杜 強(qiáng)，洪 鍇，潘伯臣△

(1. 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心， 沈陽(yáng) 110004； 2. 北京大學(xué)第三醫(yī)院泌尿外科， 北京 100191)

男性生殖道感染是全球性的公共衛(wèi)生問(wèn)題[1]。由淋病奈瑟菌(Neisseriagonorrhoeae)以外的其他病原體感染而引起的非淋球菌性生殖道感染臨床上十分常見(jiàn)，但是約有20%～50%的感染者并沒(méi)有明顯臨床癥狀[2]，只能依靠篩查發(fā)現(xiàn)。實(shí)施輔助生殖技術(shù)助孕前，需要排除生殖道沙眼衣原體(Chlamydiatrachomatis)和解脲支原體(Ureaplasmaurealyticum)感染。隨著診斷技術(shù)的迅猛發(fā)展，傳統(tǒng)的培養(yǎng)法以及免疫學(xué)方法因技術(shù)上操作困難且漏診率高，已逐漸被分子診斷所取代。實(shí)時(shí)熒光核酸恒溫?cái)U(kuò)增(simultneous amplification and testing，SAT)是在RNA恒溫?cái)U(kuò)增基礎(chǔ)上開發(fā)的可同時(shí)檢測(cè)體液和拭子的新一代核酸檢測(cè)技術(shù)(SAT-RNA法)[3]，其具有準(zhǔn)確、快速的特點(diǎn)。本研究擬采用SAT-RNA技術(shù)對(duì)門診就診的輔助生殖患者進(jìn)行體液標(biāo)本檢測(cè)，并與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)-DNA(PCR-DNA法)檢測(cè)尿道拭子標(biāo)本結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，旨在為臨床檢測(cè)沙眼衣原體、解脲支原體的方法選擇提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年4月至2017年4月在中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心就診的因女方因素?cái)M行體外受精-胚胎移植助孕的163例男性為研究對(duì)象，年齡24～50歲，均簽署知情同意書。

1.2 標(biāo)本采集

采集163例男性的尿液標(biāo)本，具體方法為：取清晨首次尿或長(zhǎng)時(shí)間(>1 h)不排尿的首段尿0.5 mL，與0.5 mL試劑盒中的樣本保存液混合作為待測(cè)標(biāo)本，標(biāo)本處理按照上海仁度生物科技有限公司試劑盒說(shuō)明書操作。

常規(guī)留取尿液后，對(duì)其中109例符合當(dāng)天采集精液標(biāo)本條件者進(jìn)行精液采集，方法為：將拭子頭放入無(wú)菌采集的精液標(biāo)本中攪動(dòng)一圈，貼管壁取出，與0.5 mL試劑盒中的樣本保存液混勻作為待測(cè)標(biāo)本，標(biāo)本處理按照上海仁度生物科技有限公司試劑盒說(shuō)明書操作。

按輔助生殖助孕要求，163例均行尿道分泌物檢查，以排除沙眼衣原體和解脲支原體感染。具體方法為：以拇指、食指輕輕張開尿道外口，將醫(yī)用棉拭子插入尿道中2～3 cm，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，停留數(shù)秒后取出，將其放入標(biāo)有患者編號(hào)的取樣管中作為待測(cè)標(biāo)本，標(biāo)本處理按照上?？迫A生物工程股份有限公司試劑盒說(shuō)明書操作。

1.3 檢測(cè)方法

PCR-DNA法：使用上?？迫A生物工程股份有限公司的沙眼衣原體和解脲支原體核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?，對(duì)163例男性尿道拭子標(biāo)本進(jìn)行相應(yīng)病原體的檢測(cè)，操作過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書執(zhí)行。

SAT-RNA法：使用上海仁度生物科技有限公司沙眼衣原體和解脲支原體核酸檢測(cè)試劑盒，對(duì)163例男性尿液標(biāo)本和109例精液標(biāo)本進(jìn)行相應(yīng)病原體的檢測(cè)，操作過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書執(zhí)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用配對(duì)χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Kappa值>0.8時(shí)表明一致性極好，Kappa值在0.6～0.8時(shí)表明有較好的一致性。

