■羅欣然 牛 炎 侯曉曼 倪春莉 梁 菁 舒 剛

（四川農業(yè)大學動物醫(yī)學院創(chuàng)新制劑研究中心，四川成都 610030）

應激是動物機體受到一切不利因素的刺激時所引起的應答性反應，即應激綜合征[1]。外界很多因素都能引起應激，例如運輸、過熱過冷、缺乏營養(yǎng)、氣體、精神緊張等，其中運輸是最為重要的應激源之一?，F如今，畜禽養(yǎng)殖方式多為集約化養(yǎng)殖，集約化養(yǎng)殖在動物進出養(yǎng)殖場、轉群、集中屠宰前都需要運輸，從而不可避免地產生運輸應激。運輸應激是指在運輸途中的環(huán)境變化、禁水禁食、運輸過程的顛簸及人為造成的壓力等多種因素的作用下，動物機體做出的適應性反應和防御性反應[2]，當機體不能抵抗應激帶來的影響時，就會出現亞健康、疾病甚至死亡。目前，因為運輸應激而引發(fā)的畜禽疾病、致殘或死亡所造成的經濟損失巨大[3]。

應用鎮(zhèn)靜劑、電解質和氨基酸緩解運輸應激是主要治療方式，但是，化學合成藥物副作用大、藥物殘留、耐藥性等問題極大影響動物健康及畜禽產品的安全性，而傳統(tǒng)中藥處方制劑具有低殘留、低副作用、無污染、不引發(fā)藥源性疾病的特點，且價格便宜，產品易得。因此，找尋中藥抗應激藥物，對于保證畜禽健康以及發(fā)展中國傳統(tǒng)中藥有十分重要的意義。刺五加富含有機酸、氨基酸和微量元素等多種營養(yǎng)物質和多糖、黃酮等生物活性物質，具有增強免疫[4]、抗氧化[5]、抗炎[6]、抗疲勞[7]、抗腫瘤[8]等多種藥理作用；廣藿香能化濕、解暑、止嘔；茯苓有鎮(zhèn)靜、強心作用。因此，試驗以刺五加、廣藿香和茯苓作為中藥處方，將其制成復方刺五加顆粒，考察其對運輸應激的緩解作用，為將該復方制劑用于臨床抗運輸應激提供一些參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

復方刺五加顆粒的組成：刺五加（5 g/kg）、廣藿香油（0.096 g/kg）、茯苓（1 g/kg）、吡啶羧酸鉻（0.2 mg/kg）、維生素C（50 mg/kg）、維生素E（50 mg/kg）、葡萄糖（30～50 g/kg），檸檬酸鉀（0.17 g/kg）?？偪寡趸芰Γ═AOC）、總蛋白（TP）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）測定試劑盒，均購自南京建成工程生物研究所。

1.2 主要儀器設備

YP202N電子天平（上海青海儀器有限公司），BC-2800Vet全自動血細胞分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）、DNM-9602G酶標分析儀（北京普朗新技術有限公司）、RM2235石蠟切片機（徠卡微系統(tǒng)有限公司）、CX22光學顯微鏡（日本奧林巴斯）等。

2 試驗方法

2.1 試驗動物飼養(yǎng)及管理

240只健康、體重狀況相似[（46±0.5）g]的1日齡烏骨雞雛雞（由四川豐巖牧野農業(yè)發(fā)展有限公司提供），采用網架常規(guī)飼養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度（35±2）℃，相對濕度50%～60%。

2.2 試驗分組及運輸處理

試驗設計采用完全隨機設計，單因子對照試驗。選用240只1日齡天府烏骨雞，隨機分為4組，每組60只，每組4個重復，每個重復15只?？瞻讓φ战M飼喂基礎飼糧；低劑量組飼喂按照300 mg/kg添加復方刺五加顆粒的飼糧；中劑量組飼喂按照400 mg/kg添加復方刺五加顆粒的飼糧；高劑量組飼喂按照500 mg/kg添加復方刺五加顆粒的飼糧（見表1），試驗共計21 d，基礎日糧組成及營養(yǎng)水平表見表2。

