湯 電，鄭江濤，李奇潤，譚 濤

[禮藍(上海)動物保健有限公司，上海 200003]

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 所需材料

食鹽，尿素，生理鹽水，一次性乳膠手套，一次性水杯，記號筆，研缽，醫(yī)用紗布，50 mL燒杯(或輸精瓶)若干，膠頭滴管(或移液器帶吸頭)，載玻片，蓋玻片，光學顯微鏡。

1.1.2 溶液制備

⑴飽和鹽水溶液的配制：每升水(加熱)中加入380 g食鹽，充分攪拌直至完全溶解，做好標記備用。

⑵尿素溶液的配制：每升水(加熱)中加入1 000 g尿素，充分攪拌直至完全溶解，做好標記備用。

1.1.3 糞便樣品采集

2021年3月，湖南省婁底市某規(guī)模化豬場的仔豬感染等孢球蟲。選取7～21日齡仔豬所在產(chǎn)床，收集不同物理性狀的新鮮糞便，裝入一次性水杯中，將從每窩或每個產(chǎn)床采集的糞便裝入同一個杯子中，作為1份樣品供檢測，每份樣品收集3 g～5 g，記錄仔豬日齡和對應(yīng)母豬的耳號，共采集樣品30份。

1.2 方法

⑴研磨：將糞便樣品倒入研缽中，均勻研磨成糊狀，使糞便中的球蟲卵充分釋放出來。

⑵分組：將研磨后的糞便樣品一分為二，分別用兩種溶液攪拌溶解。

⑶過濾：將醫(yī)用紗布疊成4～6層，用于過濾研磨后的糞便樣品，球蟲卵囊可穿過紗布進入濾液，隨后棄殘渣，取濾液。

⑷漂?。簩V液搖勻，倒入燒杯(或輸精瓶)中，加入相應(yīng)的溶液，確保燒杯(或輸精瓶)中的溶液滿而不溢。加入飽和鹽水溶液的燒杯(或輸精瓶)靜置30 min，加入尿素溶液的燒杯(或輸精瓶)靜置10 min。

⑸制片：用膠頭滴管(或移液器)分別從燒杯(或輸精瓶)所盛溶液液面的不同點吸取少量(約20 μL)液體，并將液體滴在載玻片上，蓋上蓋玻片，做好標記待檢，注意在蓋蓋玻片時不要產(chǎn)生氣泡。

⑹鏡檢：用光學顯微鏡觀察載玻片，在10×10倍的視野中，可在陽性糞便樣品中找到綠豆般大小的圓形或橢圓形疑似球蟲卵囊。隨后切換至10×40倍視野，逐個觀察，拍照記錄。

2 結(jié)果與結(jié)論

2.1 鏡檢結(jié)果

(1)鏡下視野：在顯微鏡視野中，飽和鹽水溶液組的糞便樣品濾液含有較多的蛋白、氣泡等雜質(zhì)，嚴重干擾球蟲卵囊的觀察，甚至存在卵囊被雜質(zhì)掩蓋而未被發(fā)現(xiàn)的情況 (圖1)；而尿素溶液組的糞便樣品濾液含雜質(zhì)較少，鏡下視野清晰，便于觀察球蟲卵囊(圖2)。

⑵檢出率：在30份樣品中，飽和鹽水溶液組檢出5份有球蟲卵囊(陽性樣品)，尿素溶液組檢出9份有球蟲卵囊(陽性樣品)，尿素溶液組的陽性檢出率高于飽和鹽水溶液組的。

2.2 小結(jié)

在兩種常用檢測方法中，尿素溶液漂浮法所需的靜置時間短，樣品濾液在顯微鏡下視野清晰、雜質(zhì)少，檢測耗時短，綜合而言優(yōu)于飽和鹽水漂浮法。

3 討論

按要求采樣是關(guān)系能否準確檢測的前提。在生產(chǎn)一線，常常會遇到采樣人員誤以為只需采集腹瀉糞便樣品的情況。由于仔豬腹瀉癥狀和糞便排卵的相關(guān)性不明顯[1]，正確的采樣方法是要盡可能涵蓋產(chǎn)床上各種不同物理性狀(干燥、糊狀、水樣、不同顏色)的糞便(圖3)，每窩或每個產(chǎn)床采集3～5個點，每個糞便點采集1 g～2 g，隨后匯合于同一個容器中，作為一個樣品。采集的糞便限于7～21日齡仔豬的。

在對糞便樣品進行處理的過程中，過濾時為了減少球蟲卵囊漂浮而最后留在紗布上，需要邊過濾邊攪動紗布上的固液混合物。濾液漏干后，再用溶液沖洗固體殘渣，同時過濾一次。

由于哺乳仔豬的消化系統(tǒng)發(fā)育不完全，不能完全吸收腸道中的脂肪、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)，再加上機體的抵抗力弱，消化道很容易受到損傷，導致未消化的脂肪、蛋白質(zhì)等隨糞便一起排出。在處理糞便樣品的過程中，飽和鹽水使蛋白質(zhì)發(fā)生鹽析，球蟲卵囊在溶液中與蛋白質(zhì)和其他有機物雜質(zhì)一起上浮，導致卵囊的上浮速度減慢，因此在對飽和鹽水處理組的樣品濾液進行鏡檢前需要靜置至少30 min，才易于在液面收集到卵囊。鹽析的蛋白質(zhì)懸浮在鹽水溶液中不易沉降，脂肪也漂浮于液面，肉眼可見明顯的分層現(xiàn)象(圖4)。液面取樣導致顯微鏡下的視野中雜質(zhì)很多。

尿素能使糞便中的蛋白質(zhì)變性凝聚而沉淀，凝聚后的蛋白質(zhì)不易漂浮，靜置時糞便樣品濾液的分層現(xiàn)象不明顯(圖4)。尿素溶液處理組糞便樣品的濾液不僅所需的靜置漂浮時間比鹽水處理組的短，而且進行鏡檢時樣品濾液中的雜質(zhì)少，視野清晰。由于有效地排除了有機物雜質(zhì)的干擾，尿素溶液漂浮法的陽性檢出率更高。據(jù)2013年金麗珠等[2]報道，該方法的陽性檢出率比飽和鹽水漂浮法的高出30%～60%。

綜上所述，在現(xiàn)場對仔豬的糞便進行等孢球蟲檢測時，尿素溶液漂浮法明顯優(yōu)于飽和鹽水漂浮法。