謝道燕 楊振國(guó) 柴建萍 倪 婧(云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所，云南蒙自 661101)

桑粉虱(PealiusmoriTakahashi)屬同翅目(Homoptera)粉虱科(Aleyrodidae)，是一種嚴(yán)重危害桑樹(shù)葉部的刺吸式口器害蟲(chóng)，在云南省蠶區(qū)普遍發(fā)生，主要為害桑樹(shù)的新梢嫩葉；桑粉虱以幼蟲(chóng)、成蟲(chóng)刺吸桑葉汁液，使葉片黃化脫落，同時(shí)其分泌物極易導(dǎo)致桑樹(shù)誘發(fā)霉污病，影響桑樹(shù)的正常光合作用，造成桑葉品質(zhì)及產(chǎn)量下降，使蠶業(yè)經(jīng)濟(jì)受損[1-2]。目前，化學(xué)防治是控制桑粉虱為害的主要技術(shù)手段之一；而用于防治粉虱類的常用農(nóng)藥對(duì)家蠶的殘留毒性較高，蠶農(nóng)在生產(chǎn)中難以較好地控制藥劑的使用和桑葉的合適采摘時(shí)間，導(dǎo)致生產(chǎn)上家蠶中毒的事故時(shí)有發(fā)生，從而對(duì)家蠶的飼養(yǎng)構(gòu)成較嚴(yán)重的威脅[3]。因此，明確粉虱類防治藥劑對(duì)桑粉虱的生物活性和對(duì)家蠶的安全性，對(duì)指導(dǎo)桑園的桑粉虱防治具有重要的意義。

溴氰蟲(chóng)酰胺(cyantraniliprole)是杜邦公司開(kāi)發(fā)的一種新型藥劑，屬于第二代魚(yú)尼丁受體抑制劑，可有效防治鱗翅目、半翅目和鞘翅目等害蟲(chóng)，因其具有高效低毒、廣譜殺蟲(chóng)、環(huán)保且內(nèi)吸性較好的特點(diǎn)而備受世界各國(guó)重視，成為殺蟲(chóng)劑研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)[4-5]。同時(shí)，該藥劑與大部分殺蟲(chóng)劑(氨基甲酸脂、有機(jī)磷類等)不存在交互抗性作用，而且針對(duì)節(jié)肢類動(dòng)物擁有較高的安全性[6]。靳改龍等[7]研究表明，10%溴氰蟲(chóng)酰胺可分散油懸浮劑對(duì)黃瓜田和茄子田Q型煙粉虱的防效分別達(dá)94.90%和75.24%。王海娜等[8]試驗(yàn)證明，溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)B型隱種和Q型隱種煙粉虱卵具有很強(qiáng)的內(nèi)吸殺卵活性和一定的觸殺殺卵活性，且對(duì)若蟲(chóng)毒力高，但對(duì)成蟲(chóng)毒力較低。林濤等[9]研究表明，用20%溴氰蟲(chóng)酰胺懸浮劑的不同濃度藥液添食家蠶2齡起蠶，96 h 后觀察其對(duì)家蠶的半致死濃度(LC50)值為0.30 mg/L，為劇毒；然而，溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑對(duì)桑粉虱的防控效果和幾個(gè)亞致死濃度對(duì)4齡、5齡家蠶主要經(jīng)濟(jì)性狀的影響和養(yǎng)蠶安全性還未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究測(cè)定了溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑不同濃度對(duì)桑粉虱成蟲(chóng)和卵的室內(nèi)毒力、對(duì)家蠶的急性毒性及其亞致死濃度對(duì)家蠶的慢性毒性，以期為蠶區(qū)桑園及周邊農(nóng)田合理使用新型酰胺類殺蟲(chóng)劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試藥劑：10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑，農(nóng)藥登記證號(hào)為PD20151140,美國(guó)杜邦公司產(chǎn)品。

供試蟲(chóng)體：桑粉虱采自云南省蒙自市草壩鎮(zhèn)地區(qū)云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所桑園內(nèi)。