表1 試驗動物分組與給藥情況

表2 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎）

試驗第21 d，各組隨機選取16只雞裝載在轉運籠中(750 mm×550 mm×270 mm)，每個籠子裝8只雞。試驗期在秋季，試驗當天的室外環(huán)境平均溫度為18℃，運輸過程中車內平均溫度為20℃，當天空氣質量優(yōu)。家禽運輸車在公路(包括紅綠燈路口和顛簸路段)上以80 km/h左右的車速進行2 h的道路運輸，期間包括緩停、急剎、啟動、轉彎和調頭等，與生產實踐中道路運輸過程盡可能相近。運輸結束后即刻解剖采樣。

2.3 生長性能的測定

每天觀察雞的健康狀況、生長情況和死亡情況，及時結算飼糧，以便將死亡雞的飼糧消耗剔除。于雛雞1、7、14、21 d時，每次09:00之前以重復單位空腹稱重，統(tǒng)計各階段試驗雛雞的平均體重、平均日采食量、平均日增重及料重比。

平均體重（BW，g）=總體重/試驗雞數

平均日增重（ADG，g）=增重/（試驗天數×試驗雞數）

平均日采食量（ADFI，g）＝飼料消耗量/（試驗天數×試驗雞數）

料重比（F/G）=飼料消耗量/增重

2.4 臟器指數及體重變化的測定

于雛雞21 d時，運輸前、后，每個重復各選2只雞，每組8只雞，稱重后靜脈放血致死，取心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟，濾紙吸干水分后，剝離脂肪和無關組織，電子天平稱重。根據雞體重，計算雞的器官指數。

臟器指數（g/kg）=器官鮮重（g）/活體重（kg）

于運輸前、后各個重復所有雞只稱重，以計算運輸前后平均體重變化。

2.5 樣本的采集與處理

于雛雞21 d時，運輸前、后每個重復各選2只雞，每組8只雞，對雛雞進行靜脈采血2 mL，將血液收集至真空收集管，室溫靜置1 h后離心收集血清，保存于-80℃冰箱備用；取血后處死動物，迅速分離取下肝臟組織用液氮速凍，保存于-80℃冰箱中備用。

2.6 血清生化指標檢測

將此前保存于-80℃冰箱中的血清樣本取出，采用微板法測定血清中鈣（Ca）的含量，采用磷鉬酸法測定血清中磷（P）的含量，采用葡萄糖氧化法測定血清中葡萄糖（Glu）的含量。

2.7 肝臟抗氧化指標檢測

將此前保存于-80℃冰箱中的肝組織取出，在冰盒上研磨后取樣進行肝臟中還原性谷胱甘肽（GSH）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、總抗氧化能力（TAOC）、丙二醛（MDA）等指標的檢測。采用HE染色評估肝臟組織病理變化。

2.8 統(tǒng)計學處理

采用Excel 2010對數據進行初步處理，采用SPSS 23.0軟件進行多重比較分析，結果用“平均值±標準差”表示，以P<0.05作為差異顯著性。

3 結果與分析

3.1 復方刺五加顆粒對烏骨雞生長性能的影響（見表3）

由表3可知，空白組與各試驗組的平均體重和平均日增重差異不顯著（P>0.05）。與空白組相比，1～7 d和1～21 d時，各試驗組的平均日采食量均顯著下降（P<0.05）；8～14 d和15～21 d時，低劑量組的平均日采食量顯著下降（P<0.05）。與空白組相比，1～7 d時，各試驗組的料重比均顯著下降（P<0.05）；1～21 d時，各試驗組的料重比均下降（P>0.05）。

表3 復方刺五加顆粒對烏骨雞生長性能的影響

3.2 復方刺五加顆粒對運輸前后烏骨雞臟器指數及體重變化的影響（見表4）

由表4可知，運輸后的空白組平均體重比運輸前空白組的有顯著下降（P<0.05），而中劑量組和高劑量組的平均體重在運輸前后變化不顯著（P>0.05）。運輸前后，各組的心臟指數變化差異不顯著（P>0.05）。運輸前后，各組的肝臟指數變化差異不顯著（P>0.05）。運輸前后，各組的脾臟指數變化差異不顯著（P>0.05）。運輸前后，各組的肺臟指數變化差異不顯著（P>0.05）。試驗結果說明復方刺五加顆粒對運輸前后烏骨雞臟器指數影響不大。

