寧芬茹，肖 謐，林曉潔，王芳會，吳 芳，周熙惠

(西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院新生兒科，陜西 西安 710061)

新生兒常見疾病如顱內(nèi)出血、窒息、肺炎等發(fā)生率高，發(fā)病急，進(jìn)展快，其中顱內(nèi)出血、肺炎的早期臨床表現(xiàn)不典型，圍生期窒息則可引起多臟器功能損傷，如不能及時診斷和干預(yù)，將對患兒生長發(fā)育造成嚴(yán)重的影響，甚至危及生命。因此，應(yīng)用簡單、高效、安全的診斷方法在新生兒疾病的臨床實(shí)踐中具有較高的應(yīng)用價值。目前已有研究證實(shí)血小板反應(yīng)蛋白-1(thrombospondin-1，TSP-1)與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但與新生兒疾病的相關(guān)性尚未見報道。因此，本研究通過檢測新生兒顱內(nèi)出血、窒息及肺炎患兒血漿中的TSP-1含量，觀察其在上述疾病中的表達(dá)情況，分析TSP-1在新生兒疾病中的意義，為深入研究TSP-1在上述疾病進(jìn)展過程中的病理生理機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1研究對象與方法

1.1研究對象

選取2019年1月至2020年3月期間西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院新生兒科收治的109例患兒，依據(jù)臨床病史、體征和頭顱超聲確診為新生兒顱內(nèi)出血34例為顱內(nèi)出血組；依據(jù)2013年中國醫(yī)師協(xié)會制定的新生兒窒息診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為新生兒窒息26例為窒息組；依據(jù)葉鴻瑁等主編的《實(shí)用新生兒學(xué)(第5版)》確診為新生兒肺炎32例為肺炎組；選取同期入院的晚期早產(chǎn)兒或足月新生兒，均未合并顱內(nèi)出血、窒息、肺炎及其他嚴(yán)重合并癥的17例患兒為對照組。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并原發(fā)性心、肝、腎等器質(zhì)性疾病及自身免疫性疾病；②先天染色體疾病或遺傳代謝疾病；③臨床資料缺失。所有研究對象的監(jiān)護(hù)人均知情同意，此研究已通過本醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2研究方法

各病例組及對照組患兒于入院后72h內(nèi)采集空腹外周靜脈血1mL，置于抗凝采血管中，4℃冰箱靜置1h后，采用湖南湘儀L500離心機(jī)以3 000r/min的速度離心5min，獲得上清液，即為目標(biāo)血漿，置于-80℃冰箱中保存待測。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血漿TSP-1水平，其中酶標(biāo)儀為美國BIOTEK公司生產(chǎn)的Synergy H1，ELISA試劑盒購自美國CLOUD-CLONE CORP，嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行具體操作。同期外周靜脈血采用深圳邁瑞CAL 8000血液分析儀檢測血小板計數(shù)。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

2.1各組的基本情況

在109例研究對象中，各病例組平均胎齡、體重、日齡分別與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 各組基本情況的比較結(jié)果Table 1 Comparison of the basic information of each

2.2各組血漿TSP-1含量的比較

對照組血漿TSP-1含量為(39.39±11.27)ng/mL；顱內(nèi)出血組TSP-1含量為(24.09±13.53)ng/mL，顯著低于對照組(t=3.937，P<0.001)；窒息組TSP-1含量為(54.30±19.36)ng/mL，顯著高于對照組(t=2.826，P<0.01)；肺炎組TSP-1含量為(87.18±18.09)ng/mL，顯著高于對照組(t=9.711，P<0.001)，見圖1。

注：**表示P<0.01，***表示P<0.001。圖1 各組血漿TSP-1含量的比較結(jié)果Fig.1 Comparison results of plasma TSP-1 content in each group

