鄧江，黎相照

1.深圳市龍崗區(qū)第二人民醫(yī)院病理科，廣東 深圳 518112；2.南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院病理科，廣東 廣州 510515

結(jié)直腸癌為消化系統(tǒng)的常見(jiàn)惡性腫瘤[1]，近年來(lái)結(jié)直腸癌的發(fā)病呈年輕化趨勢(shì)，且發(fā)病率不斷增加，嚴(yán)重危及患者生命與健康。最新研究報(bào)道，早期結(jié)直腸癌的生存率顯著高于晚期患者[2]。因此早發(fā)現(xiàn)、早治療對(duì)結(jié)直腸癌患者預(yù)后有非常重要的影響。熱休克因子1 (heat shock factor 1，HSF1)是機(jī)體重要的轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)節(jié)腫瘤間質(zhì)細(xì)胞生成，參與惡性腫瘤發(fā)生[3]。臨床研究已證實(shí)HSF1在多種腫瘤中呈高表達(dá)，是評(píng)價(jià)腫瘤發(fā)展和惡化的重要指標(biāo)[4]。氨基末端激酶(amino terminal kinase，c-Jun)屬原癌基因，其可參與細(xì)胞增殖及分化，從而參與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展。二氫嘧啶脫氫酶(dihydropyrimidine dehydrogenase，DPD)為嘧啶分解代謝酶，其在結(jié)直腸癌的中表達(dá)能夠影響化療效果[5]。本研究主要探討結(jié)直腸癌中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表達(dá)水平及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院2018 年1 月至2019 年12 月 收治的114 例結(jié)直腸癌患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)[6]：經(jīng)病理檢查確診為結(jié)直腸癌；手術(shù)前未經(jīng)放化療等治療；病例資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他惡性腫瘤病史者；肝腎功能嚴(yán)重不全者；卡氏評(píng)分低于70分，預(yù)計(jì)生存時(shí)間＜3個(gè)月者；嚴(yán)重惡液質(zhì)者；結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)者。114例結(jié)直腸癌患者中男性77 例，女性37 例；年齡38～71 歲，平均(55.71±4.43)歲；腫瘤部位：直腸54例，左半結(jié)腸33例，右半結(jié)腸27例；腫瘤大小：瘤體直徑＜5 cm 45例，≥5 cm 69例；腫瘤區(qū)域淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(TNM)：Ⅰ+Ⅱ期56 例，Ⅲ+Ⅳ期58 例；分化程度：低分化41 例，中、高分化73 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：陰性56 例，陽(yáng)性58 例。均進(jìn)行為期1 年的隨訪，記錄期間死亡例數(shù)。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑 鼠抗人HSF1 單克隆抗體，批號(hào)：20170512，廠家：亞諾法生技股份有限公司；鼠抗人c-jun 單克隆抗體，批號(hào)：20170903，廠家：京中杉生物技術(shù)有限公司；鼠抗人p-c-jun 單克隆抗體，批號(hào)：20170718，廠家：京中杉生物技術(shù)有限公司；鼠抗人DPD 單克隆抗體，批號(hào)：20171006，廠家：廣州萬(wàn)孚生物技術(shù)股份有限公；通用免疫組織化學(xué)SP 試劑盒，批號(hào)：20170419，廠家：北京中世普為生物科技有限公司；DAB 免疫組織化學(xué)顯色試劑盒，批號(hào)：20171105，廠家：北京酷來(lái)搏科技有限公司。

