康 樂(lè)，苗晉鑫，方曉艷，張 瑾，張亞楠，苗明三

（河南中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，鄭州 450046）

近年來(lái)，肺癌發(fā)病率和病死率不斷上升。其中非小細(xì)胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）約占所有肺癌患者的4／5。臨床治療NSCLC以放化療為主，但該療法極易出現(xiàn)耐藥性和強(qiáng)副作用，且二線(xiàn)化療效果不佳；小分子酪氨酸激酶抑制劑和免疫療法的使用為一些患者中帶來(lái)前所未有的生存益處。但NSCLC的總體治愈率和生存率仍然很低［1］。中藥治療NSCLC有其獨(dú)特的療效，在提高NSCLC治愈率和改善NSCLC預(yù)后發(fā)揮了重要作用。

通關(guān)藤為蘿摩科植物通關(guān)藤（marsdenia tenacissima，MT）的干燥藤莖，具有止咳平喘，祛痰，通乳，清熱解毒的功效。通關(guān)藤又有烏骨藤、通光藤、奶漿藤等多個(gè)別名，是臨床常用抗癌藥物“消癌平”的主要成分，具有多糖、皂苷和生物堿等有效成分，其注射劑已在臨床用于肺癌（包括NSCLC）的治療或配合放療、化療的輔助治療［2］。MT治療NSCLC臨床療效確切，但其對(duì)NSCLC的基礎(chǔ)研究較少，抗NSCLC的藥用有效成分及分子作用機(jī)制尚未完全明確。

在藥物發(fā)現(xiàn)中的主要范例是設(shè)計(jì)最大選擇性配體以作用于單個(gè)藥物靶標(biāo)的概念，但許多有效成分是通過(guò)調(diào)節(jié)多種蛋白質(zhì)而不是單個(gè)靶標(biāo)發(fā)揮的作用。基于網(wǎng)絡(luò)的方法有望突出對(duì)跨多個(gè)信息層面藥物作用的理解［3－4］。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)，探討MT防治NSCLC的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制，解決了篩選藥物效用基礎(chǔ)成本高及周期長(zhǎng)的問(wèn)題，可為相關(guān)新藥的研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 MT活性化合物的收集與篩選

通過(guò)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)查閱，搜集MT被報(bào)道出具有活性的化合物，通過(guò)PubChem（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）數(shù)據(jù)庫(kù)［5］獲得上述活性化合物的canoni-cal SMILES結(jié)構(gòu)。

1.2 MT治療NSCLC作用靶點(diǎn)及主要化合物預(yù)測(cè)

將從PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)獲得的canonical SMILES結(jié)構(gòu)式導(dǎo)入Swiss Target Prediction（http://www.swiss target prediction.ch/）數(shù)據(jù)庫(kù)［6］預(yù)測(cè)MT活性化合物靶點(diǎn)，默認(rèn)選擇Homo sapiens，輸入化合物字符串SMILES，提交、預(yù)測(cè)、篩選與MT活性化合物相關(guān)的作用靶點(diǎn)。并通過(guò)UniProt（http://www.uniprot.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)，限定物種為人，將檢索得到的所有靶點(diǎn)蛋白校正為標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)。

通過(guò)TTD（http://bidd.nus.edu.sg/BIDDData bases/TTD/TTD.asp）數(shù)據(jù)庫(kù)、Drugbank（https://www.drugbank.ca）數(shù)據(jù)庫(kù)，鍵入“Nonsmall cell lung cancer”關(guān)鍵詞進(jìn)行搜索NSCLC的相關(guān)基因，去除重復(fù)基因和假陽(yáng)性基因。

將篩選得到的MT活性化合物靶點(diǎn)與NSCLC靶點(diǎn)輸入到Venny 2.1（http://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/）以獲取MT活性化合物靶點(diǎn)與NSCLC靶點(diǎn)的交集，即關(guān)鍵靶點(diǎn)。進(jìn)一步利用Cytoscape 3.6.1軟件構(gòu)建“MT-活性化合物-治療NSCLC靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，并進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治觯A(yù)測(cè)MT治療NSCLC的主要活性化合物。

