張春鳳 烏云高娃 趙麗娟 張慧★

胰腺癌是一種惡性程度很高的腫瘤，居我國(guó)腫瘤死亡率前10 位［1］。盡管手術(shù)、放射、化學(xué)等治療方法可在一定程度上延長(zhǎng)胰腺癌患者生存期，但患者預(yù)后仍不樂觀［2］。既往學(xué)者研究報(bào)道，胰腺癌患者5年生存率僅在5%左右［3］。目前臨床尚無敏感性高的檢查指標(biāo)，因此積極尋找胰腺癌新的標(biāo)志物對(duì)其早期診斷及治療具有重要的臨床價(jià)值。溶酶體相關(guān)4 次跨膜蛋白B（lysosome-associated transmembrane protein 4B，LAPTM4B）于2000年首次由熒光差異顯示技術(shù)篩選出［4］。近年來有較多學(xué)者發(fā)現(xiàn)，LAPTM4B在肝癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等惡性腫瘤中表達(dá)率較高，證實(shí)其為一個(gè)與癌癥患者預(yù)后相關(guān)的危險(xiǎn)指標(biāo)，可作為評(píng)估患者預(yù)后的重要指標(biāo)［5］。但LAPTM4B在胰腺癌的表達(dá)及與胰腺癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究較少。本研究旨在探討LAPTM4B 在胰腺癌組織中的表達(dá)水平，并分析LAPTM4B 表達(dá)水平對(duì)癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移的影響?，F(xiàn)研究報(bào)告如下。

面對(duì)當(dāng)今軍民融合程度深化、科研院所改制勢(shì)在必行的社會(huì)變化，為適應(yīng)市場(chǎng)化的要求，科院院所需轉(zhuǎn)變管理體制和運(yùn)行機(jī)制，實(shí)現(xiàn)從 “行政化”管理向“市場(chǎng)化”管理的轉(zhuǎn)變，提高科研院所整體的創(chuàng)新能力和效率，增強(qiáng)其參與市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)的活力和能力。科研院所檔案管理作為其重要組成部分，也需順應(yīng)時(shí)代發(fā)展潮流，改變傳統(tǒng)的工作模式和管理理念，樹立創(chuàng)新意識(shí)，更好地為企業(yè)發(fā)展提供檔案服務(wù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2019年1月本院收治的96例胰腺癌患者，其中男58 例，女38 例；平均年齡（54.23±4.52）歲；腫瘤直徑最大為8.3 cm，最小1.7 cm；腫瘤位于胰腺頭頸部58 例，位于體尾部38例。共取得96 份胰腺癌組織標(biāo)本，設(shè)為觀察組。并選取上述患者遠(yuǎn)離胰腺腫瘤3 cm 的癌旁正常組織設(shè)為對(duì)照組。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)影像學(xué)（MRI 或CT）檢查、術(shù)后病理檢查確診為胰腺癌［6］；②均在入院后2 周內(nèi)完成根治性手術(shù)治療；③納入研究前未接受過放、化療等輔助治療；④獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且受試者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料、影像資料、病理資料有缺失者，隨訪過程中失訪者；②合并惡性腫瘤、阿爾茲海默癥者、因精神障礙無法配合治療者；③病理檢查結(jié)果為胰腺囊性腫瘤者；④因非胰腺癌死亡者及隨訪期間失訪者；⑤納入研究前2 個(gè)月內(nèi)服用過影響LAPTM4B 水平的藥物者。

1.2 方法

1.2.1 試劑及儀器

純化兔抗人LAPTM4B-N1-99 多克隆抗體由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)系周柔麗教授實(shí)驗(yàn)室制備、純化并提供。DAB 顯色劑及PV-9000 二步法免疫組化試劑盒采購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。光學(xué)顯微鏡、顯微攝影顯微鏡均為日本olympus 公司生產(chǎn)。L.3 回旋式切片機(jī)由北京手術(shù)器械廠提供。

