王曉康

河南省長(zhǎng)垣市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河南長(zhǎng)垣 453400

0 引言

小反芻獸疫（Peste des Petits Ruminants，PPR）也稱為羊瘟，是由小反芻獸疫病毒引起小反芻動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病[1]。患病動(dòng)物主要表現(xiàn)為體溫升高、腹瀉、咳嗽、口腔流黏液[2]。易感動(dòng)物主要為羊，發(fā)病率和死亡率均可達(dá)到100.00%[3]，四季發(fā)病，春季和冬季比較嚴(yán)重。2007年，PPR首次傳入我國(guó)西藏阿里地區(qū)[4]。一旦爆發(fā)該病，給養(yǎng)羊場(chǎng)（戶）造成很大的經(jīng)濟(jì)損失，屬于重大動(dòng)物疫病之一。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）《動(dòng)物衛(wèi)生法典》將其列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病[5]，2012年被我國(guó)其列入13 種重點(diǎn)防范的外來動(dòng)物疫病，同時(shí)被列為一類動(dòng)物疫病[6]。到2020年，除毗鄰小反芻獸疫疫情國(guó)家的陸地邊境縣（團(tuán)場(chǎng)）或沿邊境線30 公里范圍內(nèi)的免疫隔離帶以外，力爭(zhēng)全國(guó)達(dá)到非免疫無疫區(qū)標(biāo)準(zhǔn)[7]。

免疫接種是控制疫情發(fā)生的有效措施，也是減少臨床病例、阻斷病毒擴(kuò)散的主要手段。近年來，河南省長(zhǎng)垣嚴(yán)格落實(shí)防控措施，加大免疫力度，認(rèn)真開展免疫抗體效果監(jiān)測(cè)評(píng)估。為掌握2018—2020年，河南省長(zhǎng)垣市小反芻獸疫流行情況和免疫抗體水平，本研究對(duì)全市32 家奶山羊散養(yǎng)戶采集羊血清和鼻拭子樣品，利用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（ELISA）、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）方法檢測(cè)小反芻獸疫免疫抗體與病毒核酸，并提出綜合防控措施，為長(zhǎng)垣市逐步消滅小反芻獸疫和退出小反芻獸疫免疫計(jì)劃提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 待檢測(cè)羊來源

監(jiān)測(cè)點(diǎn)來自全市5 個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的32 家奶山羊散養(yǎng)戶。所有羊群均采用小反芻獸疫疫苗免疫，每年春季和秋季集中免疫后3 周左右進(jìn)行采樣。

1.2 待檢血清和鼻拭子

對(duì)免疫羊群無菌頸靜脈采血，每個(gè)中小規(guī)模羊場(chǎng)不少于30 份血清，鼻拭子15 份。血清樣品于-20 ℃保存，以備血清抗體檢測(cè)；鼻咽拭子置于滅菌甘油生理鹽水，冰箱冷凍待病毒核酸檢測(cè)。共采集血清樣品2266 份，鼻拭子樣品367 份。所有樣品于7 天內(nèi)檢測(cè)完。登記每個(gè)樣品的來源。

1.3 檢測(cè)試劑

血清樣品抗體檢測(cè)使用小反芻獸疫病毒阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，生產(chǎn)批號(hào)為201822、201936和202062，由法國(guó)ID-VET生產(chǎn)，按照說明書操作，判斷標(biāo)準(zhǔn)為待檢樣品阻斷率（PB）＞50為陽(yáng)性，待檢樣品阻斷率（PB）≤50為陰性；病毒核酸檢測(cè)使用小反芻獸疫病毒實(shí)時(shí)熒光RTPCR檢測(cè)試劑盒，由北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)為PPR20181102P、PPR20190215P、PPR20201011P，參照試劑盒說明書操作。擴(kuò)增后的待檢樣品目的條帶與陽(yáng)性對(duì)照長(zhǎng)度一樣判為陽(yáng)性，否則為陰性。

