)算，肥滿度(g/cm3)、臟體比(%)、肝體比(%)、腹脂率(%)以及體重變異系數(shù)(%)、體長(zhǎng)變異系數(shù)(%)等形態(tài)學(xué)指標(biāo)按公式(4)～(8)計(jì)算，飼料系數(shù)和蛋白質(zhì)效率(%)等飼料利用指標(biāo)按公式(9)～(10)計(jì)算。

式中，魚的重量、內(nèi)臟組織重量以及飼料攝入量單位均為g；體長(zhǎng)單位為cm；飼料蛋白水平單位為%。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)

采用Excel 2019和SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)本試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與分析；利用方差分析(One-way ANOVA)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，使用Turkey多重比較法檢驗(yàn)組間差異的顯著性，取P＜0.05為顯著性差異。試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示。

2 結(jié)果與分析

養(yǎng)殖結(jié)果表明，3個(gè)品系的大口黑鱸幼魚在本試驗(yàn)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)下健康狀態(tài)良好，YL1組和YL3組存活率均為100%，ZL2組在98.89%以上(P＞0.05)（表1）。各品系試驗(yàn)魚末體長(zhǎng)和末體重均無顯著差異(P＞0.05)，體長(zhǎng)變異系數(shù)和體重變異系數(shù)趨勢(shì)相同，為YL1組＞YL3組＞ZL2組。各品系試驗(yàn)魚的肥滿度、肝體比、臟體比和腸脂比等形態(tài)學(xué)指標(biāo)也不存在組間差異(P＞0.05)。經(jīng)過8周養(yǎng)殖，試驗(yàn)魚的增重率和特定生長(zhǎng)率以YL3組＞YL1組＞ZL2組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。飼料系數(shù)最高值出現(xiàn)在ZL2組，顯著高于YL1組和YL3組(P＜0.05)。蛋白質(zhì)效率的最高值和最低值分別出現(xiàn)在YL3組和ZL2組，且各品系之間存在顯著差異(P＜0.05)（表1）。

表1 大口黑鱸不同品系的生長(zhǎng)性能和對(duì)飼料利用效果的比較

表2所示為不同品系大口黑鱸背肌基本營(yíng)養(yǎng)組成。3種品系大口黑鱸肌肉的水分、粗蛋白、粗脂肪以及粗灰分等含量均不存在組間差異(P＞0.05)（表2）。

表2 大口黑鱸不同品系的背肌營(yíng)養(yǎng)組成比較（濕樣） %

表3所示為不同品系大口黑鱸肌肉氨基酸組成。經(jīng)過8周的養(yǎng)殖，大口黑鱸試驗(yàn)魚的賴氨酸等9組必需氨基酸含量、谷氨酸等7種非必需氨基酸含量均無顯著性差異(P＞0.05)；3個(gè)品系大口黑鱸肌肉的必需氨基酸總和、非必需氨基酸總和、必需氨基酸占比以及鮮味氨基酸占比也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。

表3 大口黑鱸不同品系的肌肉氨基酸組成比較（濕樣） %

大口黑鱸的消化組織酶活性變化情況如表4所示。3個(gè)品系的胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性均不存在組間差異(P＞0.05)。ZL2組腸蛋白酶活性顯著低于YL1和YL3組(P＜0.05)；而腸脂肪酶和淀粉酶活性無顯著性差異(P＞0.05)。各品系的肝臟脂肪酶、淀粉酶、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶等酶活保持穩(wěn)定，均無組間差異(P＞0.05)；但YL1和YL3組的肝臟蛋白酶活性顯著高于ZL2組(P＜0.05)，兩組之間并無顯著差異(P＞0.05)。

表4 大口黑鱸不同品系的消化酶活性的比較

對(duì)大口黑鱸不同品系試驗(yàn)魚的血清中葡萄糖、甘油三酯和膽固醇等常規(guī)指標(biāo)，以及皮質(zhì)醇、溶菌酶、超氧化物歧化酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、補(bǔ)體C3以及免疫球蛋白G等免疫指標(biāo)檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，各組間的血清相關(guān)指標(biāo)保持相對(duì)穩(wěn)定，無顯著性差異(P＞0.05)（表5）。