1.3 PPI網(wǎng)絡(luò)模塊分析與篩選核心靶點(diǎn)

將獲得的關(guān)鍵靶點(diǎn)導(dǎo)入到STRING 11.5（https://string-db.org）數(shù)據(jù)庫(kù)，蛋白類(lèi)型設(shè)置為“Homo sapiens”，獲取蛋白相互作用關(guān)系，并將蛋白相互作用信息導(dǎo)入到Cytoscape軟件中，繪制蛋白與蛋白之間相互作用的網(wǎng)絡(luò)圖（protein-protein interaction，PPI）。節(jié)點(diǎn)大小以degree值反映，邊的粗細(xì)以combined score大小來(lái)反映。最后按degree值大小篩選核心靶點(diǎn)，通過(guò)ClusterONE插件進(jìn)行模塊分析。

1.4 分子對(duì)接

篩選PPI中degree值排名靠前的核心靶點(diǎn)蛋白，從RCSB（https://www.rcsb.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得核心靶蛋白的蛋白配體復(fù)合物，利用PyMOL軟件將蛋白除水、除配體。采用SystemsDock Web Site（http://www.swissdock.ch/）將核心靶蛋白與MT活性化合物進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證，評(píng)價(jià)MT活性化合物與靶蛋白之間的結(jié)合活性，根據(jù)其結(jié)合能大小篩選出MT治療NSCLC的潛在核心化合物。

1.5 GO功能富集與KEGG通路富集分析

將MT治療NSCLC的共有靶點(diǎn)導(dǎo)入ClueGO插件，預(yù)測(cè)MT治療NSCLC的生物過(guò)程（biological process，BP）、分子功能（molecular function，MF）、細(xì)胞組分（Cellular Component，CC）的GO功能富集分析。并利用在線(xiàn)綜合性基因富集分析Enrichr（https://amp.pharm.mssm.edu/Enrichr/）數(shù)據(jù)庫(kù)［7］。利用P值大小為指標(biāo)反映基因KEGG通路富集分析的情況。進(jìn)一步將MT治療NSCLC的共有靶點(diǎn)輸入Reactome（http://www.reactome.org）數(shù)據(jù)平臺(tái)進(jìn)行分析。Reactome數(shù)據(jù)平臺(tái)是一個(gè)開(kāi)放的數(shù)據(jù)資源庫(kù)，收集了關(guān)于人類(lèi)所有生物途徑與過(guò)程的結(jié)構(gòu)化信息，通過(guò)疊加定量表達(dá)數(shù)據(jù)，能夠可視化了解受影響路徑的變化程度及進(jìn)展［8］。通過(guò)Reactome分析獲得MT治療NSCLC作用靶點(diǎn)的結(jié)構(gòu)化信息以及相關(guān)通路的分析報(bào)告。

2 結(jié)果

2.1 MT活性化合物

國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道［9－15］顯示MT化學(xué)成分復(fù)雜。目前，從MT中分離得到的主要成分有甾體皂苷類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、醇類(lèi)、黃酮類(lèi)和多糖等化合物。MT主要抗腫瘤的活性成分為甾體皂苷類(lèi)物質(zhì)。以報(bào)道具有活性的化合物為研究對(duì)象，共篩選得到17個(gè)活性化合物，將其依次輸入PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)，獲取相關(guān)化合物信息（見(jiàn)表1）。

表1 MT中活性化合物信息

2.2 MT治療NSCLC作用靶點(diǎn)及主要成分預(yù)測(cè)

通過(guò)Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)共獲得MT化合物靶點(diǎn)1 670個(gè)。從TTD數(shù)據(jù)庫(kù)獲取NSCLC疾病靶點(diǎn)40個(gè)，Drugbank數(shù)據(jù)庫(kù)134個(gè)，合并2個(gè)疾病數(shù)據(jù)庫(kù)檢索結(jié)果并刪去重復(fù)項(xiàng)，得到116個(gè)NSCLC相關(guān)基因靶點(diǎn)。利用Venny 2.1軟件，將MT活性成分靶點(diǎn)與NSCLC靶點(diǎn)繪制Venny圖，得到37個(gè)共有靶點(diǎn)，見(jiàn)圖1。并利用可視化軟件Cytoscape繪制MT治療NSCLC的“中藥－成分－靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，見(jiàn)圖2。