供試家蠶：家蠶菁松的3齡、4齡、5齡起蠶，由云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所提供。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)桑粉虱成蟲(chóng)的活性測(cè)定 桑粉虱成蟲(chóng)室內(nèi)生物測(cè)定方法參照慕立義[10]試管藥膜法和謝道燕等[11]試驗(yàn)法并加以改動(dòng)，即先用移液槍量取10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑1 mL用清水溶解，然后再用丙酮稀釋為400.00、200.00、100.00、50.00、25.00、12.50、6.25 mg/L的7個(gè)體積質(zhì)量濃度，以丙酮為對(duì)照。在10 mL的平底試管中分別加入0.5 mL供試藥液，將試管滾動(dòng)使藥液在試管內(nèi)壁均勻分散形成藥膜，待藥液干后，每支試管內(nèi)接入20～30頭桑粉虱成蟲(chóng)。試管開(kāi)口端用棉布封口，向下傾斜35°置于條件為溫度(26±1)℃、相對(duì)濕度75%、光周期亮(L)∶暗(D)=14 h∶10 h的光照培養(yǎng)箱內(nèi)飼養(yǎng)觀測(cè)；處理5 h后檢查桑粉虱成蟲(chóng)的存活情況，在顯微鏡下用零號(hào)毛筆輕觸蟲(chóng)體，附肢不動(dòng)的成蟲(chóng)記為死亡，記錄總供試蟲(chóng)數(shù)和死蟲(chóng)數(shù)，并求出處理的校正死亡率、毒力回歸方程、LC50及95%置信限。

1.2.2 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)桑粉虱卵的活性測(cè)定 采用葉碟噴霧法[12]測(cè)定。將10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑用清水稀釋為400.00、200.00、100.00、50.00、25.00、12.50、6.25 mg/L的7個(gè)體積質(zhì)量濃度，以清水為對(duì)照。到田間采集帶有較多桑粉虱卵的新鮮桑葉，剪取一定數(shù)量帶有桑粉虱卵的葉片，分別平鋪于濾紙上，噴霧器具為Burkard標(biāo)準(zhǔn)型Potter噴霧塔，噴霧量為1.0 mL藥液，噴霧壓強(qiáng)為20 kPa，沉降時(shí)間為10 s，處理后放入墊有濕布海綿的鐵盤(pán)子里，置于溫度(26±1)℃、相對(duì)濕度75%、光周期L∶D=14 h∶10 h的光照培養(yǎng)箱內(nèi)，7 d后觀察各處理的孵化情況，直至對(duì)照處理卵孵化完為止。

1.2.3 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)家蠶的急性毒性測(cè)定 在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用食下毒葉法，將10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸浮劑用清水稀釋成7個(gè)系列濃度，即0.500 0、0.250 0、0.125 0、0.062 5、0.031 3、0.015 6、0.007 8 mg/L，以清水為對(duì)照。從桑樹(shù)上采集健康桑葉，去除葉柄后，切成細(xì)條狀待用。每個(gè)重復(fù)稱取5 g桑葉，用5 mL供試藥液噴灑拌均，晾干后放入供試飼養(yǎng)盒內(nèi)，置于溫度(26±1)℃、相對(duì)濕度75%、光周期L∶D=14 h∶10 h的飼養(yǎng)室內(nèi)飼養(yǎng)，每個(gè)濃度藥液為1個(gè)處理區(qū),每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)飼養(yǎng)20頭3齡起蠶。連續(xù)飼喂藥葉24 h和48 h后調(diào)查中毒情況,數(shù)據(jù)使用SPSS 23.0軟件處理,觀察添食毒葉24 h、48 h后的中毒癥狀，計(jì)算累計(jì)中毒死亡率，并計(jì)算出LC50值和毒力回歸方程斜率(b)。按照中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布的GB/T 31270.11—2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則 第11部分：家蠶急性毒性試驗(yàn)》[13]，以LC50的大小劃分為4個(gè)毒性等級(jí)：低毒(LC50>200.0 mg/L)；中毒(20.0 mg/L

