潘月 鄭振榮 張開紅 劉雪琴 王敏

在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中，子宮內(nèi)膜癌（Endometrial Cancer，EC）最為常見，臨床治療以手術(shù)為主，但對(duì)于晚期EC 患者來說，術(shù)后5年生存率較差，僅為5%～15%［1］。EC 的確切發(fā)病原因尚未完全闡明，但有相關(guān)研究報(bào)道，EC 的發(fā)生可能與內(nèi)外源性雌激素刺激、體質(zhì)因素、遺傳因素等因素有關(guān)［2］。乳腺癌基因-1（breast cancer susceptibility gene 1，BRCA1）為抑癌基因，在乳腺癌、卵巢癌等惡性腫瘤中發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用［3］。胞命運(yùn)決定因子（Cell fate determination factor Dachshund，DACH1）是近年來新發(fā)現(xiàn)的乳腺癌抑制基因，與乳腺癌患者不良預(yù)后有著密切聯(lián)系［4］。S100A4 蛋白是鈣離子結(jié)合家族成員之一，參與細(xì)胞生長、分化、凋亡等多種細(xì)胞進(jìn)程［5］。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，S100A4 在結(jié)直腸癌、乳腺癌、胃癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用［6］。本研究重點(diǎn)分析BRCA1、DACH1 及S100A4 在EC 病情進(jìn)展及治療預(yù)后中的預(yù)測價(jià)值?，F(xiàn)研究報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016年3月至2018年9月收治的127 例EC 患者（127 份EC 組織）設(shè)為EC 組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合手術(shù)指征，入院后進(jìn)行經(jīng)腹廣泛或次廣泛性全子宮切除+雙附件切除＋盆腔淋巴結(jié)清掃；②均經(jīng)病理檢查確診為EC［7］；③治療配合度佳，隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神障礙者、因語言障礙無法配合的作者；②合并其他婦科惡性腫瘤、其他系統(tǒng)惡性腫瘤者；③復(fù)發(fā)的EC 患者；④術(shù)前接受過放化療治療及激素治療者。平均年齡（53.41±5.19）歲；根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynaecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期［8］：Ⅰ～Ⅱ期69 例，Ⅲ～Ⅳ期58 例。選取同期于本院進(jìn)行手術(shù)治療的133 例子宮內(nèi)膜非典型增生患者（133 份子宮內(nèi)膜不典型增生標(biāo)本）設(shè)為對(duì)照組，平均年齡（53.25±5.07）歲。2 組患者基線資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過，受試者或家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

采用S-P 免疫組化染色。將EC 組、對(duì)照組標(biāo)本經(jīng)常規(guī)石蠟切片、脫水。BRCA1、DACH1 及S100A4 兔多克隆抗體均采購自美國Epitomics 公司。免疫組化染色結(jié)果判定［8］：結(jié)合陽性細(xì)胞百分比和染色強(qiáng)度判定對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。陽性細(xì)胞百分比為0 計(jì)0 分，≤10%計(jì)1 分，＞10%～25%計(jì)2分，＞25%～50%計(jì)3 分，＞50%計(jì)4 分；細(xì)胞質(zhì)無染色計(jì)0 分，淡黃色計(jì)1 分，棕黃色計(jì)2 分，棕褐色計(jì)3 分；兩項(xiàng)評(píng)分之和≤2 分為陰性，≥3 分為陽性。

1.3 隨訪

自127 例EC 患者出院后開始隨訪，隨訪方式以電話隨訪、患者自行來院復(fù)查為主，上門隨訪為輔。術(shù)后1年內(nèi)隨訪12 次，隨訪截止時(shí)間為2019年9月，平均隨訪時(shí)長（10.12±1.15）月。如患者死亡，終止隨訪。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；繪制ROC 曲線，計(jì)算曲線下面積（AUC），以分析不同BRCA1、DACH1 及S100A4 表達(dá)對(duì)EC預(yù)后的預(yù)測價(jià)值；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中BRCA1、DACH1 及S100A4 表達(dá)情況

EC 組BRCA1、DACH1 陰性率以及S100A4 陽性率顯著高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1、圖1。

圖1 BRCA1、DACH1 及S100A4 在EC 組織及子宮內(nèi)膜非典型增生中的免疫組化染色圖（SP，× 500）Figure 1 immunohistochemical staining of BRCA1，Dach1 and S100A4 in EC and endometrial atypical hyperplasia（SP，× 500）

表1 不同組織中BRCA1、DACH1 及S100A4 表達(dá)情況［n（%）］Table 1 expression of BRCA1，Dach1 and S100A4 in different tissues［n（%）］

2.2 BRCA1、DACH1 及S100A4 與EC 患者病理特征的關(guān)系

組織學(xué)分級(jí)為G1、FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EC 患者BRCA1、DACH1 陰性率、S100A4 陽性率更高（P＜0.05）。不同年齡、組織類型、肌層浸潤深度、病理類型的EC 患者BRCA1、DACH1、S100A4 陽性表達(dá)率及陰性表達(dá)率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 BRCA1、DACH1 及S100A4 與EC 患者病理特征的關(guān)系［n（%）］Table 2 Relationship between BRCA1，Dach1，S100A4 and pathological features of EC patients［n（%）］