圖1 MT作用靶點(diǎn)和NSCLC靶點(diǎn)的Venny圖

圖2 “MT-活性成分-抗NSCLC靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖

圖2中綠色是MT抗NSCLC的活性成分，紫色靶點(diǎn)為藥物靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)的共有靶點(diǎn)，即MT抗NSCLC的關(guān)鍵靶點(diǎn)。進(jìn)一步根據(jù)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治龅玫組T治療NSCLC主要作用的活性成分為通關(guān)藤皂苷H（Tenacissoside H）、通關(guān)藤皂苷G（Tenacissoside G）、羽扇豆醇（lupeol）、通關(guān)藤皂苷A（Tenacissoside A）、通關(guān)藤皂苷I（Tenacissoside I）、通關(guān)藤皂苷B（Tenacigenin B）等。

2.3 PPI網(wǎng)絡(luò)模塊分析與篩選核心靶點(diǎn)

將MT治療NSCLC的關(guān)鍵靶點(diǎn)，導(dǎo)入至STRING數(shù)據(jù)庫(kù)獲取蛋白互作信息。使用Cytoscape 3.6.1軟件將靶點(diǎn)的度值（degree值）進(jìn)行可視化展示，顯示各靶點(diǎn)具有很好的互作關(guān)系，見(jiàn)圖3（a）。圖中節(jié)點(diǎn)表示蛋白，邊表示蛋白之間的關(guān)聯(lián)，degree值越大，在網(wǎng)絡(luò)中與節(jié)點(diǎn)相連的數(shù)目越多，節(jié)點(diǎn)越大，越重要。其中，在網(wǎng)絡(luò)中degree值前10名的靶點(diǎn)為：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（vascular endothelial growth factor A，VEGFA）、表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）、轉(zhuǎn)錄因子AP-1（transcription factor AP-1，JUN）、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，MTOR）、前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合酶2（prostaglandin-endoperoxide synthase 2，PTGS2）、鼠雙微基因2（murine double minute2，MDM2）、Janus激酶2（janus kinase 2，JAK2）、細(xì)胞色素P4503A4（cytochrome P450 3A4，CYP3A4）、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2（vascular endothelial growth factor receptor 2，KDR）、ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G2（ATP binding cassette transporter G2，ABCG2）。

圖3 蛋白相互作用PPI網(wǎng)絡(luò)（a）和模塊分析（b）示意圖

進(jìn)一步將PPI網(wǎng)絡(luò)分為4個(gè)模塊，見(jiàn)圖3（b），以combine score進(jìn)行聚類(lèi)分析，選取各模塊的生物過(guò)程、分子功能以及KEGG通路。結(jié)果顯示：模塊1主要參與蛋白自身磷酸化、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶ERK1和ERK2級(jí)聯(lián)的正調(diào)控，影響ATP結(jié)合和跨膜受體蛋白酪氨酸激酶活性，介導(dǎo)癌癥通路和癌癥MicroRNA信號(hào)通路而發(fā)揮作用。模塊2主要參與單萜類(lèi)代謝過(guò)程和藥物分解代謝過(guò)程，影響類(lèi)固醇羥化酶活性與ATP酶活性，通過(guò)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體和藥物代謝－細(xì)胞色素P450信號(hào)通路發(fā)揮作用。模塊3主要通過(guò)神經(jīng)活性配體受體相互作用而發(fā)揮作用。模塊4主要參與氧化應(yīng)激反應(yīng)、環(huán)氧合酶途徑，影響血紅素結(jié)合和過(guò)氧化物酶活性，見(jiàn)表2。