2.3各組血小板計數(shù)的比較

顱內(nèi)出血組、窒息組、肺炎組、對照組的血小板計數(shù)分別為(286.59±114.34)×109/L、(240.84±115.89)×109/L、(254.28±113.51)×109/L、(249.13±72.14)×109/L。各病例組患兒分別與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(t值分別為1.426、0.049、0.384，P>0.05)，見圖2。

注：ns(no significance)表示差異無統(tǒng)計學(xué)意義。圖2 各組血小板計數(shù)的比較結(jié)果Fig.2 Comparison of platelet counts in each group

2.4各組血漿TSP-1與血小板計數(shù)的相關(guān)性

對照組、顱內(nèi)出血組、窒息組、肺炎組的血漿TSP-1水平與血小板計數(shù)均無相關(guān)性(r分別為0.166、0.298、0.215、0.194，P>0.05)。

3討論

現(xiàn)階段，對新生兒顱內(nèi)出血、窒息和肺炎，通常需結(jié)合母親圍產(chǎn)期高危因素及患兒臨床表征、影像學(xué)、超聲檢查、實(shí)驗(yàn)室檢查等進(jìn)行綜合分析診斷，其中頭顱超聲雖有可床旁診斷及無創(chuàng)等優(yōu)勢，但目前尚未在基層醫(yī)院推廣應(yīng)用，且超聲診斷蛛網(wǎng)膜下腔、硬膜外等部位出血時的準(zhǔn)確率較低；而X線及CT檢查具有潛在輻射危害，磁共振成像(MRI)檢測要求環(huán)境高，需搬動患兒，且對其鎮(zhèn)靜要求高。在輕度病變或者疾病的早期階段，通過血液標(biāo)志物檢測能夠及時發(fā)現(xiàn)危險信號，可彌補(bǔ)現(xiàn)有檢查技術(shù)的局限性[1]。TSP-1于1971年首次從活化的血小板中分離出來[2]，后續(xù)研究證實(shí)人類TSP-1可由多種細(xì)胞合成及分泌，包括內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等[3-4]。TSP-1包含多個結(jié)構(gòu)域，參與了多種生物學(xué)過程，其中包括胚胎發(fā)育、血管生成、組織修復(fù)和免疫調(diào)節(jié)等[4]。

3.1新生兒顱內(nèi)出血與TSP-1的相關(guān)性

新生兒顱內(nèi)出血是臨床新生兒時期常見的一種因早產(chǎn)、缺血缺氧或產(chǎn)傷引起的嚴(yán)重腦損傷，由于其死亡率較高、預(yù)后差，所以針對新生兒顱內(nèi)出血的早期診斷研究備受關(guān)注。有研究證實(shí)，顱內(nèi)出血誘導(dǎo)血小板、血管內(nèi)皮細(xì)胞和炎性細(xì)胞等激化，進(jìn)而導(dǎo)致基質(zhì)金屬蛋白酶-2、基質(zhì)金屬蛋白酶-9等血液標(biāo)志物含量發(fā)生改變[5-6]。成人顱內(nèi)出血患者血清TSP-1含量異常增高，可能通過調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)水平破壞血管通透性而引發(fā)顱內(nèi)出血[7-8]。本研究顯示，顱內(nèi)出血患兒血漿TSP-1含量較低，與上述關(guān)于成人顱內(nèi)出血患者的研究結(jié)果相反。分析其原因是由于新生兒顱腦尚未發(fā)育成熟，出血原因可能與成人有差異。新生兒顱內(nèi)出血的發(fā)生率與胎齡密切相關(guān)，并且隨著胎齡增加而逐漸降低，說明腦血管的發(fā)育成熟度可能是其主要內(nèi)在原因。同時，有研究表明，TSP-1在血管畸形的大腦內(nèi)皮細(xì)胞中含量較低，是血管畸形的誘發(fā)因素之一[9]。另外，嚴(yán)重顱內(nèi)出血患者的血小板缺乏完整的TSP-1，血小板聚集活性受損，加重了顱內(nèi)出血程度[10-12]。上述均表明TSP-1表達(dá)缺失或降低，可能增加新生兒顱內(nèi)出血的風(fēng)險，與本研究結(jié)果一致，提示在臨床實(shí)踐中應(yīng)予以關(guān)注。