表4 復方刺五加顆粒對運輸前后烏骨雞臟器指數的影響

3.3 復方刺五加顆粒對運輸前后烏骨雞血清生化指標的影響（見表5）

表5 復方刺五加顆粒對運輸前后烏骨雞血清生化指標的影響

表5（續(xù)）復方刺五加顆粒對運輸前后烏骨雞血清生化指標的影響

由表5可知，運輸應激會造成空白組血清Ca2+濃度顯著下降（P<0.05）；運輸后的低、中、高劑量組的血清Ca2+濃度比空白組升高，且低劑量組顯著升高了13.55%（P<0.05）。說明復方刺五加顆粒有利于緩解運輸應激造成的血清Ca2+濃度的變化。運輸應激會造成血清GLU含量顯著下降（P<0.05）；運輸后的低劑量組比空白組的血清GLU含量顯著上升（P<0.05）。說明復方刺五加顆粒有利于緩解運輸應激造成的血清GLU含量的變化。運輸前后，各組血清P含量變化不大（P>0.05）。運輸應激會造成空白組血清LDH水平顯著上升（P<0.05），運輸后的低、中、高劑量組與空白組相比，血清LDH水平下降不顯著（P>0.05）。

3.4 復方刺五加顆粒對運輸前后烏骨雞肝臟抗氧化指標的影響（見表6）

表6 復方刺五加顆粒對運輸前后烏骨雞肝臟抗氧化指標的影響

由表6可知，運輸應激會造成空白組肝臟GSH含量顯著下降（P<0.05）。與運輸后的空白組相比，各試驗組的肝臟GSH含量均上升，且高劑量組顯著上升了6.40%（P<0.05）。說明復方刺五加顆粒能緩解運輸應激造成的肝臟GSH含量下降，且高劑量組效果最佳。運輸應激會造成空白組肝臟MDA含量顯著上升（P<0.05）。與運輸后的空白組相比，各試驗組肝臟MDA含量均下降，且中、高劑量組顯著下降（P<0.05）。說明復方刺五加顆粒能緩解運輸應激造成的肝臟MDA含量上升，且高劑量組效果最佳。運輸應激會造成空白組肝臟T-AOC水平均顯著下降（P<0.05）。與運輸后的空白組相比，各試驗組肝臟T-AOC含量均上升，中、高劑量組顯著上升（P<0.05）。說明復方刺五加顆粒能緩解運輸應激造成的肝臟T-AOC水平下降，且高劑量組效果最佳。運輸應激會造成空白組肝臟SOD含量均顯著下降（P<0.05）。與運輸后的空白組相比，各試驗組肝臟SOD含量均上升，高劑量組顯著上升（P<0.05）。說明復方刺五加顆粒能緩解運輸應激造成的肝臟SOD含量下降，且高劑量組效果最佳。

4 討論

4.1 復方刺五加顆粒對烏骨雞生長性能的影響

生長性能是反映肉雞生長的最直接指標，也是與肉雞養(yǎng)殖行業(yè)的經濟收益緊密相關的指標。有研究發(fā)現，刺五加提取物能促進仔豬消化系統(tǒng)的發(fā)育，提高營養(yǎng)物質消化吸收的能力，從而提高斷奶仔豬的生長性能[9]。同樣葉建萍等[10]研究也發(fā)現，在基礎飼糧中添加刺五加提取物能夠顯著提高白羽肉雞的平均日增重，降低料重比，說明刺五加提取物的添加提高了肉雞的生長性能。本研究也同樣發(fā)現刺五加復方顆粒能降低料重比，但對平均日增重影響不大，可能與選用雞的品種以及刺五加顆粒添加的劑量有關。

