劉德文，郭鳳倩，嚴(yán)林，，李新健，張冰冰，歐則民，于歡，王錦玉，仝燕，劉安*，龔千鋒*

1.中國中醫(yī)科學(xué)院 中藥研究所，北京 100700；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330004

澤瀉為臨床常用中藥材之一，為澤瀉科植物東方澤瀉Alismaorientale(Sam.)Juzep.或澤瀉A.plantago-aquaticaLinn.的干燥塊莖，其主要成分為萜類化合物，功效為利水滲濕、泄熱、化濁降脂，常用于小便不利、泄瀉尿少、高脂血癥等的治療[1]。據(jù)文獻(xiàn)報道，澤瀉炮制品眾多，其中以生品及鹽制品為主[2-3]。鹽澤瀉除了收載于《中華人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)2020年版[1]外，也是江西“樟幫”特色炮制品種之一，被收載于《江西省中藥飲片炮制規(guī)范》2008年版[4]。在《中國藥典》2020年版中，鹽澤瀉的制備工藝為取澤瀉片，照鹽水炙法炒干，即加鹽水拌勻，悶透，置炒制容器內(nèi)，以文火加熱，炒至規(guī)定的程度時，取出，放涼；而在《江西省中藥飲片炮制規(guī)范》2008年版中，鹽澤瀉的制備工藝則記載：“取澤瀉片，用鹽水噴灑拌勻，悶潤，用麥麩或谷糠炒至表面黃色為度。每100 kg澤瀉，用食鹽2 kg、麥麩或谷糠50 kg”。結(jié)合文獻(xiàn)[5]記載及本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，鹽澤瀉和樟幫特色鹽澤瀉在物質(zhì)基礎(chǔ)和利尿作用方面存在差異，這與兩者所加輔料和制備工藝存在差異有關(guān)，故選擇鹽澤瀉和樟幫特色鹽澤瀉分別進(jìn)行等級評價。

中藥飲片是中藥臨床應(yīng)用的主要形式之一，其等級劃分一直以來都是行業(yè)內(nèi)研究的熱點問題[6]。目前，中藥飲片市場流通時常采用統(tǒng)貨統(tǒng)價方式，這在一定程度上造成了飲片質(zhì)量參差不齊，致使優(yōu)質(zhì)飲片生產(chǎn)企業(yè)的可持續(xù)發(fā)展受到阻礙[7-8]。因此，開展等級評價對于中藥飲片行業(yè)的規(guī)范化流通和可持續(xù)發(fā)展具有重要意義，進(jìn)而保障中醫(yī)臨床用藥的安全性和有效性。質(zhì)量常數(shù)法是在考慮飲片大小、厚薄、色澤、氣味、年限、炮制程度及有效成分含量的基礎(chǔ)上提出的，綜合了飲片的形態(tài)指標(biāo)與內(nèi)在指標(biāo)，解決了傳統(tǒng)飲片等級評價方法以主觀評價為主的不足，適用于切制飲片的等級評價，只是在運用過程中，針對切制飲片(順刀片、絲條狀飲片、頂?shù)镀?和未切制飲片計算公式會有所調(diào)整[7-8]。在本課題組前期已采用質(zhì)量常數(shù)評價方法對澤瀉飲片進(jìn)行等級評價的基礎(chǔ)上[9]，為進(jìn)一步拓展該評價方法的適用性，本實驗擬采用質(zhì)量常數(shù)評價方法對鹽澤瀉及樟幫特色鹽澤瀉飲片進(jìn)行等級評價，以期為這2個品種的臨床應(yīng)用與市場流通提供參考。

1 材料

1.1 儀器

e2695型高效液相色譜儀(美國Waters公司，包括2998型光電二極管陣列檢測器)；2510型超聲波清洗器(Branson超聲上海有限公司)；BT 125D型電子分析天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 試藥

對照品23-乙酰澤瀉醇C(成都瑞芬思生物科技有限公司，批號：Z-062-181015，純度>98%)；23-乙酰澤瀉醇B(成都克洛瑪生物科技有限公司，批號：CHB171010，純度≥98%)；水為廣州屈臣氏食品飲料有限公司生產(chǎn)的純凈水；HPLC檢測用乙腈、甲醇為色譜純(美國Thermo Fisher公司)；其他試劑均為分析純(北京化工廠)。