3.2新生兒窒息與TSP-1的相關(guān)性

新生兒窒息是指嬰兒出生后沒有自主呼吸或者自主呼吸微弱[13]，從而導(dǎo)致低氧血癥、高碳酸血癥和/或代謝性酸中毒，可由產(chǎn)前、產(chǎn)時或產(chǎn)后的各種因素所致，是新生兒死亡的常見疾病之一，同時可導(dǎo)致患兒智力低下、腦癱、癲癇等永久性神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。目前，TSP-1與窒息的相關(guān)性鮮有報道。本研究顯示，窒息患兒的血漿TSP-1含量較對照組顯著升高，可能由于窒息導(dǎo)致全身尤其是腦組織缺血缺氧，細(xì)胞應(yīng)激釋放TSP-1。另有研究表明，胎盤組織高水平表達(dá)TSP-1導(dǎo)致血管內(nèi)皮組織受損，造成胎盤組織出現(xiàn)反復(fù)缺氧、缺血[14-15]。Popescu等[12]研究發(fā)現(xiàn)，TSP-1作為一種趨化因子，能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞與中性粒細(xì)胞結(jié)合，具有抑制新生血管生成的作用。由此推測，窒息患兒高水平的血漿TSP-1含量與窒息腦損傷有關(guān)，且TSP-1可能通過抑制血管再生進(jìn)一步加重患兒腦損傷。

3.3新生兒肺炎與TSP-1的相關(guān)性

新生兒肺炎對患兒呼吸功能損害明顯，因此，在肺炎病程中進(jìn)行早期診斷具有重要意義[16]。既往研究證實(shí)，TSP-1在機(jī)體免疫、炎癥和代謝中扮演重要角色；同時，TSP-1有助于T細(xì)胞的黏附和滲出，促進(jìn)中性粒細(xì)胞的炎性趨化[17-18]；TSP-1亦可通過影響抗原提呈細(xì)胞參與免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)[19]。有研究指出TSP-1介導(dǎo)肺炎球菌和葡萄球菌與人肺上皮細(xì)胞的黏附[20]。上述均提示TSP-1含量有可能作為新生兒肺炎的一種血液檢測標(biāo)志物，輔助臨床早期診斷。本研究顯示，血漿TSP-1水平顯著高于對照組；其原因可能是由于新生兒免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未成熟，細(xì)菌感染導(dǎo)致上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等在受到炎癥刺激后高表達(dá)TSP-1[21]，進(jìn)一步增加了細(xì)菌與細(xì)胞的黏附，加重了肺炎病情，這也可能是新生兒肺炎發(fā)病急、進(jìn)展快的內(nèi)在原因之一。

3.4 TSP-1與血小板的相關(guān)性

由于血小板是TSP-1最主要的來源，因此其數(shù)量可能對TSP-1水平有較大的影響。本研究中血小板計數(shù)結(jié)果可見，各病例組血小板數(shù)量與對照組均無顯著差異；相關(guān)性分析表明，各病例組的血漿TSP-1水平與血小板均無相關(guān)性，推測新生兒血漿TSP-1除了由血小板α顆粒分泌外，還可能由單核/巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞應(yīng)激而釋放[3-4]。

本研究不足之處在于樣本量較少，部分?jǐn)?shù)據(jù)可能出現(xiàn)偏倚，后期應(yīng)考慮在更大樣本量的病例中進(jìn)行驗(yàn)證；其次，本研究納入的病例多在收治3天內(nèi)登記采血，未來應(yīng)考慮在收治當(dāng)天采血，并進(jìn)一步研究TSP-1在新生兒多種疾病病程中的動態(tài)變化及相關(guān)病理生理機(jī)制，這將有助于患兒疾病的輔助診斷，從而盡早制定最佳治療方案。