宋韶錦，鞏騰飛，孟慶山，張 羽

（威海市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，山東威海 264200）

西青果又稱“藏青果”，為使君子科植物訶子（Terminalia chebulaRetz.）的干燥幼果，在中醫(yī)臨床中作為清熱解毒藥用于復(fù)方配伍治療肺炎、喉炎、扁桃體炎、咽炎、細(xì)菌性痢疾等癥[1]。西青果中鞣質(zhì)與酚酸類成分含量豐富，主要化學(xué)成分為訶子酸、訶黎勒酸及沒(méi)食子酸等[2-3]。西青果顆粒是由西青果水提醇沉物經(jīng)制劑化制備的中成藥顆粒，在臨床用于治療咽喉干痛、慢性扁桃體炎等疾病[4]。進(jìn)行中藥顆粒制劑的體外溶出度評(píng)價(jià)研究是有效的制劑質(zhì)量控制手段，有利于指導(dǎo)制劑的處方優(yōu)化與制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立[5]。本文旨在比較不同溶出度測(cè)試方法對(duì)西青果顆粒溶出行為評(píng)價(jià)的影響差異，考察西青果顆粒在不同溶出條件下的溶出行為適應(yīng)性及進(jìn)行溶出機(jī)制分析。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

島津LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）；Hypersil C18色 譜 柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；MS105DU電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；RCZ-8B溶出試驗(yàn)儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；UV-2550紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）。

甲醇（色譜純，默克）；磷酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；水為自制重蒸水；其他試劑未經(jīng)說(shuō)明均為分析純。沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品食品檢定研究所，批號(hào)110831-201605，含量90.8%）；西青果顆粒（廣西天天樂(lè)藥業(yè)股份有限公司，15 g×10袋）。

1.2 沒(méi)食子酸含量分析方法建立

1.2.1 色譜條件

Hypersil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；SPD-10A型二極管陣列檢測(cè)器；柱溫25 ℃；流動(dòng)相為以甲醇-0.5%磷酸水溶液（15∶85)；流速0.8 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)215 nm，進(jìn)樣量 20 μL。

1.2.2 供試品溶液制備

取樣品10袋，研細(xì)，精密稱定一定量的細(xì)粉約0.3 g，平行兩份于具塞錐形瓶中，分別以50%甲醇、水和0.1 mol/L鹽酸為溶劑，精密加入溶劑25 mL后稱定重量，超聲處理20 min（功率250 W，頻率40 kHz)，超聲的過(guò)程中要不斷的變換瓶子的相對(duì)位置，以便于超聲均勻，再用對(duì)應(yīng)的溶劑補(bǔ)足失重后，搖勻，用0.45 μm的濾膜過(guò)濾，采用HPLC法測(cè)定。

1.2.3 對(duì)照品溶液制備

精密稱定沒(méi)食子酸對(duì)照品11.36 mg，置于100 mL容量瓶，50%甲醇溶液溶解定容，微孔濾膜（0.45 μm）過(guò)濾，制備得濃度為103.15 μg/mL沒(méi)食子酸對(duì)照品原始液，備用。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

50%甲醇溶液對(duì)濃度為103.15 μg/mL沒(méi)食子酸對(duì)照品原始液進(jìn)行梯度稀釋，得到濃度為1.031 5 μg/mL、10.315 μg/mL、20.63 μg/mL、41.26 μg/mL、61.89 μg/mL、82.52 μg/mL和103.15 μg/mL的系列濃度溶液。HPLC進(jìn)樣20 μL測(cè)定后以峰面積（Y）對(duì)濃度（x）擬合回歸方程。

1.2.5 精密度考察

移取沒(méi)食子酸對(duì)照品原始液,重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。

1.2.6 穩(wěn)定性考察

移取新配制的沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液，于0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h和48 h時(shí)間點(diǎn)分別進(jìn)樣測(cè)定。

1.2.7 重復(fù)性考察

分別以50%甲醇溶液、蒸餾水、0.1 mol/L鹽酸溶液為溶劑溶解定容沒(méi)食子酸對(duì)照品，所得樣品溶液分別于0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h和48 h時(shí)間點(diǎn)分別進(jìn)樣測(cè)定。

1.2.8 加樣回收率考察

分別精密量取1.2.2項(xiàng)3種溶劑的樣品溶液1 mL，置于50 mL容量瓶中，分別加入1.2.3項(xiàng)下沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液1 mL，再分別用相對(duì)應(yīng)的溶劑稀釋定容至刻線，0.45 μm的濾膜過(guò)濾，HPLC法測(cè)定。

