陳振華，楊茂紅

（1.重慶大學(xué)附屬三峽醫(yī)院設(shè)備保障部；2.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校附屬人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 404000）

TEK-II 全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀采用電阻抗計(jì)數(shù)法，檢測(cè)結(jié)果包括21 項(xiàng)血液參數(shù)及3 個(gè)直方圖，具有檢測(cè)速度快捷，結(jié)果準(zhǔn)確且重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。本文主要圍繞TEK-II 全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)原理、工作時(shí)序，對(duì)使用過(guò)程中出現(xiàn)的典型故障進(jìn)行分析、排除介紹。

1 檢測(cè)原理

電阻抗法細(xì)胞計(jì)數(shù)原理是根據(jù)血細(xì)胞非傳導(dǎo)性的性質(zhì)，以對(duì)等滲電解質(zhì)溶液中懸浮顆粒在通過(guò)計(jì)數(shù)小孔時(shí)引起的電阻變化進(jìn)行檢測(cè)為基礎(chǔ)，進(jìn)行計(jì)數(shù)和體積測(cè)定。原理如圖1所示，電極間的電阻遵守Ohms 定律：V=R·I=P(L/a)（V:電極兩端的電壓；I：電流；R：寶石微孔電阻；P：電解質(zhì)阻抗；L:寶石微孔長(zhǎng)度；a:寶石微孔橫截面積）當(dāng)細(xì)胞快速流經(jīng)寶石微孔時(shí)，由于細(xì)胞是不良導(dǎo)體，寶石微孔電阻R 加大，相當(dāng)于寶石微孔的橫截面積a 減小，在電流恒定的情況下，出現(xiàn)瞬間的電壓變化而產(chǎn)生一個(gè)電脈沖，電脈沖的數(shù)量就是流經(jīng)寶石微孔的細(xì)胞數(shù)；電脈沖的大小與細(xì)胞大小成正比，從而能計(jì)數(shù)細(xì)胞并測(cè)定細(xì)胞大小。

圖1 電阻抗法血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理

2 液路工作時(shí)序分析

2.1 第一次吸樣

吸樣注射器（M4）下行，吸樣針從樣品管中吸取20ul全血。

2.2 吸樣針外壁清洗

吸樣針上行時(shí)，排液泵工作通過(guò)8 號(hào)閥抽吸稀釋液清洗針外壁，同時(shí)M6 開啟屏蔽蓋。

2.3 第一次稀釋

吸樣針轉(zhuǎn)至白細(xì)胞計(jì)數(shù)池，池內(nèi)液體同時(shí)排空，然后樣針下行至池底部噴出樣本，同時(shí)M7 注射器上移打入4ml 稀釋液混勻，形成白細(xì)胞計(jì)數(shù)細(xì)胞液。

2.4 第二次吸樣

吸樣注射器（M4）下行，樣針下行至白細(xì)胞計(jì)數(shù)池中部，吸取32ul 白細(xì)胞計(jì)數(shù)細(xì)胞液。

2.5 第二次稀釋

吸樣針上行轉(zhuǎn)至紅細(xì)胞計(jì)數(shù)池，噴入吸取的白細(xì)胞計(jì)數(shù)液。M5 注射器上移噴入5ml 的稀釋液，混合形成紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)細(xì)胞液，同時(shí)溶血?jiǎng)┳⑸淦?M4)上行向白細(xì)胞計(jì)數(shù)池打入1ml 溶血?jiǎng)┲涟准?xì)胞計(jì)數(shù)液充分混勻。

2.6 計(jì)數(shù)和比色

M6 將屏蔽蓋合上，接著計(jì)數(shù)注射器(M3）緩緩下行，儀器開始計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)液定量為270ul 左右，計(jì)數(shù)完成后儀器對(duì)白細(xì)胞混合液進(jìn)行比色。

2.7 白細(xì)胞計(jì)數(shù)池的第一次清洗

屏蔽蓋打開，白細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)液體排空，吸樣針轉(zhuǎn)至該池內(nèi)由M7 上行噴入5ml 的稀釋液進(jìn)行清洗。

2.8 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)池的清洗

吸樣針轉(zhuǎn)至紅細(xì)胞計(jì)數(shù)池由M5 上行噴入5ml 稀釋液進(jìn)行清洗。

2.9 白細(xì)胞計(jì)數(shù)池的第二次清洗

吸樣針再次轉(zhuǎn)至白細(xì)胞計(jì)數(shù)池，由M7 上行噴入5ml 的稀釋液進(jìn)行清洗，過(guò)后又噴入5ml 稀釋液待機(jī)浸泡。

2.10 回到準(zhǔn)備狀態(tài)