2 結(jié)果

2.1 不同方法檢測(cè)生殖道解脲支原體結(jié)果比較

163例中，PCR-DNA法檢測(cè)尿道拭子解脲支原體陽(yáng)性77例(陽(yáng)性率47.24%)，SAT-RNA法檢測(cè)尿液標(biāo)本解脲支原體陽(yáng)性78 例(陽(yáng)性率47.85%)，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0，P>0.05)，兩種方法檢測(cè)結(jié)果的符合率為 93.25%，陽(yáng)性符合率93.51%，陰性符合率 93.02%，檢驗(yàn)結(jié)果一致性極好(Kappa值0.865，表1)。

表1 不同方法檢測(cè)生殖道解脲支原體結(jié)果比較Table 1 Comparison of different detection methods for Ureaplasma urealyticum in male genital tract

2.2 不同方法檢測(cè)生殖道沙眼衣原體結(jié)果比較

163例中，PCR-DNA法檢測(cè)尿道拭子沙眼衣原體陽(yáng)性5例(陽(yáng)性率3.07%)，SAT-RNA法檢測(cè)尿液標(biāo)本沙眼衣原體陽(yáng)性7例(陽(yáng)性率4.29%)，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.25，P>0.05)，兩種方法檢測(cè)結(jié)果符合率為97.55%，陽(yáng)性符合率80.00%，陰性符合率98.10%，檢驗(yàn)結(jié)果一致性較好(Kappa值0.654，表2)。

表2 不同方法檢測(cè)生殖道沙眼衣原體結(jié)果比較Table 2 Comparison of different detection methods for Chlamydia trachomatis in male genital tract

2.3 SAT-RNA法檢測(cè)不同標(biāo)本解脲支原體結(jié)果比較

對(duì)109例男性尿液標(biāo)本和精液標(biāo)本解脲支原體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)尿液標(biāo)本解脲支原體陽(yáng)性55例(陽(yáng)性率50.46%)，精液標(biāo)本解脲支原體陽(yáng)性49 例(陽(yáng)性率44.95%)，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.08，P>0.05)，兩種標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果符合率為88.99%，陽(yáng)性符合率 93.88%，陰性符合率85.00%，檢驗(yàn)結(jié)果一致性較好(Kappa值0.780，表3)。

表3 SAT-RNA法檢測(cè)不同標(biāo)本中解脲支原體結(jié)果比較Table 3 Comparison of SAT-RNA detection of Ureaplasma urealyticum in different samples of the male genital tract

2.4 SAT-RNA法檢測(cè)不同標(biāo)本沙眼衣原體結(jié)果比較

對(duì)109例男性尿液標(biāo)本和精液標(biāo)本的沙眼衣原體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)尿液標(biāo)本沙眼衣原體陽(yáng)性6例(陽(yáng)性率5.50%)，精液標(biāo)本沙眼衣原體陽(yáng)性4 例(陽(yáng)性率 3.67%)，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.5，P>0.05)，兩種標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果符合率為 98.17%，陽(yáng)性符合率 100.00%，陰性符合率98.10%，檢驗(yàn)結(jié)果一致性較好(Kappa值0.791，表4)。

表4 SAT-RNA法檢測(cè)不同標(biāo)本中沙眼衣原體結(jié)果比較Table 4 Comparison of SAT-RNA detection of Chlamydia trachomatis in different samples of the male genital tract

3 討論

依據(jù)進(jìn)行輔助生殖助孕基本要求，排除生殖道感染是進(jìn)入輔助生殖周期前的基本檢查[4]。男女一方患有生殖泌尿系統(tǒng)急性感染或性傳播疾病均為實(shí)施輔助生殖技術(shù)的禁忌癥，并將影響助孕的成功率[5]。研究表明,約有20%～50%的感染者沒(méi)有明顯臨床癥狀，不能僅憑癥狀和體征判斷病原體的存在。解脲支原體和沙眼衣原體是臨床最常見(jiàn)的兩種導(dǎo)致非淋菌性尿道炎的病原體[6-7]，并且會(huì)對(duì)生育產(chǎn)生負(fù)面影響[8-10]。相比傳統(tǒng)的培養(yǎng)法[11]，采用核酸擴(kuò)增方法可顯著提高對(duì)生殖道病原微生物的檢出率，有利于對(duì)感染患者采取迅速的診斷和恰當(dāng)?shù)闹委焄12-13]。

