陳開訓(xùn) 孫鵬搖 侯昌霞

膀胱尿路上皮癌屬于泌尿系統(tǒng)常見惡性病變，經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查［1］，全球每年約有40 萬新發(fā)膀胱癌，且隨著人口老齡化加劇和環(huán)境污染日益嚴(yán)重，膀胱癌患病率逐年上升，由于該病死亡率較高，故需盡早診療［2］。目前膀胱癌主要診斷手段為膀胱鏡活檢和尿脫落細胞檢查，其中膀胱鏡活檢雖具有較高準(zhǔn)確率，但屬于有創(chuàng)操作，容易引起出血、尿路感染等并發(fā)癥，故不可首推；尿脫落細胞檢查雖是無創(chuàng)操作，但診斷敏感性低，缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，容易受其他病變影響，因此也不可作為首推。而當(dāng)下合理選擇靈敏性高、操作簡便的篩查方式是臨床研究重點。通過調(diào)查以往研究，學(xué)者發(fā)現(xiàn)［3］膀胱癌組織高表達蛋白質(zhì)在膀胱癌中具有一定表達性，其中尿液Dachshund 同源基因2（DACH2）、骨橋蛋白（Osteopontin；OPN）、粘蛋白7（Mucoprotein；MUC7）與膀胱尿路上皮癌的惡性生物學(xué)行為呈正相關(guān)，但相關(guān)研究報道較少。而本文旨在探索尿液OPN、DACH2、MUC7 在膀胱尿路上皮癌發(fā)生、發(fā)展中表達情況。報道如下。

1 資料和方法

1.1 資料

分析本院的96 例膀胱尿路上皮癌患者基本資料，符合《赫爾辛基宣言》的倫理審查，并將其作為觀察組。男性58 例，女性38 例，年齡平均（54.46±10.12）歲；病程平均（12.35±3.21）個月；病理分級［4］：低級別癌55 例，高級別癌41 例。再選取同期48 例健康體檢者為對照組，男性28 例，女性20例，年齡平均（54.32±10.22）歲，兩組性別、年齡比較無統(tǒng)計差異（P＞0.05）。此次試驗在2018年8月至2021年3月期間開展。納入標(biāo)準(zhǔn)：①觀察組經(jīng)病理學(xué)檢查，確診為膀胱尿路上皮癌［4］，且存在尿痛、尿急、尿頻等膀胱刺激癥狀，臨床資料齊全；②回顧性分析臨床資料齊全的健康體檢者。兩組排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝腎功能異常、血液疾病、免疫系統(tǒng)疾病者；②合并感染、其他腫瘤者；③臨床資料不齊或因中途轉(zhuǎn)院導(dǎo)致病案缺失者。

病理分級標(biāo)準(zhǔn)［4］：高級別癌：乳頭結(jié)構(gòu)纖細、分枝、融合，細胞層次厚度不一，排列紊亂，常缺乏黏附性，細胞核增大，大小不一，形態(tài)多樣化，可見多個突出的核仁，病理性核分裂象。低級別癌：乳頭纖細、融合，細胞層次有極向，輕度細胞擁擠和極向消失，細胞核大小不一，形態(tài)呈卵圓形、圓形，大小輕度不一，核仁通常不明顯，偶見有絲分裂象。

1.2 方法

OPN、MUC7 檢測方式：抽取受檢者10 mL 晨起首次潔凈尿，離心處理，離心15 min，1 000 r/min，r=75 mm，取上清檢測，使用美國THERMO 公司提供Flash3001 型號全自動多功能酶標(biāo)儀檢測OPN、MUC7，予以酶聯(lián)免疫法。

DACH2 檢測方式：留取1mL 清潔中段尿，按照1∶100 比例加入牛血清白蛋白溶液60 g/L，15 min 內(nèi)對上清進行分離，放于冰箱（-20℃）保存。首先選取0.1 mL 尿樣分別加入0.1 mL 標(biāo)記抗原和0.1 mL 抗體，混勻，溫育3 h（37℃），形成結(jié)合復(fù)合物，加入0.5 mL 分離劑15 min 后，離心20 min，丟棄未結(jié)合物質(zhì)，加入化學(xué)發(fā)光底物，使用西安儀器廠提供XH-6010 γ 射線計數(shù)儀檢測DACH2。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件處理，符合正態(tài)分布的計量資料用（）表示，行t檢驗，計數(shù)資料用n（%）表示，行χ2檢驗；病理分級與OPN、MUC7、DACH2相關(guān)性采用Spearman 模型分析；預(yù)測價值用ROC 曲線分析，當(dāng)P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組實驗室指標(biāo)比較