1.3 溶出度測(cè)定

1.3.1 漿法

西青果顆粒1袋，采用2015年版《中國(guó)藥典》附錄溶出度測(cè)定第二法漿法，溶出介質(zhì)體積為800 mL，于不同設(shè)置轉(zhuǎn)速下在（37±0.5）℃下進(jìn)行西青果顆粒劑的溶出測(cè)定。在設(shè)置取樣時(shí)間點(diǎn)（10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min、70 min、80 min、90 min、100 min、110 min 和120 min）利用自動(dòng)取樣系統(tǒng)取樣5 mL，并及時(shí)補(bǔ)充等溫等量溶出介質(zhì)。為保證取樣準(zhǔn)確性與自動(dòng)取樣系統(tǒng)的運(yùn)行穩(wěn)定性，取樣針配制0.45 μm濾頭以防止取樣未溶解細(xì)小顆粒。

1.3.2 小杯法

基于小杯法測(cè)定西青果顆粒溶出的測(cè)試方法除溶出介質(zhì)體積設(shè)置為200 mL利用自動(dòng)取樣系統(tǒng)取樣1 mL，并及時(shí)補(bǔ)充等溫等量溶出介質(zhì)，向取樣管中精密加4 mL的溶出介質(zhì)混勻制成樣品，其他參數(shù)與1.3.1項(xiàng)下漿法參數(shù)一致。

1.4 西青果顆粒在不同測(cè)試條件下溶出曲線繪制

西青果顆粒1袋，參照1.3.1項(xiàng)下漿法與1.3.2項(xiàng)下小杯法溶出度測(cè)定方法，在不同溶出介質(zhì)（蒸餾水、0.1 mol/L鹽酸溶液）和攪拌速度（50 r/min、75 r/min、100 r/min）組合條件下進(jìn)行西青果顆粒的溶出測(cè)試，溶出樣品經(jīng)HPLC進(jìn)行含量測(cè)定，繪制溶出曲線。

1.5 西青果顆粒溶出機(jī)制分析

利用Origin數(shù)據(jù)分析軟件對(duì)西青果顆粒小杯法測(cè)定溶出曲線分別進(jìn)行零級(jí)動(dòng)力學(xué)、一級(jí)動(dòng)力學(xué)、Higuchi方程以及Korsmeyer- peppas方程動(dòng)力學(xué)方程擬合，尋找最佳描述和預(yù)測(cè)西青果顆粒溶出行為的數(shù)學(xué)模型。

2 結(jié)果與分析

2.1 沒(méi)食子酸含量分析方法建立

沒(méi)食子酸回歸方程為Y=105 934x-1 465.3，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9，結(jié)果表明沒(méi)食子酸在1.0315～103.15 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。精密度考察峰面積的RSD為0.45%（n=6），表明方法精密度良好。穩(wěn)定性考察沒(méi)食子酸峰面積的RSD為1.49%（n=7），表明沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性考察（n=7）和加樣回收率（n=3）的結(jié)果見(jiàn)表1，通過(guò)數(shù)據(jù)可以表明，沒(méi)食子酸在不同溶液之間的重復(fù)性良好，且加樣回收率符合定量測(cè)定要求。

表1 重復(fù)性考察和加樣回收的結(jié)果比較

2.2 不同溶劑的含量結(jié)果比對(duì)

通過(guò)數(shù)據(jù)比較可以得出，不同溶劑之間含量測(cè)定的比對(duì)結(jié)果顯示，蒸餾水、50%甲醇溶液、0.1 mol/L鹽酸溶液的含量測(cè)定結(jié)果偏差較小。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同溶劑含量測(cè)定的結(jié)果比對(duì)