分子檢測(cè)技術(shù)以DNA和RNA檢測(cè)為主要代表。本研究對(duì)163例男性采用PCR-DNA法檢測(cè)尿道拭子和SAT-RNA法檢測(cè)尿液標(biāo)本的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)兩種方法對(duì)沙眼衣原體、解脲支原體的檢出率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，檢測(cè)結(jié)果的一致性較好，說(shuō)明兩種方法均可實(shí)現(xiàn)對(duì)常規(guī)體檢者沙眼衣原體、解脲支原體的快速、準(zhǔn)確診斷?？紤]到男性尿道神經(jīng)分布的特點(diǎn)，拭子標(biāo)本的采集勢(shì)必引起患者的疼痛和不適，甚至有導(dǎo)致醫(yī)源性尿道損傷的風(fēng)險(xiǎn)[14]，而SAT-RNA法因可以使用尿液或精液標(biāo)本，具有無(wú)創(chuàng)、方便的優(yōu)點(diǎn)，不僅可以更好地保護(hù)患者，減輕患者痛苦，而且也能減少臨床醫(yī)生的工作量，更適用于人群篩查[15]。此外，由于RNA僅在活的病原體中存在，故以RNA為靶標(biāo)的診斷技術(shù)還可以反映病原體的存活狀態(tài)，為監(jiān)測(cè)療效及指導(dǎo)臨床精準(zhǔn)醫(yī)療提供了有力保障[2]。

本研究還對(duì)采用SAT-RNA法檢測(cè)不同標(biāo)本(尿液和精液)的沙眼衣原體、解脲支原體結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，檢測(cè)結(jié)果具有較好的一致性，提示臨床上可以使用不同標(biāo)本進(jìn)行沙眼衣原體、解脲支原體的檢測(cè)。以往的研究也證實(shí)，尿液和尿道拭子在男性受試者中檢測(cè)的一致性幾乎可達(dá)100%[16]，與本研究得出的結(jié)論相似。盡管如此，我們還是能夠看到，不論是解脲支原體還是沙眼衣原體，使用尿液標(biāo)本的檢測(cè)陽(yáng)性率更高，尤其是對(duì)沙眼衣原體來(lái)說(shuō)，所有精液標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的4例患者，其尿液標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，而尿液標(biāo)本檢測(cè)陽(yáng)性的2例患者，其精液標(biāo)本檢測(cè)為陰性，這可能與病原體感染的位置不同有關(guān)，亦可能受到檢測(cè)試劑和檢測(cè)方法的影響。因此，我們認(rèn)為尿液標(biāo)本檢測(cè)可能避免漏檢。

此外，SAT-RNA法還可同時(shí)進(jìn)行生殖支原體(Mycoplasmagenitalium)的檢測(cè)[17]，但因PCR-DNA法無(wú)法檢測(cè)生殖支原體，故本研究未涉及此部分內(nèi)容。有研究表明，生殖支原體可能是影響精子質(zhì)量的重要參數(shù)，會(huì)顯著降低精液量和精子濃度，積極防治生殖支原體感染將有助于預(yù)防男性不育[18-19]。不同人群生殖支原體感染率大相徑庭[20]，將來(lái)應(yīng)進(jìn)一步分析生育人群生殖支原體感染情況，以評(píng)價(jià)生育人群生殖支原體檢測(cè)的意義。

綜上所述，SAT-RNA法與PCR-DNA法檢測(cè)生殖道沙眼衣原體、解脲支原體有良好的一致性；相比PCR-DNA法，SAT-RNA法可用于尿液或精液標(biāo)本的檢測(cè)，具有采樣方便、無(wú)創(chuàng)等優(yōu)勢(shì)，更適宜臨床應(yīng)用，值得推廣。