1.4 檢測(cè)方法

按照《GB/T 27982—2011 小反芻獸疫診斷技術(shù)》所述方法檢測(cè)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2007整理后，利用SPSS 19.0軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析。數(shù)據(jù)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。P＜0.05為顯著性差異。

2 結(jié)果

血清學(xué)監(jiān)測(cè)和病原學(xué)監(jiān)測(cè)情況見表1。2018—2020年共監(jiān)測(cè)場(chǎng)點(diǎn)38 個(gè)，抽檢血清2266 份，合格1930 份，抗體平均合格率為85.17%，2018年、2019年和2020年的血清抗體合格率分別為83.13%、85.64%和86.67%，均高于國(guó)家規(guī)定的70.00%。抗體合格率逐年增高，差異不顯著（P＞0.05）。病原學(xué)監(jiān)測(cè)共采樣鼻拭子367 份，陽(yáng)性率為0.00%，結(jié)果均為陰性。

表1 2018—2020 年小反芻獸疫抗體檢測(cè)和病原學(xué)檢測(cè)情況

3 討論

目前，小反芻獸疫尚無有效治療方法，疫苗免疫是預(yù)防控制該病的主要措施，定期開展免疫抗體監(jiān)測(cè)，開展免疫效果科學(xué)評(píng)估，能夠及時(shí)準(zhǔn)確地摸清流行趨勢(shì)和羊群免疫抵抗力狀況。

本研究應(yīng)用阻斷ELISA方法檢測(cè)2266 份羊血清中PPRV抗體水平，發(fā)現(xiàn)3 年羊血清平均抗體合格率為85.17%，超過了國(guó)家要求的70.00%標(biāo)準(zhǔn)。表明長(zhǎng)垣市奶山羊小反芻獸疫免疫效果好，疫苗起到了有效防御作用，相對(duì)較安全。這與當(dāng)?shù)貏?dòng)物疫病防控部門加強(qiáng)檢疫監(jiān)管和疫情監(jiān)測(cè)，強(qiáng)化宣傳，及時(shí)判斷、掌握疫情發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，全面做好各項(xiàng)防疫工作有關(guān)。

小反芻獸疫多發(fā)于潮濕的雨季或氣候干燥的冬季，羊群的發(fā)病率和病死率主要由動(dòng)物免疫狀態(tài)和毒株毒力共同決定[8]。本試驗(yàn)應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)羊眼結(jié)膜拭子中PPRV陽(yáng)性率為0，說明近年來長(zhǎng)垣市羊群未被小反芻獸疫病毒感染，不存在小反芻獸疫病毒感染，奶山羊飼養(yǎng)大環(huán)境相對(duì)較安全。

4 防控措施

一是指導(dǎo)養(yǎng)羊場(chǎng)（戶）、活羊交易市場(chǎng)和屠宰場(chǎng)建立健全防疫制度，定期做好清洗消毒工作，提高生物安全水平。二是做好免疫接種工作。指導(dǎo)免疫地區(qū)的養(yǎng)羊場(chǎng)（戶）做好羊群免疫工作，對(duì)新生羔羊和新補(bǔ)欄羊及時(shí)補(bǔ)免，并做好免疫記錄，免疫抗體合格率應(yīng)達(dá)到70.00%以上。三是加強(qiáng)監(jiān)測(cè)預(yù)警。根據(jù)國(guó)家動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃，切實(shí)做好小反芻獸疫監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查工作。四是加強(qiáng)活羊調(diào)運(yùn)監(jiān)管。加大活羊調(diào)運(yùn)監(jiān)管力度，嚴(yán)禁活羊由高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)向低風(fēng)險(xiǎn)區(qū)調(diào)運(yùn)。五是強(qiáng)化應(yīng)急管理。要嚴(yán)格按照小反芻獸疫防控應(yīng)急預(yù)案和防治技術(shù)規(guī)范要求，健全應(yīng)急機(jī)制，做好各項(xiàng)應(yīng)急準(zhǔn)備。