15批鹽澤瀉飲片和15批樟幫特色鹽澤瀉飲片購自不同廠家或自制，炮制后均經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院龔千鋒教授鑒定，均為澤瀉科植物澤瀉Alismaorientale(Sam.) Juzep.干燥塊莖的鹽制品，質(zhì)量和炮制工藝均符合《中國藥典》2020年版或《江西省中藥飲片炮制規(guī)范》2008年版的相關(guān)規(guī)定，具體樣品信息見表1～2。

表1 鹽澤瀉飲片的樣品信息

表2 樟幫特色鹽澤瀉飲片的樣品信息

2 方法

2.1 指標(biāo)成分的含量測定

2.1.1色譜條件 Welch TopsilTM(拓譜)C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，其他檢測條件參考《中國藥典》2020年版一部“澤瀉”含量測定項下[1]。

2.1.2對照品溶液的制備 分別精密稱取對照品23-乙酰澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇C 3.59、2.44 mg，加乙腈稀釋并定容，得質(zhì)量濃度分別為0.035 90、0.004 88 mg·mL-1的對照品母液[1]。

2.1.3供試品溶液的制備 按照《中國藥典》2020年版一部“澤瀉”含量測定項下的供試品溶液制備方法制備[1]。

2.2 質(zhì)量常數(shù)、相對質(zhì)量常數(shù)與百分質(zhì)量常數(shù)的計算

從每批樣品中隨機(jī)選取50片作為檢測對象，測量總質(zhì)量、總厚度、平均質(zhì)量和平均厚度，重復(fù)3次。分別按公式(1)～(3)計算每批鹽澤瀉和特色鹽澤瀉飲片的質(zhì)量常數(shù)、相對質(zhì)量常數(shù)和百分質(zhì)量常數(shù)[9-12]。

質(zhì)量常數(shù)=m×c/h2

(1)

相對質(zhì)量常數(shù)=質(zhì)量常數(shù)/指標(biāo)成分限量標(biāo)準(zhǔn)

(2)

百分質(zhì)量常數(shù)=相對質(zhì)量常數(shù)/相對質(zhì)量常數(shù)最大值

(3)

式中，h為飲片平均厚度，m為單個飲片的平均質(zhì)量，c為指標(biāo)成分的含量(以23-乙酰澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇C總量計)。

3 結(jié)果

3.1 樣品的指標(biāo)成分及形態(tài)參數(shù)

以百分質(zhì)量常數(shù)結(jié)果排序，各批樣品的測定結(jié)果見表3～4。

表3 15批鹽澤瀉飲片測定結(jié)果

表4 15批樟幫特色鹽澤瀉飲片測定結(jié)果

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鹽澤瀉、特色鹽澤瀉樣品中23-乙酰澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇C質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.103%～0.175%、0.100%～0.180%。

3.2 飲片的等級劃分

15批鹽澤瀉飲片的質(zhì)量常數(shù)為1.50～3.62，相對質(zhì)量常數(shù)為15.0～36.2，百分質(zhì)量常數(shù)為41.1～100.0。若將這15批飲片分為3個等級[9-11]，以大于最大質(zhì)量常數(shù)的80%為一等，50%～80%為二等，其余為三等，則一等鹽澤瀉質(zhì)量常數(shù)≥2.90，二等鹽澤瀉質(zhì)量常數(shù)≥1.81且<2.90，三等鹽澤瀉質(zhì)量常數(shù)<1.81。15批樟幫特色鹽澤瀉的質(zhì)量常數(shù)為1.61～3.61，相對質(zhì)量常數(shù)為40.26～90.18，百分質(zhì)量常數(shù)為44.6～100.0。若將這15批飲片分為3個等級，以大于最大質(zhì)量常數(shù)的80%為一等，50%～80%為二等，其余為三等，則一等特色鹽澤瀉質(zhì)量常數(shù)≥2.89，二等特色鹽澤瀉質(zhì)量常數(shù)≥1.81且<2.89，三等特色鹽澤瀉質(zhì)量常數(shù)<1.81。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這2種飲片不同等級樣品的質(zhì)量常數(shù)范圍較為一致，說明建立的方法具有較好的科學(xué)性和可行性，可用于同一炮制品種的等級評價。