1.2.4 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)家蠶亞致死濃度的試驗(yàn) 根據(jù)毒力回歸方程，確定溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)4齡和5齡幼蟲(chóng)的LC1、LC3、LC7、LC15、LC30等5種亞致死濃度。參照“1.2.3”項(xiàng)的方法進(jìn)行藥葉處理，以清水為對(duì)照。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40頭家蠶，分別從4齡第1次給桑起連續(xù)飼喂5種亞致死濃度藥液處理的桑葉1個(gè)齡期后改喂無(wú)毒桑葉至上蔟結(jié)繭，5齡第1次給桑起連續(xù)飼喂毒葉至上蔟結(jié)繭；觀察存活個(gè)體的各齡歷期和熟蠶體質(zhì)量，上蔟后1周調(diào)查全繭量、繭層量、繭層率、蛹體質(zhì)量等主要經(jīng)濟(jì)性狀指標(biāo)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用Excel 2003和SPSS 23.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析，采用Duncan新復(fù)極差法比較各處理間的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)桑粉虱成蟲(chóng)及卵的室內(nèi)毒力

10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑對(duì)桑粉虱成蟲(chóng)及卵的校正死亡率及室內(nèi)毒力如表1和表2所示。從表1至表2可以看出：在同一濃度下10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑對(duì)桑粉虱成蟲(chóng)的毒性強(qiáng)于對(duì)桑粉虱卵的毒性，其6.25～400.00 mg/L藥液處理對(duì)桑粉虱成蟲(chóng)和卵的校正死亡率分別介于57.01%～97.95%和13.65%～86.50%之間，其中100.00～400.00 mg/L對(duì)桑粉虱成蟲(chóng)的校正死亡率在92%以上，顯著高于其他濃度處理；10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑對(duì)桑粉虱成蟲(chóng)及卵處理48 h后的LC50分別為6.50 mg/L和53.78 mg/L。因此，10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑對(duì)桑粉虱成蟲(chóng)和卵均具有較強(qiáng)的毒殺活性，且對(duì)成蟲(chóng)的毒力顯著高于對(duì)卵的毒力。

表1 10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑不同濃度藥液對(duì)桑粉虱成蟲(chóng)和卵的校正死亡率

表2 10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑對(duì)桑粉虱成蟲(chóng)和卵的室內(nèi)毒力

2.2 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)家蠶3齡幼蟲(chóng)的毒力

用10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑不同濃度處理的帶毒桑葉飼喂3齡起蠶48 h后，其各藥劑處理區(qū)的家蠶均出現(xiàn)不同程度的中毒癥狀，主要表現(xiàn)為吐液、拒食、尾縮、體軟、膨胸、失水、呆滯、少數(shù)蠶呈“C”型和“S”型等。毒力回歸方程為y=1.67x+2.06，LC50值為0.06 mg/L。依據(jù)農(nóng)藥對(duì)家蠶的毒性等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)，10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑對(duì)家蠶屬于劇毒級(jí)農(nóng)藥(LC50≤0.5 mg/L)[13]。

2.3 溴氰蟲(chóng)酰胺亞致死濃度對(duì)家蠶生長(zhǎng)發(fā)育的影響

溴氰蟲(chóng)酰胺亞致死濃度對(duì)家蠶生長(zhǎng)發(fā)育的影響結(jié)果列于表3。從表3可以看出：4齡起蠶飼喂亞致死濃度0.002 mg/L(LC1)、0.004 mg/L(LC3)處理的桑葉后，其5齡經(jīng)過(guò)與清水對(duì)照一樣，熟蠶體質(zhì)量與清水對(duì)照相比無(wú)差異；飼喂0.008 mg/L(LC7)～0.015 mg/L(LC15)處理的桑葉的家蠶齡期經(jīng)過(guò)比對(duì)照延遲0.50～2.23 d，且熟蠶體質(zhì)量顯著低于對(duì)照；飼喂0.030 mg/L(LC30)處理的桑葉的家蠶在4齡飼喂藥葉后均表現(xiàn)出較強(qiáng)的拒食作用，在添食過(guò)程中，家蠶逐漸體縮、吐液、失水而死。5齡起蠶飼喂亞致死濃度LC1處理的桑葉后，其齡期經(jīng)過(guò)與對(duì)照一致，飼喂LC3和LC7處理的桑葉的家蠶齡期經(jīng)過(guò)比對(duì)照延遲1.02 d和2.79 d，飼喂LC1和LC3處理的桑葉的家蠶熟蠶體質(zhì)量與對(duì)照相比無(wú)差異，而飼喂LC7處理的桑葉的家蠶熟蠶體質(zhì)量與對(duì)照相比差異顯著，飼喂LC15和LC30處理的桑葉的家蠶在5齡的飼喂過(guò)程中逐漸中毒死亡。因此，亞致死濃度除4齡起蠶飼喂LC1、LC3和5齡起蠶飼喂LC1處理的桑葉的家蠶其生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)影響外，其他亞致死濃度均造成家蠶延遲上蔟且影響熟蠶體質(zhì)量，甚至造成家蠶慢性中毒死亡。

