王 園 ，師 錦 ，謝曉妍 ，陳丙生 ，周雙海 ＊

（1.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，北京 102206；2.大興區(qū)畜牧技術(shù)推廣站，北京 102602）

豬細(xì)環(huán)病毒（Torque teno sus virus，TTSuV）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的又一種很小的單股環(huán)狀DNA病毒，屬于指環(huán)病毒科，最早于1999年報(bào)道在豬體內(nèi)檢出。目前TTSuV有TTSuV1和TTSuV2兩種血清型，已有研究報(bào)道顯示，TTSuV1單獨(dú)感染可引起仔豬出現(xiàn)一定的病理變化[1]，TTSuV1與豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）或豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）共同感染可促進(jìn)豬皮炎與腎病綜合征或斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征的發(fā)生[2-3]，提示TTSuV1具有潛在致病性，同時(shí)也提示TTSuV1與PRRS或豬圓環(huán)病毒病發(fā)生之間可能存在一定關(guān)聯(lián)性。有報(bào)道顯示TTSuV1在臨床上的檢出率比較高[4]；同時(shí)，在當(dāng)前的國(guó)內(nèi)規(guī)模化豬場(chǎng)，PRRSV感染與PCV2感染都非常普遍，PRRS與豬圓環(huán)病毒病也都時(shí)有發(fā)生，是當(dāng)前危害養(yǎng)豬生產(chǎn)的2種主要傳染病。因此，為了更加有效地防控PRRS與豬圓環(huán)病毒病，有必要了解當(dāng)前規(guī)模化豬場(chǎng)中TTSuV1感染的流行情況。

1 材料與方法

1.1 臨床樣品來(lái)源

京津冀地區(qū)、華東地區(qū)、華南地區(qū)15個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)578頭斷奶仔豬血清均采集分離于2020年。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)材料

檢測(cè)TTSuV1抗體的ELISA試劑由北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物疫病研究室提供[5]，病毒DNA提取試劑盒與PCR試劑分別為天根生化科技（北京）有限公司與北京康為世紀(jì)生物科技有限公司產(chǎn)品，檢測(cè)TTSuV1核酸的引物（上游引物序列為5′-CGGGTTCAGGA GGCTCAATT-3′、下游引物序列為5′-GCCATTCGGAACTG CACTTACT-3′）[5]由生工生物工程（上海）有限公司合成。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

病毒抗體檢測(cè)與病毒DNA提取按照其試劑盒說(shuō)明書操作。病毒核酸檢測(cè)采用PCR方法。病毒DNA提取按照其試劑盒說(shuō)明書操作；PCR擴(kuò)增采用20 μL反應(yīng)體系，其中含有10 pmol上游引物、10 pmol下 游 引 物、5 μL病 毒DNA；PCR增程序?yàn)椋?5 ℃ 3 min，95 ℃ 25 s、55 ℃ 25 s、72 ℃ 25 s、共40次循環(huán)，72 ℃ 9 min；PCR產(chǎn)物分析是在PCR擴(kuò)增結(jié)束后，取10 μL擴(kuò)增產(chǎn)物置于1.8%瓊脂糖凝膠上電泳，之后在凝膠成像儀上觀察是否有特異性目的條帶。

2 結(jié)果與分析

檢測(cè)了國(guó)內(nèi)部分地區(qū)15個(gè)豬場(chǎng)的578頭保育豬，病毒核酸與抗體檢測(cè)結(jié)果（表1）顯示，豬細(xì)環(huán)病毒1型的核酸與抗體的豬場(chǎng)陽(yáng)性率均為100%；核酸陽(yáng)性率介于14.29%～100%之間，總體陽(yáng)性率為73.88%；抗體陽(yáng)性率介于14.29%～100%之間，總體陽(yáng)性率為78.55%；雖然抗體總體陽(yáng)性率高于核酸總體陽(yáng)性率，但二者之間并無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表1 病毒核酸與抗體檢測(cè)結(jié)果

