龍治海，李 華，段元亮，張 露，涂全宇，劉光迅

(四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水產(chǎn)研究所，成都 郫都 611731)

鱸鯉[PercoyprisPingi(Tchang)]俗稱花魚，隸屬于鯉科(Cyprinidae)，鲃亞科(Barbinae)，鱸鯉屬(Percoyprischu)。主要分布于長江上游岷江、青衣江、金沙江以及烏江、赤水河等流域[1-2]。其肌肉富含必需氨基酸和鮮味氨基酸，營養(yǎng)價(jià)值高于多數(shù)經(jīng)濟(jì)魚類，是一種優(yōu)質(zhì)食用珍貴魚類。由于過度捕撈，鱸鯉自然資源受到嚴(yán)重破壞，目前已列為四川省、重慶市的重點(diǎn)保護(hù)瀕危魚類之一。

飼料蛋白水平是決定魚類生長和飼料成本的關(guān)鍵因素。飼料蛋白水平過低會限制魚類生長,輕則生長緩慢，重則可能出現(xiàn)生長停滯、體重下降、抗病力減弱，無法保證養(yǎng)殖魚類在一定的時(shí)間內(nèi)達(dá)到上市規(guī)格, 降低水產(chǎn)養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益。但過高并不能進(jìn)一步提高魚類的生長性能,反而會增加魚體的氮代謝負(fù)荷，部分蛋白質(zhì)可能會作為能源被消耗掉，作為能源消耗的蛋白質(zhì)會導(dǎo)致水體中氨氮排放量增多而污染水質(zhì)，而目前蛋白質(zhì)原料價(jià)格居高不下，這就大大提高了飼料的成本。有關(guān)魚類蛋白質(zhì)需求相關(guān)研究資料顯示，魚用配合飼料的蛋白水平一般在25%～55%[3]，如羅非魚幼魚為28%～32%，巖原鯉幼魚為38%～40%，鯉魚幼魚為43%～47%，草魚泥鰍幼魚為45.5%[4-7]。

目前，市場對鱸鯉需求居高不下，鱸鯉人工養(yǎng)殖逐步興起，但尚未見鱸鯉營養(yǎng)需要的有關(guān)研究報(bào)道，仍缺乏鱸鯉養(yǎng)殖專用人工配合飼料。本試驗(yàn)以鱸鯉為研究對象，飼喂不同蛋白水平飼料，研究其對鱸鯉生長性能和血液指標(biāo)的影響，以期為鱸鯉營養(yǎng)學(xué)研究積累基礎(chǔ)資料，為開發(fā)鱸鯉人工配合飼料提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)飼料以白魚粉和豆粕為主要蛋白源, 魚油和大豆油為主要脂肪源設(shè)5組不同蛋白水平的等脂等能實(shí)驗(yàn)飼料，以酪蛋白和明膠(4∶1)為蛋白質(zhì)源配制蛋白質(zhì)水平分別為17.9%、37．41%、40．10%、44．34%、49.20%的5種純化試驗(yàn)飼料，原料由四川省農(nóng)科院水產(chǎn)研究所提供。飼料蛋白質(zhì)水平檢測單位為國家糧食局成都糧油食品飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心。試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平如表1。

1.2 試驗(yàn)魚種及飼養(yǎng)管理

生長試驗(yàn)在四川省雅安市漢源湖養(yǎng)殖場進(jìn)行。試驗(yàn)用鱸鯉幼魚購自四川省雅安市蘆山縣某養(yǎng)殖場，選擇600尾體質(zhì)健康、平均體重(15.2±1.1)g的鱸鯉幼魚，分為5組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40尾，分別飼喂蛋白質(zhì)水平為17.9%(Ⅰ組)、37．41%(Ⅱ組)、40．10%(Ⅲ組)、44．34%(Ⅳ組)、49.20%(Ⅴ組)的試驗(yàn)飼料，試驗(yàn)開始前將暫養(yǎng)魚集中禁食24h。試驗(yàn)魚采用網(wǎng)箱養(yǎng)殖，試驗(yàn)期間每天9:00和18:00分兩時(shí)段投喂飼料,根據(jù)魚的進(jìn)食和生長情況，0～20d每天投食量為總體重的2%～5%；20～40d為4%～7%；40～60d為6%～9%；60～80d為6%～9%，采用循環(huán)投喂模式，每次投喂量以試驗(yàn)魚30min內(nèi)能吃完為宜。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,稱一定量的飼料放入無魚的實(shí)驗(yàn)缸中,10min后回收于70℃烘干后稱重,計(jì)算飼料的溶失率以校正實(shí)際攝食量。實(shí)驗(yàn)期間水溫變動范圍是25～28℃,pH值為8.2～9.0,氨氮≤0.5mg/L,余氯≤0.05mg/L,光照周期為12L∶12D。試驗(yàn)期為80d。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平