2.3 西青果顆粒在不同測(cè)試條件下溶出曲線繪制

由表3、表4可知，西青果顆粒漿法測(cè)定，在不同溶出介質(zhì)、不同攪拌速度的組合測(cè)試條件下，在10 min的累計(jì)溶出率均高于80%，溶出迅速，符合顆粒劑快速溶出的制劑要求。以漿法作為測(cè)試方法，以蒸餾水作為溶出介質(zhì)時(shí)，西青果顆粒在攪拌速度分別為50 r/min、75 r/min、100 r/min條件下，10 min時(shí)的累計(jì)溶出率分別為84.44%、91.63%、91.06%，溶出達(dá)平臺(tái)期時(shí)間分別為20 min、10 min、10 min，說(shuō)明攪拌速度可影響溶出藥物的擴(kuò)散速率從而影響制劑溶出。溶出曲線測(cè)定時(shí)攪拌速度的設(shè)定應(yīng)模擬體內(nèi)生理環(huán)境。為了在體外制劑研究時(shí)更好控制制劑質(zhì)量，確保制劑在多種體內(nèi)環(huán)境均有較好溶出適應(yīng)性，應(yīng)考察制劑在低攪拌速度（50 r/min）下的溶出曲線，以預(yù)測(cè)制劑在患者體虛狀態(tài)胃腸蠕動(dòng)功能低下時(shí)的溶出性能。西青果顆粒在50 r/min攪拌條件下在蒸餾水和0.1 mol/L鹽酸溶液兩種溶出介質(zhì)中均可快速溶出，顆粒在不同攪拌速度下的溶出適應(yīng)性較好。漿法測(cè)定西青果顆粒溶出時(shí)，在不同攪拌條件下，顆粒劑在蒸餾水和0.1 mol/L鹽酸溶液中的溶出曲線較為相似，顆粒劑在不同溶出介質(zhì)中的溶出適應(yīng)性較好。

表3 西青果顆粒漿法測(cè)定溶出率（n=6）

表4 西青果顆粒小杯法溶出測(cè)定溶出率（n=6）

小杯法與漿法相比，是在更小體積的溶出介質(zhì)中進(jìn)行的固體制劑溶出測(cè)試。以小杯法作為測(cè)試方法測(cè)定西青果顆粒的溶出曲線，在相同溶出介質(zhì)中，攪拌速度影響西青果顆粒劑的溶出，這與漿法測(cè)定結(jié)果一致。當(dāng)溶出介質(zhì)相同，所選擇的轉(zhuǎn)速不同時(shí)，其相同時(shí)間段內(nèi)表現(xiàn)出來(lái)的累計(jì)溶出率之間存在著一定的差異，具體數(shù)據(jù)可以參見(jiàn)表2。以上結(jié)果說(shuō)明西青果顆粒在小杯法中的溶出慢于漿法測(cè)定，其原因可能為由于溶出介質(zhì)體積差異導(dǎo)致的剪切速率與沒(méi)食子酸擴(kuò)散速率的差異。

2.4 西青果顆粒溶出機(jī)制分析

擬合結(jié)果表明，西青果顆粒在各種溶出條件下小杯法測(cè)定溶出曲線對(duì)一級(jí)動(dòng)力學(xué)的擬合相關(guān)性系數(shù)均高于0.99。在低攪拌速度（50 r/min）對(duì)一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程與Higuchi方程擬合較好，擬合相關(guān)系數(shù)均高于0.99，表明西青果顆粒的溶出機(jī)制為Fick擴(kuò)散，顆粒溶蝕對(duì)其溶出存在一定影響。在高攪拌速度（100 r/min）對(duì)一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程擬合較好，Higuchi方程擬合相關(guān)性降低，西青果顆粒溶出機(jī)制只為Fick擴(kuò)散。其原因是由于在低攪拌速度下顆粒的溶蝕過(guò)程影響藥物溶出，在高攪拌速度下顆?？焖偃艹?，顆?？焖偻瓿扇芪g過(guò)程。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 西青果顆粒小杯法測(cè)定溶出機(jī)制

3 討論

依托HPLC法，結(jié)合沒(méi)食子酸在不同溶液之間溶出度的含量變化，有利于進(jìn)一步分析中成藥之間化學(xué)成分的溶出行為[6]。進(jìn)行中藥固體制劑的體外溶出研究是制劑質(zhì)量控制與預(yù)測(cè)體內(nèi)釋藥行為的有效手段，溶出條件的設(shè)置應(yīng)模擬制劑在體內(nèi)釋藥部位的生理環(huán)境。制劑在多種溶出環(huán)境中均能保持穩(wěn)定可控的溶出特性是保證制劑在體內(nèi)多種生理環(huán)境中良好溶出并保證生物利用度的前提[7]。不同的溶出測(cè)定方法會(huì)影響制劑的溶出曲線，小杯法在少量固體制劑的溶出測(cè)定中可提高溶出液的濃度以保證樣品溶液滿足檢測(cè)限要求[8]。進(jìn)行溶出曲線的溶出動(dòng)力學(xué)分析可預(yù)測(cè)制劑在體內(nèi)的溶出特性，并對(duì)溶出曲線進(jìn)行精確控制。