表3 10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑不同亞致死濃度藥液對(duì)家蠶生長(zhǎng)發(fā)育的影響情況

2.4 溴氰蟲(chóng)酰胺亞致死濃度對(duì)家蠶主要經(jīng)濟(jì)性狀的影響

10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸浮劑亞致死濃度對(duì)家蠶主要經(jīng)濟(jì)性狀的影響結(jié)果如表4所示。從表4可以看出：用亞致死濃度LC1～LC30的10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸浮劑處理的桑葉分別給4齡、5齡家蠶連續(xù)飼喂1個(gè)齡期后，發(fā)現(xiàn)4齡起蠶飼喂LC1～LC15和5齡起蠶飼喂LC1～LC7處理的桑葉均能正常上蔟結(jié)繭；在所有處理中其繭層率與對(duì)照相比無(wú)差異；在4齡起蠶飼喂LC1～LC3處理的桑葉其全繭量、繭層量、蛹體質(zhì)量與對(duì)照相比無(wú)差異，但飼喂LC7～LC15處理的桑葉與對(duì)照相比差異顯著；5齡起蠶除飼喂LC1處理的桑葉其全繭量、蛹體質(zhì)量與對(duì)照相比無(wú)差異外，其他處理與對(duì)照相比差異顯著；在同一濃度的處理中對(duì)5齡蠶影響更大，4齡起蠶飼喂LC30和5齡起蠶飼喂LC15～LC30處理的桑葉的家蠶在飼養(yǎng)過(guò)程中逐漸體縮失水死亡。因此，隨著添食時(shí)間的延長(zhǎng)，毒性的積累，10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸浮劑對(duì)低齡家蠶的影響相對(duì)較小，而對(duì)5齡期家蠶影響較大。

表4 10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑亞致死濃度對(duì)家蠶主要經(jīng)濟(jì)性狀的影響情況

3 討論

本試驗(yàn)研究中，10%溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑對(duì)桑粉虱成蟲(chóng)和卵均有較好的觸殺活性，特別是對(duì)成蟲(chóng)的觸殺活性較好，對(duì)卵的觸殺活性稍差，但能降低初孵幼蟲(chóng)的存活率。試驗(yàn)表明，溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑不同質(zhì)量濃度藥液處理對(duì)桑粉虱成蟲(chóng)的敏感程度差異不大，但對(duì)桑粉虱卵的敏感程度差異顯著；同一質(zhì)量濃度處理的藥液對(duì)桑粉虱成蟲(chóng)的致死率比卵高，且毒殺效果存在明顯的劑量效應(yīng)，與余慧靈等[14]用2個(gè)亞致死劑量0.016 μg/g和0.035 μg/g(LC10和LC25)藥液處理甜菜夜蛾3齡幼蟲(chóng)，發(fā)現(xiàn)溴氰蟲(chóng)酰胺亞致死劑量顯著抑制甜菜夜蛾的生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖，并表現(xiàn)出劑量效應(yīng)的結(jié)果一致。張毅[15]用溴氰蟲(chóng)酰胺1 000倍稀釋藥液灌根大棚黃瓜移栽定植苗，發(fā)現(xiàn)對(duì)黃瓜煙粉虱的防治效果可達(dá)82.05%；周操等[16]用溴氰蟲(chóng)酰胺2.415 mg/L和4.674 mg/L(LC10和LC25)藥液處理白背飛虱后，發(fā)現(xiàn)對(duì)當(dāng)代白背飛虱有致死效應(yīng)，且對(duì)后代種群的增長(zhǎng)有抑制作用。根據(jù)上述結(jié)果，在生產(chǎn)上進(jìn)行粉虱防治時(shí)首先要查明田間害蟲(chóng)的盛發(fā)期，有針對(duì)性地選用對(duì)害蟲(chóng)優(yōu)勢(shì)種群敏感性高的防治藥劑，施藥時(shí)間選擇在早晨露水干后或傍晚時(shí)分，重點(diǎn)噴施植物葉背面或灌根，以提高防治效果。為了減緩其抗性的產(chǎn)生，在防治粉虱的過(guò)程中應(yīng)注意藥劑的科學(xué)合理使用。