2.3 BRCA1、DACH1 及S100A4 不同表達(dá)的患者預(yù)后情況

隨訪結(jié)果顯示：127 例EC 患者術(shù)后1年生存率為82.67%（105/127）。BRCA1 及DACH1 陰性表達(dá)、S100A4 陽性表達(dá)死亡率顯著高于BRCA1 及DACH1 陽性表達(dá)、S100A4 陰性表達(dá)死亡率，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 BRCA1、DACH1 及S100A4 不同表達(dá)的患者預(yù)后情況［n（%）］Table 3 prognosis of patients with different expression of BRCA1，Dach1 and S100A4［n（%）］

2.4 BRCA1、DACH1 及S100A4 聯(lián)合檢測對(duì)EC患者預(yù)后的預(yù)測價(jià)

聯(lián)合BRCA1、DACH1、S100A4 檢測靈敏度、特異度、AUC 分別為89.65%、90.73%、0.962，各指標(biāo)檢測靈敏度、特異度、AUC 以三者聯(lián)合檢測最大（P＜0.05）。見表4。

表4 BRCA1、DACH1 及S100A4 聯(lián)合檢測對(duì)EC 患者預(yù)后的預(yù)測價(jià)值Table 4 the predictive value of combined detection of BRCA1，Dach1 and S100A4 in the prognosis of EC patients

3 討論

EC 是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，大多數(shù)早期EC 患者在經(jīng)過手術(shù)治療后預(yù)后較好，但晚期EC 患者因存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移后較差，術(shù)后復(fù)發(fā)率較高［9］。EC 的病因曾引起廣泛深入的探索，但尚難得到肯定的結(jié)論。隨著分子生物學(xué)的進(jìn)展，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)EC 的發(fā)生可能與癌基因、抑癌基因等異常表達(dá)有關(guān)［10］。

本研究中，EC 組BRCA1、DACH1 陰性率以及S100A4 陽性率顯著高于對(duì)照組，與既往研究結(jié)果相符［11］。BRCA1 于1990年首次被發(fā)現(xiàn)后，廣大學(xué)者立即對(duì)BRCA1 進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)BRCA1 的結(jié)構(gòu)、功能、突變與卵巢癌、乳腺癌等聯(lián)系密切［12］。以往文獻(xiàn)分析了DACH1 與乳腺組織、前列腺組織等多種惡性腫瘤的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)DACH1 與多種腫瘤相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)途徑耦聯(lián)，并對(duì)腫瘤細(xì)胞生長、分化發(fā)揮重要作用［13］，但DACH1 與EC 病情進(jìn)展的關(guān)系尚不清楚。S100A4 蛋白被稱為鈣離子結(jié)合蛋白，主要存在于細(xì)胞內(nèi)，能通過與靶蛋白相結(jié)合發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)［14］。既往研究發(fā)現(xiàn)，S100A4 在多種腫瘤組織中均存在高表達(dá)，包括膀胱癌、胰腺癌等，并可作為有價(jià)值的腫瘤預(yù)后標(biāo)志物［15］。

國外學(xué)者發(fā)現(xiàn)，BRCA1 作為基因組的看護(hù)者，可通過多種途徑發(fā)揮抑制腫瘤生長、增殖、轉(zhuǎn)移，并可修復(fù)DNA 雙鏈斷裂，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，參與基因轉(zhuǎn)錄活化及抑制等，具有多種生物功能［16］。劉建捷等［17］報(bào)道，S100A4 可通過與細(xì)胞凋亡、增殖相關(guān)蛋白相互作用，調(diào)控細(xì)胞存活、凋亡、增殖、遷移等功能。本研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)BRCA1、DACH1、S100A4 對(duì)腫瘤細(xì)胞異常增殖、惡性轉(zhuǎn)化的過程發(fā)揮重要作用，三者可作為評(píng)估EC 病情進(jìn)展的主要生化指標(biāo)。

隨訪結(jié)果表明，BRCA1、DACH1、S100A4 在EC 的發(fā)生、發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移及預(yù)后中發(fā)揮著重要的作用，三者均可作為評(píng)估EC 侵襲轉(zhuǎn)移能力、評(píng)估預(yù)后的重要生物學(xué)指標(biāo)。通過比較單一指標(biāo)及聯(lián)合三項(xiàng)指標(biāo)檢測，表明聯(lián)合三項(xiàng)指標(biāo)檢測可評(píng)估提高評(píng)估EC 患者病情的準(zhǔn)確性，可有效預(yù)測EC 患者預(yù)后情況。

綜上所述，BRCA1、DACH1 及S100A4 與EC發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后關(guān)系密切，臨床可通過聯(lián)合三項(xiàng)指標(biāo)檢測評(píng)估EC 患者病情，預(yù)測預(yù)后。