比較分析同一個(gè)豬場(chǎng)的病毒核酸陽(yáng)性率和病毒抗體陽(yáng)性率后發(fā)現(xiàn)，僅有1個(gè)豬場(chǎng)的兩種陽(yáng)性率正好相等，而絕大多數(shù)豬場(chǎng)的兩種陽(yáng)性率并不完全一致，其占比達(dá)到93.33%（14/15）；其中，病毒抗體陽(yáng)性率高于病毒核酸陽(yáng)性率的有60%（9/15），而病毒核酸陽(yáng)性率高于病毒抗體陽(yáng)性率的只有33.33%（5/15）。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)豬場(chǎng)的病毒核酸陽(yáng)性率和病毒抗體陽(yáng)性率都超過(guò)50%，占比達(dá)到86.67%（13/15），其中超過(guò)80%的占53.33%（8/15）；都低于50%的僅占13.33%（2/15），其中1個(gè)豬場(chǎng)都低于20%。

3 討論

目前國(guó)內(nèi)檢測(cè)豬細(xì)環(huán)病毒1型（TTSuV1）感染絕大多數(shù)采用PCR方法，但此方法是通過(guò)檢測(cè)病毒核酸來(lái)直接檢測(cè)病毒，這對(duì)正處于病毒感染階段且體內(nèi)具有一定病毒含量的個(gè)體是易于檢出的，但對(duì)感染過(guò)程已經(jīng)結(jié)束或者感染雖然持續(xù)存在但體內(nèi)病毒含量很低的個(gè)體則難以檢出，而抗體檢測(cè)則可以解決這個(gè)難題，故兩種方法聯(lián)合使用無(wú)疑會(huì)使檢測(cè)結(jié)果更加全面和準(zhǔn)確。聯(lián)合應(yīng)用PCR方法和ELISA方法對(duì)來(lái)源于京津冀、華東六省、華南兩省共11個(gè)省市15個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的578份血清的檢測(cè)結(jié)果顯示，核酸與抗體的豬場(chǎng)陽(yáng)性率都是100%，充分顯示所有檢測(cè)豬場(chǎng)均存在TTSuV1感染。檢測(cè)個(gè)體核酸的總體陽(yáng)性率為73.88%，檢測(cè)個(gè)體抗體的總體陽(yáng)性率為78.72%，雖然兩種方法的檢測(cè)結(jié)果之間存在一定差別，但沒有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果基本一致。

進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，TTSuV1感染率超過(guò)50%以上的豬場(chǎng)達(dá)到85%以上，超過(guò)80%的豬場(chǎng)占50%以上，而低于20%的豬場(chǎng)不足10%。王礞礞等[6]對(duì)2008—2009年7個(gè)省份的258份樣品進(jìn)行PCR檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)TTSuV1感染率為37.6%，李俊等[7]對(duì)2009—2010年山東省10個(gè)豬場(chǎng)的230份樣品進(jìn)行PCR檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)TTSuV1感染率為45.2%，王俊等[4]對(duì)2014年京津地區(qū)的60份斷奶仔豬樣品進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)TTSuV1感染率為36.7%，這些資料顯示前些年TTSuV1在我國(guó)不少地區(qū)豬群中已有不低的感染率，此次調(diào)查顯示出更高的TTSuV1感染率，進(jìn)一步說(shuō)明TTSuV1在我國(guó)不少地區(qū)豬群中廣泛流行。一些文獻(xiàn)報(bào)道TTSuV1與PRRSV或 PCV2共同感染可促進(jìn)相關(guān)疾病發(fā)生[2-3]，豬圓環(huán)病毒病豬體內(nèi)TTSuV1載量明顯高于健康豬[8]，臨床感染了TTSuV1的仔豬對(duì)PRRS疫苗的免疫反應(yīng)明顯降低[9]，這些文獻(xiàn)綜合提示TTSuV1感染具有潛在協(xié)同致病性。因此，在當(dāng)前PRRSV感染與PCV2感染都普遍流行的背景下，臨床上TTSuV1的高感染率值得適當(dāng)關(guān)注。