龔愛紅，王繪翔，李彩虹，張振國(guó)（大連市皮膚病醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧大連 116021）

梅毒血清固定的定義目前國(guó)際上仍無統(tǒng)一認(rèn)識(shí)。一般認(rèn)為，梅毒患者經(jīng)正規(guī)治療后，臨床癥狀消失，且無新發(fā)感染，亦無神經(jīng)梅毒發(fā)生，但梅毒螺旋體非特異性抗體滴度下降至一定程度后即不再下降，而長(zhǎng)期維持在低滴度水平，此現(xiàn)象稱為梅毒血清固定［1］。淋巴細(xì)胞是機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答功能的重要細(xì)胞成分。機(jī)體正常情況下，各種淋巴細(xì)胞亞群（T 淋巴細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞、NK 細(xì)胞）保持一定的數(shù)量和比例，相互作用，穩(wěn)定調(diào)節(jié)，維持著機(jī)體正常的免疫功能；當(dāng)不同的淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量及功能發(fā)生異常改變時(shí)，機(jī)體免疫平衡遭到破壞，甚至導(dǎo)致疾病的發(fā)生。本研究主要觀察梅毒血清固定型的發(fā)生與機(jī)體免疫狀態(tài)的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2019年5月至2020年11月在大連市皮膚病醫(yī)院接受治療的梅毒血清固定患者48例，其中男性29例、女性19例，平均年齡55.0歲；快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR）滴度轉(zhuǎn)為陰性的治療有效的梅毒患者29 例，其中男性18 例、女性11例，平均年齡51.3歲；體檢健康者30 例，其中男性13例、女性17例，平均年齡51.7歲；梅毒血清固定患者和治療有效的梅毒患者腦脊液性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（VDRL）、梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）均呈陰性，血清人免疫缺陷病毒抗體（HIV-Ab）檢測(cè)均呈陰性。體檢健康者外周血VDRL、TPPA和HIV-Ab均呈陰性。各組年齡和性別差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。

1.2 主要試劑及儀器 BriCyte E6 流式細(xì)胞分析儀（深圳邁瑞公司），旋渦震蕩混勻器（江蘇天翎儀器公司），流式管（浙江拱東醫(yī)療器械公司）。CD3／CD4／CD8／CD45 四色抗體、CD3／CD19／CD16＋56／CD45四色抗體、溶血素（深圳邁瑞公司）等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)本采集 通過靜脈穿刺采集外周血液，EDTA-K2抗凝，室溫（20～25 ℃）保存，4 h 內(nèi)完成淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)。

1.3.2 標(biāo)本處理與檢測(cè) 吸取20 μL 四色試劑加入試管底部；吸取50 μL EDTA-K2抗凝靜脈血加入試管底部（避免將血樣沾到試管壁上）；試管在旋渦混勻器上輕旋混勻，室溫（20～25 ℃）避光溫育15 min；向試管中加入450 μL 稀釋后的溶血?jiǎng)谛郎u混勻器上輕旋混勻，室溫（20～25 ℃）避光溫育15 min。觀察CD45／SSC 散點(diǎn)圖、CD3／CD19 散點(diǎn)圖、CD3／CD16＋56 散點(diǎn)圖及CD45／SSC 散點(diǎn)圖、CD3／CD4散點(diǎn)圖、CD3／CD8散點(diǎn)圖并設(shè)門，混合標(biāo)本并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血各群淋巴細(xì)胞的表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。正態(tài)分布的計(jì)量資料用表示，3 組間比較用方差分析，組間兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

通過對(duì)梅毒血清固定型患者、梅毒治療有效患者和體檢健康者外周血淋巴細(xì)胞相對(duì)計(jì)數(shù)和絕對(duì)計(jì)數(shù)比較（表1、表2）發(fā)現(xiàn)，血清固定組、梅毒治療有效組外周血中的B 淋巴細(xì)胞相對(duì)計(jì)數(shù)和絕對(duì)計(jì)數(shù)較健康對(duì)照組少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與健康對(duì)照組比較，梅毒血清固定患者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD4＋T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及B 細(xì)胞計(jì)數(shù)均較少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）；而血清固定組與梅毒治療有效組各細(xì)胞相對(duì)計(jì)數(shù)及絕對(duì)計(jì)數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。

表1 梅毒血清固定患者與健康人對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞相對(duì)計(jì)數(shù)比較（）

表1 梅毒血清固定患者與健康人對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞相對(duì)計(jì)數(shù)比較（）

注：*，與健康對(duì)照組比，P＜0.05。

表2 梅毒血清固定患者與健康人對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)比較（／μL，）

表2 梅毒血清固定患者與健康人對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)比較（／μL，）

注：*，與健康對(duì)照組比較，P＜0.05。

3 討論

目前血清固定發(fā)生的原因尚不明確，其機(jī)制研究主要集中于3個(gè)方面：一是血清固定患者的細(xì)胞免疫異常，出現(xiàn)嚴(yán)重的免疫失衡及細(xì)胞免疫抑制導(dǎo)致清除梅毒螺旋體的能力減弱；二是梅毒螺旋體能夠逃避機(jī)體免疫反應(yīng)，造成慢性感染；三是血清固定的判斷依賴于梅毒螺旋體非特異性抗體（即抗心磷脂抗體），該抗體可能是針對(duì)受損組織釋放的心磷脂而產(chǎn)生的。有學(xué)者認(rèn)為，梅毒血清固定可能是機(jī)體的一種特定免疫狀態(tài)而非梅毒螺旋體的持續(xù)存在［2］。

本研究結(jié)果顯示，與健康人對(duì)照組相比，梅毒血清固定患者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD4＋T 細(xì)胞計(jì)數(shù)及B細(xì)胞計(jì)數(shù)均減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），表明梅毒血清固定患者存在免疫失衡。CD4＋T淋巴細(xì)胞中TH1 細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)為清除體內(nèi)梅毒的主要機(jī)制［3］，隨著病情的發(fā)展，CD4＋T 細(xì)胞減少，使皮損內(nèi)螺旋體不能完全被殺滅，造成梅毒螺旋體在體內(nèi)殘留、擴(kuò)散，并長(zhǎng)期持續(xù)刺激機(jī)體發(fā)生變態(tài)反應(yīng)，導(dǎo)致機(jī)體對(duì)病原體清除困難而造成疾病的持久活動(dòng)性，進(jìn)而表現(xiàn)為血清固定現(xiàn)象或進(jìn)一步發(fā)展成晚期梅毒的組織損害。血清固定組、梅毒治療有效組外周血中的B淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)較健康對(duì)照組減少（P＜0.05）。B 細(xì)胞是體液免疫的主要成員，在免疫中有雙向調(diào)節(jié)作用，并與T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫密切相關(guān)，但參與免疫失衡及免疫抑制的具體作用機(jī)制尚不明確。研究表明CD19＋CD24intCD38int成熟型B 細(xì)胞在治療前的梅毒患者及血清固定者體內(nèi)的比例降低，而在血清轉(zhuǎn)陰者中無明顯變化，且在血清固定組及血清轉(zhuǎn)陰組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）；推測(cè)血清固定患者B細(xì)胞分化異常，成熟型B細(xì)胞減少而記憶性B細(xì)胞增多，可能與持續(xù)分泌梅毒螺旋體非特異性抗體有關(guān)［4-5］。