表2 各模塊基本信息和主要生物過(guò)程、分子功能、KEGG通路分析結(jié)果

2.4 分子對(duì)接

選取PPI分析中degree值排名前4的蛋白，將其與MT活性化合物進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證。一般認(rèn)為FullFitness分值越低，對(duì)接效果越好。分子對(duì)接結(jié)果顯示：VEGFA、EGFR和MTOR靶點(diǎn)對(duì)接得分最高的化合物均為通關(guān)藤皂苷（Tenacissoside H）；JUN對(duì)接得分最高的化合物為通關(guān)藤皂苷A（Tenacissoside A）。利用UCSF軟件將以上4對(duì)蛋白質(zhì)與化合物的相互作用進(jìn)行優(yōu)化（見(jiàn)圖4），對(duì)接效果最好的前4名活性化合物與VEGFA、EGFR、JUN和MTOR的FullFitness分值見(jiàn)表3。因此，通關(guān)藤皂苷H和通關(guān)藤皂苷A可能是MT抗NSCLC的重要活性化合物。

表3 前4名活性化合物FullFitness分值

圖4 與前4位核心蛋白對(duì)接評(píng)分最高的 活性化合物示意圖

2.5 GO功能富集和KEGG通路富集分析

通過(guò)ClueGO對(duì)MT治療NSCLC的共有靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MT療NSCLC的生物功能主要定位在蛋白質(zhì)自磷酸化、對(duì)軸突損傷的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)外源性刺激的反應(yīng)等；參與了膜筏、內(nèi)膜系統(tǒng)細(xì)胞以及跨膜受體蛋白酪氨酸激酶活性和血紅素結(jié)合等分子功能（見(jiàn)圖5）。

圖5 MT治療NSCLC的GO富集分析示意圖

通過(guò)Enrichr數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)MT治療NSCLC的共有靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路分析。按照P值（P＜0.05）進(jìn)行篩選，結(jié)果顯示MT治療NSCLC主要涉及通路有癌癥、PI3K／Akt、粘附斑、癌癥MicroRNA、MAPK以及Rap1等信號(hào)通路。詳見(jiàn)圖6，圖中條帶長(zhǎng)度表示P值大小，條帶越長(zhǎng)，P值越小。

圖6 MT治療NSCLC的KEGG通路分析示意圖

進(jìn)一步對(duì)MT治療NSCLC的共有靶點(diǎn)進(jìn)行Reactome分析。圖7中每個(gè)圓形“爆發(fā)”的中心代表作用途徑，黃色表示靶點(diǎn)在該途徑的過(guò)度表示，淺灰色指沒(méi)有明顯代表性的路徑。結(jié)果顯示：MT治療NSCLC涉及多種生命活動(dòng)事件，依次為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫系統(tǒng)、基因表達(dá)、細(xì)胞周期、細(xì)胞對(duì)外界刺激反應(yīng)、新陳代謝、細(xì)胞程序化死亡等。

圖7 MT治療NSCLC的共有靶點(diǎn)的全基因組示意圖

MT治療NSCLC的Reactome通路富集分析，根據(jù)P值（P＜0.01）得到512條通路，選取前20條信號(hào)通路（FDR值從小到大進(jìn)行排序）繪制氣泡圖（圖8）。主要涉及白細(xì)胞介素4（Interleukin-4，IL-4）與白細(xì)胞介素13（Interleukin-13，IL-13）信號(hào)通路、受體酪氨酸激酶的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫系統(tǒng)中的細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)、白細(xì)胞介素信號(hào)通路、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）信號(hào)通路，TFAP2（AP-2）家族調(diào)節(jié)生長(zhǎng)因子及其受體的轉(zhuǎn)錄等通路。

圖8 MT治療NSCLC的Reactome通路富集分析氣泡圖

進(jìn)一步以免疫系統(tǒng)中的細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)為例分析（圖9），圖中黃色表示靶點(diǎn)在該途徑的過(guò)度表示，淺灰色指沒(méi)有明顯代表性的途徑，可以看出：MT治療NSCLC參與了促進(jìn)細(xì)胞因子調(diào)節(jié)和介導(dǎo)免疫，其中，作用最明顯的為促進(jìn)白介素與細(xì)胞表面受體結(jié)合和FMS樣的酪氨酸激酶3（fmslike tyrosine kinase，F(xiàn)LT3）配體（FL）的結(jié)合，并觸發(fā)下游各種路徑的激活，主要為JAK／STAT、PI3K／Akt和MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)等。