表5 大口黑鱸不同品系的血清生理生化指標(biāo)的比較

3 討論

3.1 大口黑鱸不同品系生長(zhǎng)性能評(píng)價(jià)

工廠化、設(shè)施化循環(huán)水養(yǎng)殖模式具有規(guī)模集約化、用水節(jié)約化，養(yǎng)殖環(huán)境可控、管理科學(xué)規(guī)范的特點(diǎn)，養(yǎng)殖魚類可獲得快速健康生長(zhǎng)，養(yǎng)成規(guī)格均勻、品質(zhì)提升等優(yōu)點(diǎn)[14-15]，是中國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)研究與實(shí)踐的一個(gè)熱點(diǎn)領(lǐng)域，也是大口黑鱸養(yǎng)殖業(yè)高效優(yōu)質(zhì)發(fā)展的一種可行技術(shù)模式。本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，室內(nèi)循環(huán)水水族系統(tǒng)養(yǎng)殖8周后，大口黑鱸‘優(yōu)鱸1號(hào)’、‘優(yōu)鱸3號(hào)’、‘浙鱸2號(hào)’等3個(gè)品系均呈現(xiàn)良好的生長(zhǎng)性能，存活率除‘浙鱸2號(hào)’組為98.89%以外，優(yōu)鱸系列兩組均為100%；特定生長(zhǎng)率在3.96～4.05之間，高于已有關(guān)于室內(nèi)養(yǎng)殖系統(tǒng)試驗(yàn)獲得的關(guān)于大口黑鱸特定生長(zhǎng)率數(shù)據(jù)(2.25～3.11)[16-18]。這可能與不同試驗(yàn)所用的初始魚規(guī)格、基礎(chǔ)飼料配方營(yíng)養(yǎng)和飼養(yǎng)管理等因素有關(guān)；不同養(yǎng)殖設(shè)施環(huán)境下的水溫、溶解氧、水體流速以及餌料獲取等方面也存在區(qū)別[19]。另據(jù)報(bào)道，在相同養(yǎng)殖條件下（池塘環(huán)境），以配合飼料養(yǎng)殖的大口黑鱸‘優(yōu)鱸3號(hào)’的生長(zhǎng)速度比‘優(yōu)鱸1號(hào)’平均提高17.1%[5]。本試驗(yàn)也觀察到‘優(yōu)鱸3號(hào)’體增重相對(duì)優(yōu)于‘優(yōu)鱸1號(hào)’和‘浙鱸2號(hào)’，末體重分別高出3.3%和7.4%，顯示出新品種具有一定的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

生長(zhǎng)一致性在一定程度上表現(xiàn)了群體內(nèi)基因的同質(zhì)性。體重和體長(zhǎng)變異系數(shù)可反映某種魚類群體生長(zhǎng)規(guī)格的一致性程度，在遺傳上則表明該群體遺傳變異程度的大小，即變異系數(shù)大則表明該群體遺傳變異較高[20]。對(duì)于養(yǎng)殖生產(chǎn)而言，體質(zhì)量變異系數(shù)則反映了成魚出池規(guī)格的差異情況[11]，體質(zhì)量變異系數(shù)越小，規(guī)格更統(tǒng)一，售價(jià)相對(duì)較高，可獲得更好的養(yǎng)殖收益。本試驗(yàn)觀察到試驗(yàn)魚末體長(zhǎng)變異系數(shù)和末體重變異系數(shù)的最低值均為‘浙鱸2號(hào)’組，表明經(jīng)過4代選育的‘浙鱸2號(hào)’群體個(gè)體間表現(xiàn)出相對(duì)較高的生長(zhǎng)一致性，顯示了良好育種潛力。本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)優(yōu)鱸系列對(duì)飼料的轉(zhuǎn)化利用效率和飼料蛋白質(zhì)利用效率方面要優(yōu)于‘浙鱸2號(hào)’，并且‘優(yōu)鱸3號(hào)’在數(shù)值上要高于其它兩個(gè)品系。已有研究指出，‘優(yōu)鱸3號(hào)’是以易攝食人工配合飼料為主要選育目標(biāo)的選育，相比于大口黑鱸‘優(yōu)鱸1號(hào)’，其更易馴食人工配合飼料，馴化時(shí)間明顯縮短，馴食成功率顯著提高，食性改良效果明顯[5,13]。

