王鳳春，孫海濤

（1河北省板栗工程技術(shù)研究中心 河北遷西 064300；2遷西縣板栗產(chǎn)業(yè)研究發(fā)展中心）

板栗（Castanea mollissima BL.）屬殼斗科（Fagaceae）栗屬（Castanea）植物，是重要的經(jīng)濟(jì)林樹種[1]。板栗樹是雌雄同株異花植物，板栗花是指板栗花序中的雄性花序，板栗雌雄花的數(shù)量差異很大，在實(shí)際生產(chǎn)中需要人工疏除大量的雄花序。栗蓬為板栗的總苞。板栗花和栗蓬中均含有大量黃酮物質(zhì)[2～3]，其具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤等藥理活性及藥用價值[4～7]。隨著板栗生產(chǎn)發(fā)展的加快，板栗花和栗蓬資源日益豐富，但對其開發(fā)利用還很薄弱，造成的浪費(fèi)日益加重。因此對板栗花和栗蓬中黃酮的開發(fā)利用，既具有可觀的經(jīng)濟(jì)效益，又可解決板栗花與栗蓬資源浪費(fèi)的問題。本研究以燕山早豐的板栗雄花和栗蓬為原料提取總黃酮，并采用濾紙片法對總黃酮的抑菌活性進(jìn)行驗(yàn)證，旨為板栗花和栗蓬的藥用功能開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料及試劑 板栗花、栗蓬分別于2020年6月初和10月底采自河北省唐山市遷西縣燕山早豐園區(qū)，自然晾干，于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中40℃避光干燥，經(jīng)藥物粉碎機(jī)粉碎、過20目篩后同干燥劑一起裝入密封袋中備用。試驗(yàn)用菌為金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、肺炎鏈球菌、綠色鏈球菌、大腸桿菌和腸炎沙門氏菌6種，均由沈陽藥科大學(xué)藥理實(shí)驗(yàn)室提供。試驗(yàn)儀器和設(shè)備有藥物粉碎機(jī)、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、手提式壓力蒸汽滅菌器、超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱和20目篩。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 藥敏片制備 取定性濾紙（新華1號），借助打孔器裁制成直徑6 mm的圓形小紙片。將圓形小紙片50片放入清潔干燥的青霉素空瓶中備用，再用單層報紙包住瓶口。經(jīng)121℃、15～20 min高壓消毒后，置于37℃恒溫箱中48 h，使其完全干燥。

1.2.2 粗黃酮提取制備 稱取燕山早豐的栗花、栗蓬干粉各20 g，放于1 000 mL燒杯內(nèi)，分別加入500 mL蒸餾水，水燒開煎煮3.0 h，過濾取其上清。濾液濃縮至50 mL后，分別加入50 mL的無水乙醇溶液和5 mL的1.0 mol/L的氫氧化鈉溶液，將液體靜置16 h后過濾，取其上清。上清液內(nèi)分別加入10 mL的1.0 mol/L的HCl溶液，靜置1 h后過濾，取沉淀即為總黃酮。1.2.3 抗菌藥紙片制作 分別取1.2.2制備的栗花、栗蓬總黃酮0.1 g，溶解于盛有1 mL無菌水的5 mL離心管中，移取0.25 mL加入到1.2.1制備的青霉素瓶中，并緩慢翻動圓形小紙片，使各紙片充分浸透藥液。同時在瓶口做好標(biāo)記，置于37℃恒溫箱中12 h，干燥后即密封備用。采用同樣方法制備青霉素藥敏紙片和蒸餾水紙片作為對照。

1.2.4 抑菌方法 在超凈臺內(nèi)，用滅菌后的接種環(huán)取適量細(xì)菌分別在培養(yǎng)皿邊緣相對4點(diǎn)涂菌，以每點(diǎn)開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后，找到第2點(diǎn)劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細(xì)菌均勻密布于培養(yǎng)皿中。先用酒精燈將鑷子滅菌，再取藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。可用鑷子輕按藥敏片，使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼。將平皿培養(yǎng)基置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24 h后，觀察試驗(yàn)效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 栗花總黃酮的抑菌作用 栗花總黃酮的抗菌藥紙片抑制7種細(xì)菌的抑菌環(huán)直徑見表1，栗花總黃酮的抗菌藥紙片對7種細(xì)菌的抑菌環(huán)直徑范圍3～6 mm，陽性對照青霉素藥敏片的7種細(xì)菌的抑菌環(huán)直徑范圍為12～16 mm，而陰性對照蒸餾水濾紙片對7種細(xì)菌均無抑制作用，說明栗花總黃酮對7種細(xì)菌均具有一定的抑制作用。

表1 栗花總黃酮抑菌試驗(yàn)結(jié)果

2.2 栗蓬總黃酮的抑菌作用 栗蓬總黃酮的抗菌藥紙片抑制7種細(xì)菌的抑菌環(huán)直徑見表2，栗蓬總黃酮的抗菌藥紙片對7種細(xì)菌的抑菌環(huán)直徑范圍4～6 mm，陽性對照青霉素藥敏片的7種細(xì)菌的抑菌環(huán)直徑范圍為11～16 mm，而陰性對照蒸餾水濾紙片對7種細(xì)菌均無抑制作用，說明栗蓬總黃酮對7種細(xì)菌均具有一定的抑制作用。

表2 栗蓬總黃酮抑菌試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

燕山早豐的栗花和栗蓬中總黃酮對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、肺炎鏈球菌、綠色鏈球菌、大腸桿菌、腸炎沙門氏菌和傷寒沙門氏菌7種細(xì)菌均具有一定的抑制作用。板栗花中總黃酮對金黃色葡萄球菌和傷寒沙門氏菌的抑制效果較強(qiáng)，對枯草芽孢桿菌和腸炎沙門氏菌的抑制效果次之；栗蓬中總黃酮對綠色鏈球菌的抑制效果較強(qiáng)，對枯草芽孢桿菌和大腸桿菌的抑制效果次之。板栗花和栗蓬可作為藥用材料，并具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。