圖9 MT治療NSCLC在免疫系統(tǒng)中的 細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)示意圖

3 討論

中醫(yī)對(duì)于NSCLC的病名并沒(méi)有明確的定義，多屬于中醫(yī)學(xué)“息賁”“肺積”“咳嗽”“喘息”“胸痛”“勞嗽”等病證的范疇，臨床上以咳嗽、痰中帶血、胸痛等為主要癥狀。從病因病機(jī)的角度，傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為肺癌形成主要由于正氣虛損，邪毒內(nèi)侵，損及肺脾，致使肺脾功能失調(diào)，肺失宣降，脾失健運(yùn)，繼而釀生氣滯、痰飲、瘀血等病理因素，各種病理因素相互摻雜，導(dǎo)致肺癌的發(fā)生，其本質(zhì)多為痰凝、瘀結(jié)或痰熱瘀互結(jié)［16］。通關(guān)藤具有具有止咳、平喘、化痰等功效，針對(duì)肺癌的病理因素可發(fā)揮較好的作用。目前，從MT中分離得到的主要成分有甾體皂苷類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、醇類(lèi)、黃酮類(lèi)和多糖等。通過(guò)預(yù)測(cè)MT治療NSCLC的“中藥－成分－靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)結(jié)果顯示，MT治療NSCLC主要作用的成分為通關(guān)藤皂苷H（Tenacissoside H）、通關(guān)藤皂苷G（Tenacissoside G）、羽扇豆醇（lupeol）、通關(guān)藤皂苷A（Tenacissoside A）、通關(guān)藤皂苷I（Tenacissoside I）、通關(guān)藤皂苷B（Tenacigenin B）等。提示甾體皂苷類(lèi)物質(zhì)是通關(guān)藤藥材抗腫瘤的主要活性成分。已有研究表明通關(guān)藤皂苷H能夠顯著抑制LLC的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，并能夠調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）、白細(xì)胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）的表達(dá)水平，從而提高荷瘤小鼠的免疫功能［17］。MT治療NSCLC的預(yù)測(cè)結(jié)果與目前相關(guān)研究結(jié)果基本一致，證明預(yù)測(cè)的可靠性，所以通關(guān)藤皂苷H、通關(guān)藤皂苷G、羽扇豆醇、通關(guān)藤皂苷A、通關(guān)藤皂苷I可能是MT治療NSCLC的主要活性成分，提示其具有重要的研究?jī)r(jià)值。

通過(guò)MT潛在靶點(diǎn)與NSCLC疾病靶點(diǎn)比對(duì)分析，得到MT治療NSCLC的作用靶點(diǎn)37個(gè)。進(jìn)一步通過(guò)PPI網(wǎng)絡(luò)分析，度值較高的有VEGFA、EGFR、JUN、MTOR、PTGS2、MDM2、JAK2、CYP3A4、KDR、ABCG2，這10個(gè)靶點(diǎn)為MT治療NSCLC的關(guān)鍵靶點(diǎn)。VEGFA為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A，可以增加血管通透性，在腫瘤增殖、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的過(guò)程中扮演重要角色［18］，血清VEGFA是預(yù)測(cè)NSCLC腫瘤內(nèi)血管生成和預(yù)后的重要價(jià)值標(biāo)記物［19－20］。表皮生長(zhǎng)因子受體EGFR在NSCLC的發(fā)生、進(jìn)展中同樣具有重要作用，并且有研究發(fā)現(xiàn)，p53能夠上調(diào)EGFR表達(dá)并激活EGFR通路［21］，TP53、EGFR共突變對(duì)NSCLC的治療有重要意義［22］。JUN編碼的蛋白質(zhì)與病毒蛋白高度相似，與特定靶DNA序列直接相互作用從而調(diào)節(jié)基因表達(dá)。該基因是無(wú)內(nèi)含子的，被定位到1P32-P31，一個(gè)涉及人類(lèi)惡性腫瘤易位和缺失的染色體區(qū)域［23］。本研究分子對(duì)接結(jié)果顯示通關(guān)藤皂苷H與VEGFA、EGFR與MTOR均有很高對(duì)接得分、通關(guān)藤皂苷A與JUN產(chǎn)生較高的對(duì)接得分。提示了通關(guān)藤皂苷H和通關(guān)藤皂苷A可能是MT抗NSCLC的重要活性化合物。