3.2 大口黑鱸不同品系營(yíng)養(yǎng)組成差異對(duì)比

肌肉營(yíng)養(yǎng)成分是衡量養(yǎng)殖魚類產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)，也是魚類新品種選育的一個(gè)重要經(jīng)濟(jì)性狀[21]。本試驗(yàn)分析了試驗(yàn)魚的肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)組成和氨基酸組成，發(fā)現(xiàn)3個(gè)品系大口黑鱸相關(guān)的營(yíng)養(yǎng)組成均無顯著性差異，粗蛋白含量高于19.10%、粗脂肪含量低于1.74%。必需氨基酸含量占總氨基酸含量的比值在0.49～0.50之間，高于FAO/WHO的35.38%標(biāo)準(zhǔn)[22]，也高于鱖魚[23]、烏鱧[24]、鱘魚[25]等特色淡水魚類。肌肉中鮮味氨基酸主要谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸和丙氨酸，其組成和含量是決定魚肉味道鮮美程度的主要指標(biāo)，本試驗(yàn)觀察到大口黑鱸3個(gè)品系的肌肉鮮味氨基酸占比非常接近，且均在0.38～0.39之間，表明大口黑鱸具有魚肉蛋白優(yōu)質(zhì)、肉質(zhì)鮮美的特點(diǎn)。

3.3 大口黑鱸不同品系消化酶活性對(duì)比

消化器官分泌的消化酶活力是魚類營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)和代謝水平變化的重要指標(biāo)[26-27]。在養(yǎng)殖環(huán)境、飼養(yǎng)條件等一致的情況下，酶活性的高低直接影響對(duì)攝入飼料營(yíng)養(yǎng)的消化和吸收效率，從而影響魚類的生長(zhǎng)發(fā)育。本試驗(yàn)觀察到大口黑鱸各品系對(duì)配合飼料的蛋白質(zhì)利用效率變化與消化組織中蛋白酶活性變化趨勢(shì)基本一致，‘優(yōu)鱸3號(hào)’組的腸道和肝臟蛋白酶活性均顯著高于‘浙鱸2號(hào)’組，這也表現(xiàn)在‘優(yōu)鱸3號(hào)’對(duì)飼料和蛋白質(zhì)利用效率的提升；類似結(jié)果在羅非魚[28]、南美白對(duì)蝦[29]的研究中也有報(bào)道。對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦不同選育家系消化酶研究表明，在養(yǎng)殖環(huán)境和管理基本一致的條件下，家系間消化酶活性主要受遺傳背景影響[30]。本試驗(yàn)中，大口黑鱸不同品系間消化酶活性差異與遺傳背景的關(guān)聯(lián)性還有待進(jìn)一步研究。

3.4 大口黑鱸不同品系血清指標(biāo)對(duì)比

魚類的免疫力與生長(zhǎng)抗病、耐捕撈和運(yùn)輸以及養(yǎng)殖容量等密切相關(guān)。血清生理生化指標(biāo)反映了魚類機(jī)體機(jī)能的健康狀況，也反映出不同品系或個(gè)體應(yīng)對(duì)環(huán)境變化調(diào)節(jié)能力和抗逆性能的差別[31]，并受制于基因遺傳作用大小的影響。對(duì)羅非魚[32]、大黃魚[33]等魚類研究發(fā)現(xiàn)不同選育品系血清中抗逆指標(biāo)存在較大差異。本試驗(yàn)檢測(cè)了大口黑鱸血清中與免疫和抗逆功能相關(guān)的10項(xiàng)指標(biāo)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各項(xiàng)指標(biāo)的組間變化不顯著，推測(cè)不同品系的抗逆性能差異較小，試驗(yàn)魚的整體健康狀況良好。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，大口黑鱸是一種較為適宜在循環(huán)水系統(tǒng)養(yǎng)殖的魚類。國(guó)家水產(chǎn)新品種大口黑鱸‘優(yōu)鱸3號(hào)’顯示出相對(duì)更好的生長(zhǎng)性能和對(duì)飼料利用效率，而‘浙鱸2號(hào)’在體增重率、肌肉營(yíng)養(yǎng)組成和個(gè)體抗逆性能等方面不亞于優(yōu)鱸品系，具有作為進(jìn)一步育種的潛力。