4.2 復方刺五加顆粒對運輸前后烏骨雞臟器指數及體重變化的影響

研究發(fā)現運輸應激會造成肉雞體重下降，這與王澤仁等[11]的研究結果一致，可能與運輸途中出現饑餓、缺水、疲勞等造成營養(yǎng)物質大量消耗有關。而使用中、高劑量復方刺五加顆粒組的肉雞在運輸前后體重變化不大，說明復方刺五加顆粒對烏骨雞運輸應激造成的體重減少有保護作用。臟器指數是反映動物機體功能狀況的一項生物學特征指標[12]。發(fā)育完全的內臟器官才能維持機體正常生理水平。心臟是維持血液循環(huán)的動力，向機體全身供應氧和營養(yǎng)物質的同時也帶走代謝廢物。肝臟是進行脂肪代謝、排毒的重要場所，同時肝臟也是動物的免疫器官之一。脾臟是主要的免疫器官，參與機體的體液免疫和細胞免疫。腎臟是機體營養(yǎng)物質代謝的主要場所，參與機體的電解質、滲透壓平衡、排泄代謝廢物[12-13]。本研究發(fā)現，刺五加復方顆粒對烏骨雞心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟的臟器指數無明顯影響，說明刺五加復方顆粒對烏骨雞無明顯負面作用。

4.3 復方刺五加顆粒對運輸前后烏骨雞血清生化指標的影響

適當的離子平衡在組織臟器功能中起關鍵作用，對確保整個機體的正常功能至關重要，一旦離子平衡被破壞，細胞損傷和臟器功能紊亂就會發(fā)生[14]。運輸應激會造成血清Ca2+的濃度下降，組織Ca2+的濃度上升，這可能與Ca2+離子通道的活性受運輸過程影響所致[15]。本研究也得出與上述一致的結果，在運輸應激之后，肉雛雞血清的Ca2+濃度顯著下降。研究表明，刺五加能影響鈣離子通道[16]。本研究也同樣發(fā)現，復方刺五加顆粒有助于運輸應激肉雞鈣離子保持穩(wěn)態(tài)。

GLU是機體代謝所需的重要能源物質，在運輸應激狀態(tài)下，為了維持機體的正常血糖平衡，肝糖原的分解就會增加，當肝糖原消耗殆盡后，血液中的GLU含量就會顯著降低[17]。本研究發(fā)現，運輸應激后肉雞血清中GLU顯著下降，而復方刺五加顆粒能緩解GLU的下降，說明刺五加顆粒有利于應激造成的血糖失衡，這可能是復方刺五加顆粒中含有刺五加多糖和葡萄糖的原因。

LDH是反映機體能量代謝的重要生化指標，當機體受到強烈刺激或劇烈運動、肌肉疲勞或肌細胞膜系統(tǒng)受損時，血清中LDH含量會顯著增加[18]。本試驗中肉雞在運輸之后，血清中LDH濃度較運輸前顯著上升，說明運輸中各種應激源對肉雞的刺激致使機體疲勞，肌肉肌細胞受損或能量供給不足，導致LDH溢出。而低、中、高劑量的復方刺五加顆粒能降低LDH含量，說明復方刺五加顆粒對運輸應激造成的疲勞有緩解作用，這與張東杰等[19]的研究結果一致。

4.4 復方刺五加顆粒對運輸前后烏骨雞肝臟抗氧化指標的影響

在生物體正常代謝過程中，活性氧（ROS）的產生和消除保持了動態(tài)平衡[20]。當細胞受到內外環(huán)境中不利因素的刺激時，ROS的產生比消除更多，使得機體內的平衡被破壞，最終導致氧化應激，對動物體產生不利影響。動物機體清除體內自由基、分解過氧化物以及清除發(fā)揮催化作用的金屬離子主要通過非酶促和酶促兩種體系，其中酶促體系則主要包含SOD和GSH等。T-AOC是反映機體酶及非酶促體系統(tǒng)的抗氧化水平高低的重要指標。MDA是動物細胞膜脂質過氧化的產物，其含量可間接反映細胞的損傷程度。本研究發(fā)現，運輸應激會造成肝臟T-AOC、SOD、GSH含量下降，MDA含量上升，即運輸應激降低了烏骨雞肝臟的抗氧化能力，這與趙泮峰[17]研究結果一致。而使用復方刺五加顆?？梢跃徑膺\輸應激造成的氧化應激，這與Kim等[21]的研究一致，這可能與刺五加含有多糖、刺五加苷等化合物有關。

5 結論

在日糧中適當添加復方刺五加顆粒可以促進烏骨雞生長性能，改善代謝水平和抗氧化功能，緩解運輸應激對烏骨雞的影響。