1.2.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

1.2.2 LAPTM4B 檢測(cè)方法

蠟塊通過切片機(jī)連續(xù)切片，組織厚度4 μm，通過免疫組化染色檢測(cè)LAPTM4B 表達(dá)情況。均經(jīng)甲醛溶液固定，石蠟包埋、載玻片泡酸、高溫滅菌PBS 緩沖液洗滌、及多聚賴氨酸涂片等處理，DAB顯色。室溫下染色時(shí)間為3～5 min，自來水沖洗，終止顯色。后將經(jīng)DAB 顯色劑顯色的LAPTM4B 組織標(biāo)本使用蘇木精復(fù)染10 s，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。最后在顯微鏡下觀察LAPTM4B 表達(dá)情況，并拍片。實(shí)驗(yàn)步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

二是《條例》在防汛抗旱、飲用水安全保障、水資源調(diào)度、取水總量控制、水功能區(qū)監(jiān)督管理、水污染防治、水域岸線管理等方面進(jìn)一步強(qiáng)化了水利、環(huán)保等相關(guān)部門以及太湖局的職責(zé)，并在優(yōu)化產(chǎn)業(yè)布局、保障飲用水供水安全及應(yīng)急事故預(yù)防處置、綜合治理政策制定及資金保障、執(zhí)行防洪和水資源調(diào)度指令、開展水污染物總量控制和削減、逐級(jí)開展水資源保護(hù)和水污染防治目標(biāo)考核等方面，強(qiáng)化了地方人民政府的綜合管理職責(zé)。通過制度促進(jìn)多地區(qū)、多部門的合作、協(xié)調(diào)，實(shí)現(xiàn)跨部門跨地區(qū)的綜合管理，并對(duì)水資源保護(hù)和水污染防治工作實(shí)施綜合考核。

以電話隨訪或門診復(fù)查的隨訪方式對(duì)本研究納入的96 例胰腺癌患者進(jìn)行為期1年的隨訪，隨訪截止時(shí)間2020年1月。將患者治療后無進(jìn)展生存期（Progression-Free-Survival，PFS）即患者開始接受治療，到觀察疾病發(fā)展或因腫瘤增大、轉(zhuǎn)移死亡時(shí)間，總生存時(shí)間（Overall Survival，OS）即患者開始治療到最后一次隨訪或患者死亡的時(shí)間詳細(xì)記錄在病歷報(bào)告本中，分析不同LAPTM4B 表達(dá)的患者生存情況。

觀察組 LAPTM4B 陽(yáng)性表達(dá)率為 73（76.04%），顯著高于對(duì)照組的52（54.17%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.803，P＜0.05）。見圖1。

1.3 隨訪

LAPTM4B 陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞為細(xì)胞漿和細(xì)胞膜著色，評(píng)分由兩位病理醫(yī)師獨(dú)立打分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)由染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞百分比綜合評(píng)定。陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分［7］：0、1、2、3、4 分；染色強(qiáng)度評(píng)分：未染色為0分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。染色指數(shù)=陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分+染色強(qiáng)度評(píng)分。染色指數(shù)＞3 分為陽(yáng)性表達(dá)；染色指數(shù)≤3 分為陰性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

NM 分期為Ⅲ～Ⅵ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為中-低分化的胰腺癌患者LAPTM4B 陽(yáng)性表達(dá)率更高（P＜0.05）。見表1。

體育課程是學(xué)校體育的中心環(huán)節(jié)。通過體育課程的教學(xué)，筆者希望達(dá)到增強(qiáng)學(xué)生體質(zhì)、增進(jìn)健康和提高他們體育素養(yǎng)的目的，設(shè)計(jì)能激發(fā)學(xué)生興趣、符合學(xué)生身心發(fā)展特點(diǎn)和技術(shù)技能學(xué)習(xí)規(guī)律的課程，使學(xué)生喜歡上體育課，并通過體育課達(dá)到體育課程學(xué)習(xí)目標(biāo)，對(duì)于實(shí)現(xiàn)學(xué)校體育教育教學(xué)目標(biāo)具有重要意義。