亞致死濃度是一個(gè)劑量區(qū)間，不同的研究對(duì)象和研究目的其取值不同[17]，而不同藥劑因作用機(jī)制、環(huán)境條件的差異對(duì)家蠶的生理和行為的影響也不同[18-19]。根據(jù)農(nóng)藥對(duì)家蠶的毒性等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)，溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑對(duì)3齡家蠶48 h后的急性毒性為劇毒級(jí)農(nóng)藥，與林濤等[9]對(duì)家蠶的試驗(yàn)結(jié)果一致；本研究中也發(fā)現(xiàn)，5個(gè)亞致死濃度藥液處理對(duì)家蠶生長(zhǎng)發(fā)育及主要經(jīng)濟(jì)性狀的影響程度不同，飼喂經(jīng)溴氰蟲(chóng)酰胺藥液處理的桑葉的4齡、5齡家蠶盡管在24 h內(nèi)未出現(xiàn)中毒死亡現(xiàn)象，但隨著添食次數(shù)的增加，家蠶拒食情況明顯，且高濃度藥液處理區(qū)的家蠶出現(xiàn)體縮失水死亡，低濃度藥液處理區(qū)的家蠶發(fā)育參差不齊；王猛等[20]用溴氰蟲(chóng)酰胺亞致死濃度0.10 mg/L、0.05 mg/L和0.14 mg/L藥液分別處理甜菜夜蛾、玉米螟和小地老虎3齡幼蟲(chóng)，藥液處理后試蟲(chóng)均表現(xiàn)出較強(qiáng)的拒食作用，且蟲(chóng)體皺縮，體節(jié)縮短；桑松等[21]用溴氰蟲(chóng)酰胺亞致死濃度0.04 mg/L(LC20)和0.07 mg/L(LC40)藥液處理斜紋夜蛾3齡初期幼蟲(chóng)72 h，幼蟲(chóng)從3齡到6齡的發(fā)育歷期分別延長(zhǎng)了2.39 d和4.32 d。本試驗(yàn)結(jié)果與上述前人研究結(jié)果相似，說(shuō)明溴氰蟲(chóng)酰胺懸乳劑低濃度藥液處理對(duì)4齡家蠶的影響相對(duì)較小，而對(duì)5齡家蠶的影響相對(duì)較大；5齡熟蠶體質(zhì)量除飼喂0.002～0.004 mg/L(LC1～LC3)處理的桑葉的家蠶與對(duì)照相比差異不顯著外，其它質(zhì)量濃度藥液處理與對(duì)照相比差異顯著(P<0.05)。

綜上所述，溴氰蟲(chóng)酰胺雖然對(duì)桑粉虱有較好的防治效果，但對(duì)家蠶的室內(nèi)毒力為劇毒級(jí)農(nóng)藥；在同一濃度的處理中對(duì)5齡蠶的影響比4齡蠶大，4齡起蠶飼喂0.030 mg/L(LC30)和5齡起蠶飼喂0.015～0.030 mg/L(LC15～LC30)處理的桑葉的家蠶在飼養(yǎng)過(guò)程中逐漸體縮失水死亡。尤其是在養(yǎng)蠶季節(jié)，不建議在桑園及周邊農(nóng)田使用。農(nóng)藥在田間使用對(duì)家蠶的實(shí)際危害程度受農(nóng)藥毒性和化學(xué)性質(zhì)、施藥方法、氣候條件等諸多因素的影響，室內(nèi)測(cè)得的農(nóng)藥對(duì)家蠶的急性毒性試驗(yàn)數(shù)據(jù)僅可作為風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的參考。