錢麗萍 陳阿虹 陳婉清 李 唯 彭華毅,2* 闕慧卿 林 綏*

1.福建省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院 福建省醫(yī)學(xué)測試重點實驗室，福建 福州 350001；2.福建出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心，福建 福州 350003

金線蓮[Anoectochilusroxburghii(Wall.) Lindl.]是開唇蘭屬(Anoectochilus)草本植物，有“藥王”“金草”的美稱，別名金線蘭、金蠶、金石松等[1-2]，主要分布于福建、廣西、云南、臺灣等地。金線蓮全草入藥，具有清熱涼血、祛風(fēng)利濕功效[3-4]，主要用于糖尿病、血尿、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等[5]。金線蓮(Anoectochilusroxburghii)、臺灣銀線蘭(Anoectochilusformosanus)和滇南開唇蘭(Anoectochilusburmannicus)均來源于蘭科開唇蘭屬，是親緣關(guān)系相近的3種植物。臺灣銀線蘭具有清火，解熱，降血壓的功效，用于治療肝脾病、肺癆肺病、血熱吐血、肝火等[6]?，F(xiàn)代藥理研究表明，三種植物的水提物、多糖、黃酮等活性成分，具有抗炎[7-9]、抗氧化[9-11]活性。金線蓮作為民間名貴藥材，其揮發(fā)油主要有棕櫚酸、亞油酸、亞麻酸等活性成分，具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)作用[12-13]，而臺灣銀線蘭和滇南開唇蘭揮發(fā)油活性目前未見報道。研究發(fā)現(xiàn)，不同栽培方式金線蓮揮發(fā)油化學(xué)成分種類和含量存在差異[14-15]，而不同生長期金線蓮及其近源種揮發(fā)油化學(xué)成分對比分析目前未見報道。為此，本課題對這三種植物揮發(fā)油化學(xué)成分進行比較研究，為開唇蘭屬藥用植物的進一步開發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料

1.1 原料藥材 5份金線蓮(A.roxburghii)、1份臺灣銀線蘭(A.formosanus)、1份滇南開唇蘭(A.burmannicus)(表1)，由福建省華之韻生物科技有限公司提供，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)(藥用植物學(xué)/中藥鑒定)楊成梓副教授及褚克丹教授鑒定。

表1 金線蓮及其近緣種采收期

1.2 儀器與試劑 Angilent 7890A GC/7000QQQB串聯(lián)四級桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國Angilent科技有限公司)；KQ2200E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；AL204型電子分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；Centrifuge 5810 R高速冷凍離心機(德國Eppendorf公司)；RE-2000B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；SHZ-III型循環(huán)水真空泵(上海亞榮生化儀器廠)；ABZ1-0501-P型艾科浦超純水系統(tǒng)(頤洋企業(yè)發(fā)展有限公司)。

試驗用試劑均為國產(chǎn)分析純。

2 方法

2.1 揮發(fā)油的提取 各稱取金線蓮及其近緣種藥材50 g，剪碎成約0.5 cm小段，置于1 L容量瓶中，加入水500 mL，浸泡24 h后，自動攪拌機攪拌1 h，再置于揮發(fā)油提取器中微沸狀態(tài)提取15 h，收集提取液中的揮發(fā)油，加入乙醚萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，離心后取上清，進樣前用乙醚稀釋成適當(dāng)濃度，用0.22 μm微孔濾膜過濾，備用。

2.2 揮發(fā)油的GC-MS分析 色譜柱：石英毛細管柱DB-1MS (30 m×0.25 mm×0.25 μm；柱溫：40 ℃，以4 ℃/min升溫到250 ℃保持5 min)，進樣口溫度：250 ℃；載氣為高純度氦氣，流速：1.0 mL/min，進樣量：0.5 μL；不分流。 質(zhì)譜條件：離子源為EI源，離子源溫度230 ℃，電子能源70 eV，接口溫度280 ℃，四級桿溫度150 ℃，質(zhì)量掃描范圍為30～500 amu，電子倍增器電壓為1381 eV；定性分析通過NITS08.L標(biāo)準質(zhì)譜檢索庫檢索定性，同時采用峰面積歸一化法計算組分的相對含量。