2 結(jié)果

2.1 LAPTM4B 在不同組織中的表達(dá)情況

目前，我國(guó)還沒有標(biāo)準(zhǔn)公共危機(jī)教育的專用教材，公共危機(jī)教育大多流于形式，主要針對(duì)在校大中小學(xué)生，忽視全民的公共危機(jī)的教育引導(dǎo)。危機(jī)管理知識(shí)在西方發(fā)達(dá)國(guó)家是公務(wù)員培訓(xùn)的必修課程，國(guó)外一些國(guó)家十分注重系統(tǒng)、全面的學(xué)校公共危機(jī)教育。日本的幼兒園會(huì)教孩子地震、火災(zāi)發(fā)生時(shí)該怎么辦，進(jìn)入小學(xué)，學(xué)生就開始接受正規(guī)的急救訓(xùn)練。每個(gè)學(xué)校設(shè)有急救的課程，如果考試不達(dá)標(biāo)，就拿不到畢業(yè)文憑。美國(guó)的許多學(xué)校也常置設(shè)一些應(yīng)急教育課程，教給學(xué)生地震、洪水發(fā)生等的應(yīng)急措施。在我國(guó)，無論是學(xué)校還是各種培訓(xùn)機(jī)構(gòu)，都缺少公共危機(jī)事件應(yīng)對(duì)和管理的教育內(nèi)容。公共危機(jī)教育要面向公眾，要使全社會(huì)都認(rèn)識(shí)到公共危機(jī)管理和緊急應(yīng)對(duì)的重要性。

圖1 LAPTM4B 在胰腺癌組織中表達(dá)（SP，×500）Figure 1 LAPTM4B in pancreatic cancer（SP，×500）

2.2 LAPTM4B 與胰腺癌病理特征的關(guān)系

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；Kaplan-Meier 生存分析LAPTM4B 表達(dá)對(duì)胰腺癌患者預(yù)后生存的影響，使用tarone 法進(jìn)行檢驗(yàn)；影響患者預(yù)后的相關(guān)因素采用非條件單因素和多因素Logistic回歸分析；以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 LAPTM4B 與胰腺癌病理特征的關(guān)系［n（%）］Table 1 Relationship between LAPTM4B and pathological features of pancreatic cancer［n（%）］

2.3 隨訪結(jié)果

96 例胰腺癌患者1年生存率為20.83%（20/96），LAPTM4B 陽(yáng)性表達(dá)的胰腺癌患者死亡率更高（P＜0.05）。見表2。

TNM 分期為Ⅲ～Ⅵ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為中-低分化、LAPTM4B 表達(dá)陽(yáng)性為影響胰腺癌患者預(yù)后生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見表4。

表2 LAPTM4B 不同表達(dá)的胰腺癌患者1年預(yù)后情況［n（%）］Table 2 1-year prognosis of pancreatic cancer patients with different LAPTM4B expression［n（%）］

2.4 LAPTM4B 表達(dá)與胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系

LAPTM4B 表達(dá)陰性及表達(dá)陽(yáng)性半數(shù)生存時(shí)間分別為（8.30±0.73）個(gè)月、（6.82±0.51）個(gè)月。生存分析顯示LAPTM4B 表達(dá)陽(yáng)性的患者生存期明顯短于LAPTM4B 表達(dá)陰性的患者，Keplanmeier 生存曲線比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖2。

圖2 ROC 曲線Figure 2 ROC curve

2.5 影響胰腺癌患者預(yù)后生存的單因素和多因素分析

脫鈣抽搐：長(zhǎng)期應(yīng)用醋酸可的松等，可發(fā)生鈣、鐵缺乏，發(fā)生抽搐。若與維生素D和鈣劑合用，則可預(yù)防脫鈣和抽搐。

表4 影響胰腺癌患者預(yù)后生存的單因素和多因素分析Table 4 univariate and multivariate analysis of prognostic factors in patients with pancreatic cancer