吸樣針歸位，屏蔽蓋合上，計(jì)數(shù)結(jié)果顯示,儀器進(jìn)入準(zhǔn)備做樣狀態(tài)。

3 故障現(xiàn)象及維修

（1）開機(jī)自檢結(jié)束后，WBC、RBC 及PLT 本底報(bào)告提示超標(biāo)。①試劑中的雜質(zhì)和氣泡。試劑中的雜質(zhì)或氣泡經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)孔時(shí)，會(huì)引起計(jì)數(shù)電壓的變化，雜質(zhì)或氣泡越大，電壓越大，本底越高。對(duì)于不合格及有雜質(zhì)的試劑必須立即更換，更換后需要多執(zhí)行“更換試劑引導(dǎo)”程序，排除管路系統(tǒng)中的氣泡。②外界對(duì)試劑中電離子的數(shù)量與溶度的影響。溫度越高，試劑中電離出的導(dǎo)電離子越多，溶度高，其導(dǎo)電性能越好，液體通過(guò)計(jì)數(shù)孔的電壓越穩(wěn)定。反之，溫度越低，電離出的離子少，結(jié)晶多，導(dǎo)電性能低，液體通過(guò)計(jì)數(shù)孔的電壓變化大，本底高。該設(shè)備的工作溫度范圍為10～35℃，將環(huán)境溫度提升至15℃，本底歸零。外界中的電場(chǎng)或磁場(chǎng)會(huì)使試劑中的離子偏移，導(dǎo)致液體中的正負(fù)偏向。計(jì)數(shù)時(shí)，正離子會(huì)使電平拉高，負(fù)離子會(huì)使電平拉低，因?yàn)殡娖降淖兓?，從而產(chǎn)生本底。所以儀器應(yīng)遠(yuǎn)離離心機(jī)、變壓器等高頻設(shè)備。③電極線生銹或接觸不良。電極線生銹或接觸不良，導(dǎo)致電極兩端電阻增大，電極線兩端的電壓也隨著增大，當(dāng)試劑通過(guò)計(jì)數(shù)孔時(shí)，產(chǎn)生電壓的變化也變大，從而產(chǎn)生本底，更換新電極即可解決。④計(jì)數(shù)注射器M3 漏氣、電磁閥EV5 及EV7 性能不良。計(jì)數(shù)注射器M3 及電磁閥EV5、EV7 漏氣導(dǎo)致通過(guò)計(jì)數(shù)孔的流速減慢，通過(guò)計(jì)數(shù)孔的電離子數(shù)量減少，電阻變大，加載在兩端的電壓變大，從而產(chǎn)生本底，更換M3 計(jì)數(shù)注射器破損的密封圈即可。EV5、EV7 電磁閥性能不良，開合不徹底，排液不暢通，導(dǎo)致試劑從計(jì)數(shù)池溢出也會(huì)產(chǎn)生本底。如果清洗電池閥的閥芯后故障依舊，必須立即更換。⑤計(jì)數(shù)孔的孔徑變化（俗稱“堵孔”）導(dǎo)致。稀釋液中的雜質(zhì)經(jīng)過(guò)寶石孔時(shí)會(huì)引起計(jì)數(shù)孔電壓的變化，電壓的變化隨著計(jì)數(shù)孔直徑的大小改變。當(dāng)寶石孔的孔徑變小時(shí)，其電壓變大，產(chǎn)生本底。在長(zhǎng)期使用過(guò)程中，蛋白質(zhì)粘附計(jì)數(shù)孔導(dǎo)致孔徑變小或微堵時(shí)有發(fā)生。可以選擇儀器的“清洗”功能進(jìn)行正反沖清洗。或者進(jìn)入“診斷”菜單，手動(dòng)打開EV5、EV7 兩個(gè)電磁閥及廢液泵，排盡兩個(gè)計(jì)數(shù)池中的稀釋液，用注射器加入酶清洗液進(jìn)行浸泡。對(duì)于頑固性堵孔，可以拆下計(jì)數(shù)杯底座連接M3計(jì)數(shù)注射器的硅膠管，連接50ml 注射器手工正反沖計(jì)數(shù)孔，即可解決。

（2）空白測(cè)試為0，RBC 及PLT 計(jì)數(shù)正常，WBC 和HGB顯示為“****”。①溶血素沒加入導(dǎo)致。該儀器WBC 和HGB的共用一個(gè)計(jì)數(shù)池檢測(cè)。工作時(shí)序第5 步第二次稀釋結(jié)束后，EV6 電池閥打開，溶血?jiǎng)┳⑸淦鱉4 上行向WBC 計(jì)數(shù)池注入1ml 溶血?jiǎng)Ｈ苎乜焖偃芙釸GB 釋放出HGB，釋放出的HGB與溶血素中的活性劑結(jié)合形成復(fù)合物進(jìn)行比色，遵循朗伯—比爾定律。同時(shí)使WBC 形成規(guī)律性的變化，細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)滲透出細(xì)胞膜，形成“膜胞核”。當(dāng)溶血?jiǎng)┘尤氩怀浞謺r(shí)，RBC破裂不完全導(dǎo)致WBC 假性升高HGB 異常。此故障可以手工加入1ml 溶血?jiǎng)┻M(jìn)一步確定。沿著管路依次檢查溶血?jiǎng)﹪娮臁4 注射器、EV4 電池閥，發(fā)現(xiàn)M4 注射器漏液，更換M4 注射器活塞密封圈后恢復(fù)正常。②WBC 計(jì)數(shù)池臟導(dǎo)致。高鐵血紅蛋白衍生物覆著在WBC 計(jì)數(shù)池，影響了WBC 通道的計(jì)數(shù)。用廠家提供的探頭清洗液對(duì)杯壁進(jìn)行清洗，故障解除。

4 結(jié)語(yǔ)

全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀是一種精密的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)儀器，在各級(jí)醫(yī)院中廣泛使用，其故障大多分為液路故障和氣路故障兩大部分，電路故障的概率相對(duì)較小。同時(shí)，參數(shù)設(shè)置的增益范圍和人員操作的的不規(guī)范將會(huì)造成不同的故障現(xiàn)象。WBC分類不準(zhǔn)確，RGB 和PLT 計(jì)數(shù)互相干擾，直方圖異常等故障時(shí)有發(fā)生。醫(yī)學(xué)工程技術(shù)人員只有熟練掌握血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)原理與基本結(jié)構(gòu)，聯(lián)合臨床檢驗(yàn)醫(yī)師共同分析探索，并不斷提升業(yè)務(wù)水平。