觀察組OPN、MUC7、DACH2 高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組實驗室指標(biāo)對比（±s）Table 1 Comparison of 2 groups of laboratory indicators（±s）

表1 兩組實驗室指標(biāo)對比（±s）Table 1 Comparison of 2 groups of laboratory indicators（±s）

組別觀察組對照組t 值P 值n 96 48 OPN（ng/mL）70.46±4.15 34.15±3.62 51.577＜0.001 MUC7（ng/mL）15.16±3.68 10.22±1.19 9.053＜0.001 DACH2（ng/mL）7.46±1.16 2.13±0.25 31.419＜0.001

2.2 ROC 曲線分析

經(jīng)ROC 曲線分析，OPN、MUC7、DACH2 早期預(yù)測膀胱尿路上皮癌的AUC 分別為0.931、0.911、0.911，將OPN、MUC7、DACH2 納入Logistic 回歸分析，根據(jù)回歸結(jié)果中的回歸系數(shù)值擬合三項聯(lián)合診斷的數(shù)值計算公式：三項聯(lián)合=OPN +（-1.026）/（-0.134）*MUC7+（-0.103）/（-0.134）*DACH2，經(jīng)SPSS22.0 統(tǒng)計得出聯(lián)合數(shù)據(jù)；進一步分析顯示，三項聯(lián)合早期預(yù)測膀胱尿路上皮癌的AUC 為0.985。見表2。

表2 分析三項指標(biāo)預(yù)測膀胱尿路上皮癌的AUC 值Table 2 Analysis of three indicators to predict the AUC value of bladder urothelial carcinoma

依據(jù)AUC 及標(biāo)準(zhǔn)誤，采用Z檢驗AUC 差異。如三項聯(lián)合與OPN 的AUC 比較：Z=（0.985-0.931）/（0.007*0.007+0.032*0.032）^（0.5）=1.648，P值=［1-NORMSDIST（1.016）］*2=0.098；三項聯(lián)合與MUC7的AUC 比 較：Z=2.850，P=0.004；三 項 聯(lián) 合 與DACH2 的AUC 比較：Z=2.850，P=0.004。見圖1。

圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curve

表4 分析三項指標(biāo)預(yù)測嚴(yán)重程度的AUC 值Table 4 Analysis of the AUC value of the three indicators to predict the severity

2.3 不同病理分級的實驗室指標(biāo)比較

高級別癌患者OPN、MUC7、DACH2 高于低級別癌者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 觀察組不同病理分級的OPN、MUC7、DACH2 指標(biāo)比較（±s）Table 3 Comparison of OPN，MUC7 and DACH2 indexes of different pathological grades in observation group（±s）

表3 觀察組不同病理分級的OPN、MUC7、DACH2 指標(biāo)比較（±s）Table 3 Comparison of OPN，MUC7 and DACH2 indexes of different pathological grades in observation group（±s）

組別高級別癌低級別癌t 值P 值n 41 55--OPN（ng/mL）75.65±3.26 64.13±3.18 17.370＜0.001 MUC7（ng/mL）16.98±2.87 13.63±1.22 7.776＜0.001 DACH2（ng/mL）8.95±1.11 6.65±1.13 9.939＜0.001

2.4 分析相關(guān)性

經(jīng)Spearman 法分析，病理分級與OPN、MUC7、DACH2 呈正相關(guān)性（r=0.853；P＜0.001）、（r=0.652；P＜0.001）、（r=0.714；P＜0.001）。

2.5 ROC 曲線分析

經(jīng)ROC 曲線分析，OPN、MUC7、DACH2 早期預(yù)測膀胱尿路上皮癌病理分級嚴(yán)重程度的AUC分別為0.933、0.88、0.917，將OPN、MUC7、DACH2納入Logistic 回歸分析，根據(jù)回歸結(jié)果中的回歸系數(shù)值擬合三項聯(lián)合診斷的數(shù)值計算公式：三項 聯(lián) 合=OPN +（- 0.471）/2.287*MUC7 + 0.081/2.287*DACH2，經(jīng)SPSS22.0 統(tǒng)計得出聯(lián)合數(shù)據(jù)；進一步分析顯示，三項聯(lián)合早期預(yù)測疾病嚴(yán)重程度的AUC 為0.980。見表4。

依據(jù)AUC 及標(biāo)準(zhǔn)誤，采用Z檢驗AUC 差異。如三項聯(lián)合與OPN 的AUC 比較：Z=（0.980-0.933）/（0.0018*0.0018+0.036*0.036）^（0.5）=1.304，P值=［1-NORMSDIST（1.016）］*2=0.192；三項聯(lián)合與MUC7 的AUC 比較：Z=2.379，P=0.016；三項聯(lián)合與DACH2的AUC比較：Z=2.096，P=0.036。見圖2。