1.2.2 檢測(cè)方法 收集結(jié)直腸癌患者癌組織(腫瘤組織均取自無(wú)壞死區(qū)域、腫瘤生長(zhǎng)良好區(qū)域)和癌旁組織(采集距離腫瘤≥5 cm 區(qū)域)，選用免疫組化染色依據(jù)SP 試劑盒，采用免疫組織化學(xué)-鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)染色法，檢測(cè)HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 表達(dá)情況。標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林液固定，常規(guī)自動(dòng)病理組織脫水機(jī)脫水透明浸蠟。組織經(jīng)石蠟包埋后，按3 μm 層厚連續(xù)切片，取硅化玻片撈片并70℃高溫烤片，常規(guī)脫蠟水洗，用高壓鍋高壓修復(fù)抗原，免疫組化染色依據(jù)SP 試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判讀 HSF1、c-Jun、p-c-Jun陽(yáng)性判定于細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕褐色或者棕黃色顆粒，DPD陽(yáng)性判定于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)棕褐色或者棕黃色顆粒。染色強(qiáng)度評(píng)分：棕褐色、棕黃色、淺黃色、無(wú)色分別統(tǒng)計(jì)為3、2、1、0分。隨機(jī)抽取每張切片組織的5個(gè)高倍鏡視野(×400)，各計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞百分比為其平均值，＞76%、51%～75%、26%～50%、6%～25%、＜5%分別統(tǒng)計(jì)為4、3、2、1、0分。最后評(píng)分取染色強(qiáng)度評(píng)分與陽(yáng)性細(xì)胞百分比乘積，≥4分表示陽(yáng)性，0分表示陰性[7]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Log-rank 檢驗(yàn)分析并比較生存情況，采用Kaplan-Meier 法繪制生存曲線圖，相關(guān)性分析采用Spearman 分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌組織與癌旁組織中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表達(dá)水平比較 HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD 在結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 結(jié)直腸癌組織與癌旁組織中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表達(dá)水平比較[例(%)]

2.2 不同臨床病理特征結(jié)直腸癌患者的HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 表達(dá)水平比較 HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD陽(yáng)性表達(dá)率與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小無(wú)明顯相關(guān)(P＞0.05)；Ⅲ+Ⅳ期、低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性者HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2、表3。

表2 不同臨床病理特征結(jié)直腸癌患者的HSF1、c-Jun表達(dá)水平比較[例(%)]

表3 不同臨床病理特征結(jié)直腸癌患者的p-c-Jun及DPD表達(dá)水平比較[例(%)]

2.3 不同預(yù)后結(jié)直腸癌患者的HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 表達(dá)水平比較 HSF1 陽(yáng)性者1 年生存率低于HSF1 陰性者，c-Jun 陽(yáng)性者1 年生存率低于c-Jun 陰性者，p-c-Jun 陽(yáng)性者1 年生存率低于p-c-Jun 陰性者，DPD 陽(yáng)性者1 年生存率低于DPD 陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表4，生存曲線見(jiàn)圖1。

表4 不同預(yù)后結(jié)直腸癌患者的HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 表達(dá)水平比較(%)

圖1 結(jié)直腸癌患者的生存曲線分析

2.4 結(jié)直腸癌患者HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD表達(dá)的相關(guān)性 結(jié)直腸癌患者HSF1 與c-Jun、p-c-Jun及DPD 均呈正相關(guān)(r=0.391、0.415、0.376，P＜0.05)；c-Jun 與p-c-Jun 及DPD 呈正相關(guān)(r=0.427、0.402，P＜0.05)；p-c-Jun與DPD呈正相關(guān)(r=0.428，P＜0.05)。

3 討論

結(jié)直腸癌為危害人類生命安全的主要惡性腫瘤之一，盡管目前結(jié)直腸癌的治療方式不斷改善，但患者5年生存率仍較低。目前有關(guān)結(jié)直腸癌的預(yù)后評(píng)價(jià)缺乏靈敏指標(biāo)，主要從病理組織類型、腫瘤臨床分期等方面進(jìn)行判定，有一定局限性[8]。

腫瘤的發(fā)生發(fā)展為多因素的復(fù)雜過(guò)程。近年來(lái)研究報(bào)道，HSF 能夠參與及穩(wěn)定腫瘤的異常增殖反應(yīng)，在腫瘤發(fā)生發(fā)展中有重要作用[9]。胡娟等[10]研究發(fā)現(xiàn)，HSF 一方面可誘導(dǎo)抑癌基因及癌基因產(chǎn)物的表達(dá)，另一方面HSF的高表達(dá)能夠提高腫瘤細(xì)胞抵抗凋亡的作用，促進(jìn)其無(wú)限增殖。臨床研究報(bào)道，HSF1在多種腫瘤疾病中呈陽(yáng)性表達(dá)，且和腫瘤預(yù)后及分期有一定關(guān)系[11]。另有研究發(fā)現(xiàn)，HSF1 和腫瘤耐藥有一定關(guān)系，HSF1 在多種耐藥腫瘤和細(xì)胞株中出現(xiàn)過(guò)表達(dá)[12]。本研究中，結(jié)直腸癌患者癌組織中HSF1陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁組織，提示HSF1 能夠參與結(jié)直腸癌的發(fā)生。浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移為惡性腫瘤的主要生物學(xué)特征，也是影響患者治療效果及預(yù)后的主要因素。本研究發(fā)現(xiàn)，臨床分期較晚、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及低分化型結(jié)直腸癌中的HSF1陽(yáng)性表達(dá)率分別高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及中、高分化型者，提示隨著結(jié)直腸癌淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移和分化程度的降低，HSF1的表達(dá)相應(yīng)增加，進(jìn)一步提示HSF1 能夠參與結(jié)直腸癌的進(jìn)展。另外本研究中，HSF1 陽(yáng)性表達(dá)者的生存率低于HSF1 陰性表達(dá)者，表明HSF1 表達(dá)能夠評(píng)估結(jié)直腸癌患者預(yù)后情況。宋旭等[13]研究也認(rèn)為，HSF1高表達(dá)和前列腺癌發(fā)生、發(fā)展有明顯相關(guān)性，且陽(yáng)性表達(dá)者的預(yù)后較差。