1.3 指標(biāo)測定

1.3.1 生長性能指標(biāo)測定 在試驗(yàn)第1d、第20d、40d、60d和80d分別從各組中隨機(jī)抽取6尾進(jìn)行稱重，用于計(jì)算以下相關(guān)指標(biāo)測定。

特定生長率(SGR，%)=(lnWtd-lnW0)/t×100；

增重率(WGR，%)=(Wt-W0)/W0×100；

存活率(SR，%)=Nt/N0×100；

飼料系數(shù)(FCR，%)=Id/WWG×100；

蛋白質(zhì)利用率(PER，%)=WWG/Ip×100；

W0為初始體重，Wtd為第t天的體重,t為飼養(yǎng)天數(shù)(d),Nt為第t天后各組魚總數(shù)(尾),N0為初始各組魚總數(shù)(尾)，WWG為濕重增加(wet weight gain)，Id和Ip分別為飼料和蛋白的攝入量(以干重計(jì))。

1.3.2 鱸鯉血液生化指標(biāo)的測定 試驗(yàn)期(80d)結(jié)束后，從各處理組中取6尾魚(每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取2尾)，采用尾部靜脈血管取血法取血。將所得樣品分為2份，一份所得血樣不加任何抗凝劑，在室溫下傾斜30°讓其自然凝固，再用高速冷凍離心機(jī)在4℃、4000r/min條件下離心10min，最后分離上清液(血清)裝入潔凈試管中，測定超氧化物歧化酶(SOD)、堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和血清總蛋白Pr含量，上述指標(biāo)測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所,測定步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。另一分血樣添加抗凝劑EDTA，抗凝血樣用CA620-VET1型全自動血細(xì)胞分析儀(MEDONIC，瑞典)進(jìn)行紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、白細(xì)胞數(shù)(WBC)、血紅蛋白數(shù)(HGB)測定。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，以P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 飼料蛋白水平對鱸鯉幼魚生長性能的影響

飼料蛋白水平對鱸鯉幼魚生長性能的影響見表2。表2顯示：經(jīng)過80d飼養(yǎng)后，Ⅲ組增重率(WGR)最大達(dá)164.9%，顯著高于其余各組(P<0.05)，Ⅱ組和Ⅳ組明顯高于Ⅴ組(P<0.05)，Ⅴ組明顯高于I組(P<0.05)，I組最小，為106.2%，總的趨勢有隨著蛋白質(zhì)水平增加先上升后下降的趨勢；對比各組蛋白質(zhì)利用率(PER)發(fā)現(xiàn)，各組PER表現(xiàn)出和WGR一樣特點(diǎn)，Ⅲ組最高，I組最小，Ⅲ組>Ⅱ和Ⅳ組>Ⅴ組>I組，差異顯著(P<0.05)；而日糧系數(shù)(FCR)，Ⅲ組<Ⅳ組<Ⅱ組<Ⅴ組

2.2 飼料蛋白質(zhì)水平對鱸鯉部分血液指標(biāo)的影響

飼料蛋白質(zhì)水平對鱸鯉幼魚血液指標(biāo)影響見表3。表3顯示：經(jīng)過80d飼養(yǎng)過后，血液WBC、HGB、RBC均以Ⅲ組最高，顯著高于其余各組(P< 0.05)；而以Ⅰ組最低，顯著低于其余各組(P< 0.05)；3個(gè)指標(biāo)變化均有隨著蛋白質(zhì)水平增加先上升后下降趨勢；RBC數(shù)變化為，Ⅲ組>Ⅱ和Ⅳ組>Ⅴ組>I組；WBC數(shù)變化為Ⅲ組>Ⅳ組>Ⅱ和Ⅴ組>I組；HGB含量變化為，Ⅲ組>Ⅳ和Ⅴ組>Ⅱ組>I組。對比各組血清中酶活性可以發(fā)現(xiàn)，SOD、CAT、GSH-P x、AKP、ACP的活力表現(xiàn)出大致相同的變化趨勢，即隨飼料蛋白水平的提高先上升后下降，5種酶均以Ⅲ組的酶活力最高，顯著高于其余各組(P< 0.05)，而MDA含量則表現(xiàn)出先下降后上升的相反趨勢，Ⅲ組MDA含量最低，Ⅰ組>Ⅱ組和Ⅴ組>Ⅳ和Ⅲ組。

