王佩佩，童郁，林建萍

B族鏈球菌（GBS）為革蘭陽性球菌，屬于一種條件致病菌，常定植于女性的生殖道及直腸。研究結(jié)果表明，妊娠晚期生殖道GBS感染的發(fā)病率較高，對孕婦和新生兒的結(jié)局影響較大[1]。GBS傳播途徑主要為垂直傳播，與分娩方式相關(guān)[2]。PCR檢測GBS有較高的敏感度和特異性，一般檢測結(jié)果有4種情況：（1）陰道陽性、肛門陰性；（2）陰道陰性、肛門陽性；（3）陰道肛門均陰性；（4）陰道肛門均陽性。臨床上認(rèn)為陰道和肛門任何一個部位陽性，均判為GBS陽性。本研究探討孕婦GBS感染情況及不同分娩方式對妊娠結(jié)局的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2018年8—12月在浙江省溫州市人民醫(yī)院進(jìn)行產(chǎn)檢的GBS感染孕婦370例，平均年齡（31±10）歲，平均孕周（36±2）周。將740例孕婦陰道和肛門樣本按照不同部位感染情況分為陰道陽性、肛門陰性組（陰+肛－），陰道陰性、肛門陽性組（陰－肛+），陰道肛門均陽性組（陰+肛+）。同時將370例GBS陽性患者根據(jù)分娩方式分為順產(chǎn)組和剖腹產(chǎn)組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）孕周為35～37周；（2）妊娠期無其他菌群及病毒感染；（3）未有染色體異?；蚧加写x性缺陷病；（4）均知情同意，愿意參加此次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）多胎妊娠；（2）孕婦存在習(xí)慣性流產(chǎn)史；（3）未獲得隨訪跟蹤資料。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑及儀器 GBS核酸檢測試劑盒（采購于博爾誠科技有限公司）、HR60-ⅡA2生物安全柜、渦旋混合器、Thermo Fisher高速冷凍離心機(jī)、ABI7500熒光定量PCR儀、MB-102金屬浴、SW-CJ-IFD 超凈工作臺及HYCD-282A醫(yī)用冷藏冰箱。

1.2.2 標(biāo)本采集 將女性陰道內(nèi)部及周圍過多的分泌物拭去，使用一根醫(yī)用無菌拭子于陰道1/3處沿著陰道壁輕輕旋轉(zhuǎn)一周取得足量陰道分泌物，將采集完畢的拭子置入無菌管中后密閉保存送檢。另取一根醫(yī)用無菌拭子于肛門括約肌上2～3 cm處沿著腸壁輕輕旋轉(zhuǎn)一周得到足量直腸分泌物，將采集完畢的拭子置入醫(yī)用無菌管中后密閉保存送檢。

1.2.3 GBS檢測 將1 ml無菌0.9%氯化鈉注射液加入拭子中，置于渦旋震蕩器中充分混勻，取0.6 ml含有生殖道分泌物或直腸分泌物的0.9%氯化鈉注射液于離心管中，13 000 r/min離心3 min，棄上清。沉淀（如不明顯可再次離心）加入50 l DNA提取液充分混勻，置于99～100℃金屬浴中加熱裂解10 min，13 000 r/min離心3 min，DNA提取完畢。將試劑盒中的GBS反應(yīng)試劑分裝入反應(yīng)管中后，各加入5 l處理好的DNA樣品上清、空白對照品、陽性對照品，短暫離心使液體均沉于反應(yīng)管底部（不可出現(xiàn)氣泡），轉(zhuǎn)入擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)為：50℃2 min、95℃5 min、95℃5 s→60℃35 s（45個循環(huán)），反應(yīng)體系40 l。

1.3 統(tǒng)計方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料采用2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同分娩方式與妊娠結(jié)局的關(guān)系370例GBS陽性患者順產(chǎn)232例，剖宮產(chǎn)138例。順產(chǎn)組與剖宮產(chǎn)組胎膜早破、宮內(nèi)感染及胎兒窘迫發(fā)生率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

表1 不同分娩方式與妊娠結(jié)局的關(guān)系 例（%）

2.2 3組PCR檢測結(jié)果與妊娠結(jié)局的關(guān)系 3組胎膜早破、宮內(nèi)感染、胎兒窘迫發(fā)生率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），見表2。