NSCLC發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，為了充分了解MT治療NSCLC的分子作用機(jī)制，本研究從多種途徑進(jìn)行機(jī)制預(yù)測(cè)。我們對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行了模塊分析，結(jié)果顯示MT治療NSCLC主要通過(guò)癌癥通路、癌癥MicroRNA信號(hào)通路、ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和藥物代謝－細(xì)胞色素P450信號(hào)通路和神經(jīng)活性配體受體相互作用而發(fā)揮作用。通過(guò)ClueGO分析結(jié)果顯示，MT治療NSCLC的生物功能主要定位在蛋白質(zhì)自磷酸化、對(duì)軸突損傷的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)外源性刺激的反應(yīng)等；參與了膜筏、內(nèi)膜系統(tǒng)細(xì)胞以及跨膜受體蛋白酪氨酸激酶活性和血紅素結(jié)合等分子功能，通過(guò)Enrichr數(shù)據(jù)庫(kù)KEGG結(jié)果顯示，MT治療NSCLC涉及癌癥、PI3K／Akt、粘附斑、癌癥MicroRNA、MAPK以及Rap1等信號(hào)通路。最后進(jìn)行Reactome分析，結(jié)果顯示涉及多種生命活動(dòng)事件包括信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫系統(tǒng)、基因表達(dá)、細(xì)胞周期、細(xì)胞對(duì)外界刺激反應(yīng)、新陳代謝、細(xì)胞程序化死亡等。主要涉及IL-4與IL-13信號(hào)通路、受體酪氨酸激酶的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫系統(tǒng)中的細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)、白細(xì)胞介素信號(hào)通路、VEGF信號(hào)通路，TFAP2（AP-2）家族調(diào)節(jié)生長(zhǎng)因子及其受體的轉(zhuǎn)錄等通路。

綜合分析發(fā)現(xiàn)，MT抗NSCLC可能的主要活性成分是通關(guān)藤皂苷H和通關(guān)藤皂苷A，與李媛媛等［24－25］研究結(jié)果一致。MT在改善NSCLC炎癥微環(huán)境，抑制NSCLC的腫瘤血管新生，誘導(dǎo)NSCLC的腫瘤細(xì)胞周期阻斷和細(xì)胞凋亡中發(fā)揮一定的作用，MT通過(guò)介導(dǎo)癌癥信號(hào)通路、免疫系統(tǒng)中的細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)、PI3K／Akt信號(hào)通路等多種疾病代謝信號(hào)通路發(fā)揮治療NSCLC的作用，尤其是免疫系統(tǒng)中的細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)，包含了IL-4與IL-13信號(hào)通路、PI3K／Akt和MAPK等信號(hào)通路，可能在治療NSCLC中發(fā)揮更為關(guān)鍵的作用。體現(xiàn)了MT治療NSCLC多成分、多靶點(diǎn)、多通路、整合調(diào)節(jié)的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)機(jī)制。預(yù)測(cè)結(jié)果為下一步實(shí)驗(yàn)研究奠定了基礎(chǔ)，下一步研究重點(diǎn)可圍繞通關(guān)藤對(duì)NSCLC模型IL-4／IL-13、PI3K／Akt和（或）MAPK信號(hào)通路的研究，以進(jìn)一步驗(yàn)證文中結(jié)果并闡釋通關(guān)藤治療NSCLC的分子機(jī)制。