4 小結(jié)與討論

4.1 指標(biāo)成分的選擇

《中國藥典》2020年版對23-乙酰澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇C的總量進(jìn)行了限定，本研究所用樣品中這2個成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于0.1%，符合相關(guān)的質(zhì)量要求。由于《中國藥典》2020年版對這2個成分的總量進(jìn)行定量，因此在計算質(zhì)量常數(shù)和相對質(zhì)量常數(shù)時，需將兩者總量作為一個整體；若《中國藥典》2020年版對某一飲片多于2個成分分別進(jìn)行含量限定，則需要單獨計算每個指標(biāo)成分的質(zhì)量常數(shù)和相對質(zhì)量常數(shù)，然后用所有成分的相對質(zhì)量常數(shù)總和進(jìn)行等級評價[10]。

4.2 引起飲片等級差異的原因分析

目前，關(guān)于飲片等級評價多集中在生品方面，關(guān)于炮制品種的研究較少。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，發(fā)現(xiàn)尚無鹽澤瀉飲片的等級評級研究，因此，本研究選擇鹽澤瀉飲片為研究對象。通過對15批鹽澤瀉樣品進(jìn)行等級評價，發(fā)現(xiàn)不同企業(yè)生產(chǎn)出來的鹽澤瀉飲片等級差異較大，同時，同一企業(yè)生產(chǎn)出來的飲片亦有一定差異。通過分析表3～4中數(shù)據(jù)及質(zhì)量常數(shù)的計算公式可知，就澤瀉鹽制品這種圓形或橢圓形飲片而言，主要影響其等級的因素為飲片厚度，其次是飲片的大小。造成飲片大小及厚度存在差異的原因可能與《中國藥典》2020年版未明確鹽澤瀉的炮制工藝參數(shù)有關(guān)，雖然要求切厚片，但在實際生產(chǎn)中有的樣品不能完全符合要求，且厚度數(shù)值較有效成分含量差異在10倍以上，造成飲片差異較其他因素更甚。

4.3 鹽澤瀉飲片等級與生品之間的相關(guān)性探索

由于本研究所用15批樣品有11批是由同一批藥材制備的，為了進(jìn)一步比較澤瀉的2種鹽制品與生品之間的相關(guān)性，筆者選擇來自同一產(chǎn)地、同一批號樣品的11批澤瀉生品、鹽制品及樟幫特色鹽制品進(jìn)行比較，考察三者的質(zhì)量常數(shù)、相對質(zhì)量常數(shù)及等級，見表5。結(jié)果顯示，盡管同一來源的澤瀉生品、鹽制品、特色鹽制品的質(zhì)量常數(shù)及相對質(zhì)量常數(shù)存在一定差異，但在最終的等級評價環(huán)節(jié)，11批樣品中有6批炮制品(鹽制品、特色鹽制品)的等級評價結(jié)果與生品一致，其他5批生品制備成炮制品后等級評價也均處于相鄰等級之內(nèi)，說明原料來源對飲片等級有一定影響。

表5 澤瀉、鹽澤瀉、樟幫特色鹽澤瀉飲片的形態(tài)參數(shù)及比較

4.4 質(zhì)量常數(shù)法存在的不足及后續(xù)研究方向

質(zhì)量常數(shù)法是一種基于傳統(tǒng)特征與質(zhì)量控制指標(biāo)有機(jī)結(jié)合的中藥飲片等級評價方法，可推動中藥飲片行業(yè)的優(yōu)質(zhì)優(yōu)價。但該評價方法亦存在一定不足：1)該方法雖然綜合了飲片的外觀指標(biāo)和內(nèi)在指標(biāo)，但還需結(jié)合藥效學(xué)方面的評價，以進(jìn)一步確認(rèn)不同等級飲片的有效性和藥效差異；2)中藥飲片數(shù)量巨大，目前已報道采用質(zhì)量常數(shù)法評價飲片等級的品種還較少，尚需擴(kuò)大研究品種數(shù)量，并與其他飲片等級評價方法進(jìn)行比較[13-15]，以進(jìn)一步考察該方法的適用性，完善其適用范圍。此外，本課題組后續(xù)將增加樣品來源、批數(shù)并結(jié)合藥效學(xué)實驗對鹽澤瀉的等級劃分進(jìn)行驗證[16-18]，并采用譜效學(xué)方法對影響飲片等級的關(guān)鍵指標(biāo)進(jìn)行分析，以進(jìn)一步確認(rèn)和完善鹽澤瀉的等級劃分標(biāo)準(zhǔn)。