3 討論

由于胰腺位置隱蔽，在患者表現(xiàn)出臨床癥狀時(shí)，腫瘤多已發(fā)展至中晚期，手術(shù)根治難度大，患者仍面臨術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，且預(yù)后情況不理想。癌細(xì)胞浸潤(rùn)、侵襲及轉(zhuǎn)移是胰腺癌患者死亡的主要原因［8］。

LAPTM4B是一種新型癌基因，廣泛表達(dá)于心臟、骨骼肌等組織中［9］。該基因定位于8q22.1 染色體上，有典型的溶酶體定位信號(hào)集，因此被命名為溶酶體相關(guān)4 次跨膜蛋白B［10］。研究發(fā)現(xiàn)，LAPTM4B 過表達(dá)后，會(huì)抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，其與肝癌、肺癌、乳腺癌等疾病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)具有顯著相關(guān)性［11-12］。本研究采用免疫組化染色法，比較胰腺癌組織及癌旁正常組織中的LAPTM4B 水平，發(fā)現(xiàn)胰腺癌組織中的LAPTM4B陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，這與既往學(xué)者報(bào)道結(jié)果一致［13］。

Roth 等學(xué)者［14］通過蛋白印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，LAPTM4B 的表達(dá)強(qiáng)度與肝癌細(xì)胞的病理學(xué)分級(jí)有關(guān)，高分化肝癌組織中LAPTM4B 表達(dá)較低，中-低分化肝癌組織中LAPTM4B 表達(dá)量較高。Sun Y 等學(xué)者［15］報(bào)道，乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞漿及細(xì)胞膜上存在LAPTM4B 過表達(dá)，且LAPTM4B 表達(dá)與乳腺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期密切相關(guān)，因此認(rèn)為L(zhǎng)APTM4B 參與乳腺癌細(xì)胞體外增殖、遷移及侵襲的生物學(xué)行為，并具有抗凋亡作用。國(guó)外學(xué)者經(jīng)細(xì)胞周期分析、細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白表達(dá)的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)LAPTM4B 的過表達(dá)明顯促進(jìn)了人膽囊癌細(xì)胞的體外增殖能力［16］。本研究納入的96 例胰腺癌患者1年生存率為20.83%（20/96），LAPTM4B 陽(yáng)性表達(dá)的胰腺癌患者死亡率更高，提示LAPTM4B 陽(yáng)性表達(dá)的患者預(yù)后更差。在腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移的過程中，LAPTM4B 過表達(dá)會(huì)刺激腫瘤細(xì)胞分泌蛋白酶降解基底膜和基質(zhì)，部分腫瘤細(xì)胞穿越受損的基底膜后侵入淋巴或血液，繼而隨著淋巴或血液循環(huán)，以同樣的方式侵出淋巴管或血血管，加速病灶轉(zhuǎn)移［17］。

在尋常百姓的理解中，刑事案件通常是與“人命”掛鉤的，也就是我們常說的“命案”。所以法院的法官在面對(duì)“命案”時(shí)，往往都是慎之又慎，而且對(duì)當(dāng)事雙方的調(diào)解工作也十分重視。但是俗話說得好：“人命大于天?！薄懊浮钡恼{(diào)解工作卻不是那么好做的。

本研究還發(fā)現(xiàn)，APTM4B 陽(yáng)性表達(dá)患者生存期要顯著短于陰性表達(dá)的患者，這與Petti 等學(xué)者［18］研究結(jié)果相一致。本研究經(jīng)非條件多因素Logistic 回歸模型進(jìn)一步分析，得出：TNM 分期為Ⅲ～Ⅵ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為中-低分化、LAPTM4B 表達(dá)陽(yáng)性為影響胰腺癌患者預(yù)后生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可見LAPTM4B 表達(dá)升高均與與腫瘤發(fā)生相關(guān)，可作為預(yù)測(cè)胰腺癌患者預(yù)后的指標(biāo)。

綜上所述，胰腺癌組織中LAPTM4B 陽(yáng)性表達(dá)率高，與TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度密切相關(guān)。LAPTM4B 可能參與了胰腺癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的過程，LAPTM4B 能否作為治療胰腺癌的新靶點(diǎn)，有待深入研究。