3 結(jié)果

金線蓮及其近源種揮發(fā)油通過上述GC-MS條件分析，根據(jù)NITS08.L標(biāo)準質(zhì)譜庫檢索，采用峰面積歸一化法計算組分的相對百分含量，從7個樣品揮發(fā)油中鑒定了13(1)、22(2)、28(3)、22(4)、10(5)、32(6)和53(7)個化合物，分別占揮發(fā)油總量的93.53%、96.98%、94.53%、92.44%、84.32%、89.16%和83.18%，總離子流圖如圖1～7所示，化學(xué)成分分析結(jié)果如表2所示。

圖1 1月齡采收期福建三明金線蓮揮發(fā)油成分總離子流圖 圖2 2月齡采收期福建三明金線蓮揮發(fā)油成分總離子流圖

圖5 福建南平金線蓮揮發(fā)油成分總離子流圖 圖6 臺灣銀線蘭揮發(fā)油成分總離子流圖

圖7 滇南開唇蘭揮發(fā)油成分總離子流圖

表2 金線蓮及近緣種揮發(fā)油成分分析

表2 金線蓮及近緣種揮發(fā)油成分分析

表2 金線蓮及近緣種揮發(fā)油成分分析

表2 金線蓮及近緣種揮發(fā)油成分分析

4 討論

4.1 不同生長期、不同產(chǎn)地的金線蓮揮發(fā)油化學(xué)成分既有共性，也有個性 從表2可知，5份金線蓮樣品的揮發(fā)油化學(xué)成分以酸類化合物為主，其中，亞油酸和棕櫚酸含量較高，它們是揮發(fā)油的主要活性物質(zhì)，具有降低血液膽固醇[15]和抑制腫瘤[16]活性。對鑒定出的化學(xué)成分進行對比分析，發(fā)現(xiàn)6月齡福建三明金線蓮含有0.03%酮類化合物，較其他樣品化學(xué)種類數(shù)豐富。文獻報道不同栽培模式(組培和地栽)[17-18]、不同光照度[19]、不同移栽月齡[20-21]和不同地理種源[22]的福建金線蓮主要活性成分(多糖、總黃酮等)存在差異，這些可能也是引起不同生長期、不同產(chǎn)地金線蓮揮發(fā)油成分和含量差異的重要原因。

4.2 不同品種的開唇蘭屬植物揮發(fā)油化學(xué)成分含量和種類存在差異性 通過對金線蓮、臺灣銀線蘭和滇南開唇蘭7份樣品揮發(fā)油化學(xué)成分對比分析發(fā)現(xiàn)，2,3,3-三甲基己烷、亞油酸和棕櫚酸為共有成分。2,2,4,6,6-五甲基庚烷、2,6,11,15-四甲基十六烷、2,6,10-三甲基十二烷、3,8-二甲基十一烷、4-乙基十一烷和5-(2-甲基丙基)壬烷為臺灣銀線蘭和滇南開唇蘭單獨共有成分。此外，本實驗檢出臺灣銀線蘭揮發(fā)油含有順式-10-十七碳烯酸(30.08%)，其含量約為1月齡滇南開唇蘭揮發(fā)油中順式-10-十七碳烯酸[23]的18倍。不同種之間的揮發(fā)油化學(xué)成分含量和種類存在差異。

本實驗通過GC-MS檢測分析了金線蓮及其近源種揮發(fā)油化學(xué)成分，結(jié)果表明金線蓮揮發(fā)油化學(xué)成分受生長期和產(chǎn)地的影響，而同屬不同種藥物之間的揮發(fā)油化學(xué)成分存在差異。本實驗研究為開唇蘭屬藥用植物的進一步開發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

致謝：各個金線蓮品種均由福建省華芝韻生物科技有限公司提供，由福建中醫(yī)藥大學(xué)(藥用植物學(xué)/中藥鑒定)楊成梓副教授及褚克丹教授鑒定，GC-MS是由福建省檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心的曹潔及彭華毅檢測。