抑癌基因及癌基因表達(dá)失衡為腫瘤發(fā)生發(fā)展的基礎(chǔ)，原癌基因是參與細(xì)胞增殖及凋亡的基因，機(jī)體正常狀態(tài)下呈低表達(dá)，其過(guò)度表達(dá)能夠?qū)е录?xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，引起腫瘤發(fā)生。c-Jun 為機(jī)體常見(jiàn)原癌基因，c-Jun 受到刺激后可立即表達(dá)并生成轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)其他基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，影響正常細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育及分化，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化[14]。本研究中，c-Jun、p-c-Jun可在結(jié)直腸癌及癌旁組織中表達(dá)，且結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率更高，提示c-Jun、p-c-Jun 在結(jié)直腸癌組織組織中高表達(dá)，其異常表達(dá)能夠?qū)е录?xì)胞周期異常，引起腫瘤發(fā)生。隨著結(jié)直腸癌臨床分期及組織分化程度的加重，c-Jun、p-c-Jun陽(yáng)性率隨之上升，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性，提示c-Jun、p-c-Jun 異常表達(dá)可能和腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲性有關(guān)?？紤]與c-Jun能夠避免腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡及生長(zhǎng)監(jiān)控，抑制異常增殖，刺激結(jié)直腸癌組織的發(fā)生發(fā)展。同時(shí)本研究顯示，c-Jun、p-c-Jun 在結(jié)直腸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)者的預(yù)后相對(duì)較差。

有研究發(fā)現(xiàn)，DPD高表達(dá)的惡性腫瘤患者的腫瘤分期越晚，更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移[15]。又有研究報(bào)道，DPD活性缺乏能夠影響5-FU在體內(nèi)的清除，延長(zhǎng)半衰期，增加細(xì)胞毒性反應(yīng)[16]。本研究結(jié)果顯示，DPD在結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著上調(diào)，且隨著腫瘤惡性程度的加重而增加，和腫瘤的惡性生物學(xué)行為有明顯相關(guān)性，表明DPD 能夠促進(jìn)細(xì)胞惡性增殖，參與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展。且DPD 陰性表達(dá)的結(jié)直腸癌患者預(yù)后優(yōu)于DPD 陽(yáng)性表達(dá)者，考慮與DPD 活性較高能夠加快5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil，5-FU)在機(jī)體的代謝，降低5-FU的抗癌效應(yīng)，影響腫瘤組織對(duì)相關(guān)藥物的吸收效果，從而影響預(yù)后。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，HSF1能夠和c-Jun 中HSE 結(jié)合，促進(jìn)c-Jun 的轉(zhuǎn)錄翻譯[17]。另有研究表明，HSF1能夠和p-c-Jun結(jié)合，產(chǎn)生新型的異源二聚體，并可刺激DPD 轉(zhuǎn)錄，增加機(jī)體DPD 活性，導(dǎo)致5-FU 耐藥[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌組織中HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 的表達(dá)均有一定相關(guān)性，提示此類指標(biāo)能夠共同參與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，結(jié)直腸癌組織中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表達(dá)明顯上調(diào)，能夠反映腫瘤的臨床生物學(xué)行為及預(yù)后情況。但本研究隨訪時(shí)間較短，HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD對(duì)結(jié)直腸癌患者預(yù)后的影響，有待更多大規(guī)模的長(zhǎng)期研究進(jìn)一步論證和分析。