表2 不同蛋白質(zhì)水平飼料對鱸鯉生長性能的影響

表3 不同蛋白質(zhì)水平飼料對鱸鯉部分血液指標(biāo)的影響

3 討論

飼料中適宜的蛋白質(zhì)水平可以促進(jìn)魚類生長和提高飼料利用率。相關(guān)研究表明，飼料中適宜的蛋白質(zhì)水平能夠促進(jìn)生長和飼料利用，缺乏和過量均不利于生長。這是因?yàn)?，飼料中蛋白質(zhì)供給不足時(shí)，飼料蛋白質(zhì)中用以滿足機(jī)體組織基礎(chǔ)代謝的比例增大，而用于生長的比例相對減少，魚體增重較慢，甚至?xí)?dǎo)致體重負(fù)增長[7]。而飼料中蛋白質(zhì)過量時(shí)，過多的氨基酸則會加重肝功能負(fù)擔(dān)，加大機(jī)體的氮代謝負(fù)荷，機(jī)體攝取多于的氨基酸用于產(chǎn)熱和其它功能，而不是蛋白質(zhì)沉積，造成了大量氨基酸的浪費(fèi)，增加飼料成本，且不利于魚類增重增產(chǎn)。本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的5個(gè)飼料蛋白質(zhì)水平中，40．10%組鱸鯉幼魚的生長性能指標(biāo)(WGR、PER、FCR)均達(dá)到最佳。已有魚類的蛋白質(zhì)需求研究結(jié)果，羅非魚幼魚為28%～32%，黃顙魚幼魚(10g)約為44%～45%[8]，美洲鰻鱺幼魚(8g)為47%[9], 長吻魚種(12g)為46.9%～49.5%[10], 烏鱧幼魚(0.5g)為55%[11]，巖原鯉幼魚為40%，鯉魚幼魚為43%～47%，草魚幼魚41%～43%，青魚幼魚41%，黃顙魚幼魚為44%～45%，泥鰍幼魚為45.5%[4-7]，各魚類對蛋白質(zhì)需求大小有所差異，這可能與魚類品種、規(guī)格、養(yǎng)殖環(huán)境(水溫、pH、溶氧)、飼料營養(yǎng)來源和投喂水平等有關(guān)。本試驗(yàn)表明鱸鯉幼魚對蛋白質(zhì)需求量與巖原鯉幼魚接近，可能因?yàn)閮煞N魚類物種親緣性較近，生活環(huán)境類似。

體內(nèi)清除自由基的酶系統(tǒng)主要由SOD、GSH-Px和CAT3種酶組成，這幾種酶可以單獨(dú)作用，也可以起到協(xié)同增效的作用，對抗機(jī)體有氧代謝產(chǎn)生的活性氧引起的氧化應(yīng)激(oxygenstress)。MDA是脂質(zhì)過氧化物水解產(chǎn)物，其含量反映機(jī)體中過氧化自由基的存在及其反應(yīng)程度。AKP主要存在于骨，肝臟和腸道等許多組織中，當(dāng)骨細(xì)胞代謝活躍時(shí)可見血清堿性磷酸酶活性升高，故AKP傳統(tǒng)的被用作骨更新指標(biāo)[13]。ACP被認(rèn)為是高等動物體內(nèi)巨噬細(xì)胞溶酶體的標(biāo)志酶[14-15]，在魚類等低等脊椎動物中也起著防御和消化的雙重功能，ACP廣泛分布于動物組織溶酶體中，機(jī)體ACP活性可以作為體液免疫指標(biāo)來間接反映機(jī)體免疫系統(tǒng)中吞噬細(xì)胞清除異物的能力。對比各種血液生化指標(biāo)，可以看出蛋白質(zhì)水平為40.10%時(shí)，鱸鯉幼魚血液RBC、WBC和HGB為5組中最高，反映此組魚苗處于較好的營養(yǎng)水平和健康狀況；SOD、CAT、GSH-Px、AKP、ACP、等酶活力也是最高，同時(shí)反映此組鱸鯉幼魚具有較好的抗氧化能力和較強(qiáng)的非特異性免疫功能。通過本試驗(yàn)結(jié)果和上述分析，飼料蛋白質(zhì)水平為40.10%，可明顯改善鱸鯉魚苗生長性能和非特異性免疫功能。