圖2 ROC 曲線Figure 2 ROC curve

3 討論

膀胱癌發(fā)病率位居全世界第四位，是泌尿系統(tǒng)常見惡性腫瘤，膀胱尿路上皮癌占據(jù)膀胱癌發(fā)病率的90%，具有預(yù)后差、病情進展快、惡性程度高特點，存在多種變異性，死亡率較高，故需盡早開展診療［5］。近年來，腫瘤標(biāo)記物逐漸步入臨床，雖具有性價比高、操作簡便等優(yōu)勢，但診斷結(jié)果容易受到多種因素影響，且敏感性未達到預(yù)期效果，故需另選擇簡便、可靠的檢測方式，以便為疾病判定早日提供依據(jù)［6］。

MUC 是一類高分子量糖蛋白，由泌尿生殖道、呼吸道、消化道等腺上皮合成的蛋白，具有多種生物學(xué)功能，可在不同基因和蛋白表型中發(fā)揮作用。MUC7 是粘蛋白家族中一員，在人染色體中位于4q132q21，分子量370000，編碼基因表達核心由357個氨基酸組成，常存在于結(jié)膜和唾液腺中［7］。在本次結(jié)果中，觀察組MUC7 高于對照組，說明MUC7在膀胱癌患者中具有較高表達性。推測原因是，粘蛋白可改變細胞間相互黏附特性，發(fā)揮潤滑作用，有助于癌細胞浸潤生長，雖然適量的粘蛋白在膀胱組織中，能夠發(fā)揮一種物理性保護屏障，減少酶、毒素、微生物對黏膜損害，抑制結(jié)晶微粒和細菌黏附，保護膀胱上皮細胞，但當(dāng)上皮組織發(fā)生癌變時，MUC7 含量可明顯上升，形成一種空間，阻礙封閉細胞表面抗原，一旦癌細胞進入淋巴系統(tǒng)和血液，容易存活，并形成轉(zhuǎn)移灶［8］。而本次高級別癌患者MUC7 高于低級別，從而論證此項說法，MUC7 表達過量可能與腫瘤病變分級、浸潤有關(guān)，在膀胱尿路上皮癌患者疾病發(fā)生、發(fā)展中具有一定影響性。

OPN 最早是在1979年發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白，由惡性上皮細胞分泌，屬于多功能磷酸化糖蛋白［9］。苗德芳［10］學(xué)者在文中提到OPN 在直腸腺癌發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后中均具有一定影響性。本次結(jié)果提示OPN對膀胱癌診斷具有潛在價值。而異常表達可能與促進細胞因子黏附、癌細胞趨化性轉(zhuǎn)移、腫瘤血管生成有關(guān)［11］。同時高級別癌患者OPN 高于低級別癌患者，說明OPN 含量變化可受到病理分級影響。推測原因是，OPN 能夠通過激活EGER，使得下游信號通路改變，活化絲裂原活化蛋白激酶、磷脂酰肌醇3 激酶，促進腫瘤血管生成，加速癌細胞增殖［12］。因此有學(xué)者認為［13］，可通過研究OPN 導(dǎo)致腫瘤發(fā)生發(fā)展機制，為治療腫瘤提供新的靶點。

DACH基因主要是編碼與生殖盤發(fā)育相關(guān)蛋白，DACH2 在苗勒管內(nèi)有表達［14］。本次結(jié)果說明DACH2 在膀胱尿路上皮癌患者中存在不同表達含量，且DACH2 表達含量與病理分級有關(guān)，隨著病理分級越嚴(yán)重，DACH2 含量升高越明顯。推測原因是DACH2 能夠借助患者自身的內(nèi)源性Smad4 和Ncor 相互作用，導(dǎo)致下游信號靶分子表達下調(diào)，抑制TGF-β 信號通路傳遞，促使癌變細胞增殖、分裂［15］。經(jīng)Spearman 法分析，病理分級與OPN、MUC7、DACH2 呈正相關(guān)性，說明上述指標(biāo)均參與了膀胱尿路上皮癌患者整個致病過程。

綜上所述，OPN、MUC7、DACH2 參與了膀胱尿路上皮癌患者發(fā)生、發(fā)展全過程，作為新型預(yù)測指標(biāo)具有良好應(yīng)用前景，目前已逐漸被更多學(xué)者重視，但本研究尚未探討指標(biāo)之間相互影響、作用性，故關(guān)于OPN、MUC7、DACH2 指標(biāo)之間相關(guān)性還有待深入研究。