表2 3組PCR檢測結(jié)果與妊娠結(jié)局的關(guān)系 例（%）

3 討論

GBS是一種寄生于人類下消化道及泌尿生殖道的細(xì)菌，健康人群帶菌率可達(dá)15%～35%[3]。有研究表明，孕晚期孕婦感染GBS易引發(fā)生殖道細(xì)菌感染，進(jìn)而形成胎膜早破和子宮內(nèi)膜感染等，也可引起早產(chǎn)及胎兒窘迫等，GBS感染會對妊娠結(jié)局帶來不良影響[4-8]。其主要致病機(jī)制可能由于孕晚期孕婦機(jī)體抵抗力相對較弱，GBS感染可導(dǎo)致磷脂酶A、前列腺素和細(xì)胞因子的釋放，促使子宮收縮引發(fā)早產(chǎn)及胎膜早破等。生殖道GBS感染患者胎膜破裂后，增加宮內(nèi)感染和絨毛膜羊膜炎及新生兒感染的風(fēng)險。

據(jù)研究報道，在美國，孕婦發(fā)生生殖道GBS的感染率為10%～30%[9]。國內(nèi)報道孕晚期婦女GBS帶菌率有所不同，其中李東等[10]報道北京地區(qū)的孕婦GBS感染率為9.6%，侯雅萍等[11]報道上海地區(qū)孕婦GBS的感染率為6.3%，張怡等[12]對黑龍江地區(qū)孕婦的研究報道顯示其GBS帶菌率為15.84%。由于年齡、經(jīng)濟(jì)狀況、地域差異及檢測方法不同等，其導(dǎo)致GBS的感染率有所差異。

本研究應(yīng)用PCR熒光探針技術(shù)進(jìn)行檢測，相比于傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)法，PCR熒光探針技術(shù)檢測GBS有較高的敏感度和特異性，是妊娠晚期孕婦常規(guī)檢測GBS感染的首選方法[13]。本研究結(jié)果顯示3組GBS檢測結(jié)果與孕婦不良妊娠結(jié)局的發(fā)生率均無明顯相關(guān)性，這提示陰道單獨帶菌或肛門單獨帶菌與GBS陽性產(chǎn)婦不良妊娠結(jié)局發(fā)生率并無明顯的關(guān)系，可能原因是女性泌尿生殖系統(tǒng)較特殊，其陰道與肛門鄰近，無論是陰道還是肛門周圍都存在大量細(xì)菌，這兩個部位的GBS定植會相互作用。有研究發(fā)現(xiàn)，任意部位的GBS定植都是可以間斷的，在某個時間僅有肛門GBS定植篩查陽性，但至分娩時可能陰道GBS定植陽性，兩個部位同時篩查是檢測孕婦GBS定植最有效的方法，篩查陽性陰道、直腸標(biāo)本聯(lián)合檢測可提高GBS檢出率[14-15]；同時檢測肛門與陰道帶菌結(jié)果可減少漏檢的情況。本研究順產(chǎn)組的胎膜早破、宮內(nèi)感染及胎兒窘迫的發(fā)生率高于剖宮產(chǎn)組（均P＜0.05）。分析原因可能由于女性GBS感染后，體內(nèi)蛋白水解酶含量增加導(dǎo)致胎膜張力減低，造成胎膜早破的情況，胎膜破裂后，由于胎膜的屏障作用消失，外界細(xì)菌可經(jīng)陰道進(jìn)入羊膜腔，經(jīng)陰道分娩導(dǎo)致細(xì)菌上行感染至子宮，增加宮內(nèi)感染的情況；而由于宮內(nèi)發(fā)生感染之后，子宮內(nèi)部微環(huán)境改變，造成胎兒缺氧，進(jìn)而提高了胎兒窘迫的發(fā)生率。

綜上所述，不同部位GBS感染結(jié)果與妊娠不良結(jié)局無相關(guān)性，GBS陽性患者的分娩方式與妊娠不良結(jié)局的發(fā)生有相關(guān)性，這提示臨床工作中需要對GBS感染引起重視。