鄭璐，潘一帆，秦會(huì)，張疆雨，劉薇

大連理工大學(xué)環(huán)境學(xué)院，工業(yè)生態(tài)與環(huán)境工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，大連 116024

全氟辛烷磺酸(perfluorooctane sulfonate, PFOS)具有良好的熱穩(wěn)定性、疏水和疏油等特殊的理化性質(zhì)，曾被廣泛用于工業(yè)和民用領(lǐng)域數(shù)十年[1-2]。PFOS具有環(huán)境持久性、高生物累積性、遠(yuǎn)距離遷移性和多種毒性作用[3]，在地表水、底泥和灰塵等多種環(huán)境介質(zhì)以及人體中均檢測(cè)到PFOS，對(duì)生態(tài)環(huán)境和人類(lèi)健康造成嚴(yán)重威脅。因此，2009年5月斯德哥爾摩公約正式將PFOS列入持久性有機(jī)污染物名單[4]。目前環(huán)境殘留是PFOS的重要暴露來(lái)源，PFOS的毒性機(jī)理研究對(duì)于其他全氟及多氟烷基化合物(per- and polyfluoroalkyl substances, PFASs)的研究具有重要參考價(jià)值。

由于PFOS與過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferators-activated receptors, PPARs)的天然配體脂肪酸的結(jié)構(gòu)相似，使得PPARs成為其毒性作用的首要分子靶標(biāo)[5]，PPARs包括PPARα、PPARβ和PPARγ這3種亞型。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PPARα是PFASs對(duì)嚙齒類(lèi)動(dòng)物的主要靶標(biāo)，是誘導(dǎo)肝腫瘤的重要機(jī)制，但人體PPARα的敏感性明顯低于嚙齒類(lèi)動(dòng)物[6]，因此根據(jù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)估PFASs的健康風(fēng)險(xiǎn)具有較強(qiáng)的不確定性。此外，PPARs各亞型在調(diào)控細(xì)胞分化中起到不同甚至相反的作用。PPARγ為脂肪形成的主要調(diào)節(jié)劑，其表達(dá)可促進(jìn)干細(xì)胞/祖細(xì)胞的成脂分化并抑制其成骨分化，從而增加細(xì)胞脂質(zhì)水平并減少骨形成[7]。此外，PPARγ激活可促進(jìn)破骨作用。因此PPARγ在調(diào)節(jié)骨量和骨代謝中也起到重要作用。與PPARγ相反，PPARβ作為骨轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，其被激活而抑制成骨細(xì)胞介導(dǎo)的破骨細(xì)胞生成[8]。因此，研究PFOS與PPARs的相互作用，對(duì)于闡明其分子毒理學(xué)機(jī)制和毒性預(yù)測(cè)具有重要意義。

傳統(tǒng)毒理學(xué)評(píng)價(jià)動(dòng)物模型存在倫理學(xué)限制、種屬差異和效率低等局限性，腫瘤細(xì)胞體外毒性測(cè)試體系受異常細(xì)胞周期調(diào)控等因素影響。人干細(xì)胞具有自我更新和多向分化能力，相比動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物細(xì)胞模型與人體健康相關(guān)性更強(qiáng)[9-10]。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)PFOS在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(human bone marrow-derived mesenchymal stem cells, hBMSCs)定向分化條件下，抑制細(xì)胞成骨分化，刺激成脂分化，與流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)PFOS與骨密度降低以及骨質(zhì)疏松癥相關(guān)的結(jié)果一致，提示PFOS對(duì)hBMSCs分化的影響研究可準(zhǔn)確有效識(shí)別該類(lèi)污染物的毒性機(jī)理[11-12]。本研究采用hBMSCs成骨/成脂雙向分化模型，研究PFOS暴露對(duì)PPARs各亞型的干擾，及其與干細(xì)胞成骨/成脂分化平衡的關(guān)聯(lián)。研究結(jié)果可為揭示PFASs的毒性機(jī)理和分子靶標(biāo)及其健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 試劑材料

PFOS(C8F17KO3S)、二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)、地塞米松、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine, IBMX)、吲哚美辛、茜素紅S、油紅O、十六烷基氯化吡啶和羅格列酮(rosiglitazone, ROSI)購(gòu)自Sigma-Aldrich。重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白(recombinant human bone morphogenetic protein 2, BMP2)購(gòu)自PeproTech。異丙醇購(gòu)自天津科密歐化學(xué)試劑廠(chǎng)。CCK-8試劑盒購(gòu)自碧云天生物?？俁NA急速提取試劑盒購(gòu)自上海飛捷生物技術(shù)有限公司。反轉(zhuǎn)錄試劑盒和SYBR熒光染料qPCR試劑盒購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司。

1.2 儀器

CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(NU-4750E，NUAIRE，美國(guó))；光學(xué)顯微鏡(YS100，Nikon，日本)；全自動(dòng)酶標(biāo)儀(Infinite 200 PRO，Tecan，奧地利)；高速冷凍離心機(jī)(Microfuge 20R，Beckman Coulter，美國(guó))；熒光定量PCR儀(Stepone Plus，Applied Biosystems，美國(guó))。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)和暴露

hBMSCs、基礎(chǔ)培養(yǎng)基和成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基購(gòu)自賽業(yè)生物科技有限公司。細(xì)胞在37 ℃和5% CO2條件細(xì)胞箱中培養(yǎng)，在實(shí)驗(yàn)室增殖培養(yǎng)至第6代用于本研究。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查中一般人群和職業(yè)暴露人群的血液PFOS濃度設(shè)定細(xì)胞實(shí)驗(yàn)暴露濃度范圍。例如，中國(guó)上海299名孕婦臍帶血的血漿中PFOS的最高濃度為0.12 μmol·L-1[13]；美國(guó)773名成年人血清中PFOS的算數(shù)平均濃度為0.36 μmol·L-1[14]；在位于湖北省的中國(guó)最大的PFOS相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)工廠(chǎng)之一，36個(gè)工人血清樣本中檢測(cè)到PFOS的幾何平均濃度為2.58 μmol·L-1[15]。因此，本研究選擇PFOS暴露濃度為0.1、1和10 μmol·L-1，具有良好的人體暴露相關(guān)性。未分化細(xì)胞經(jīng)PFOS暴露7 d后，測(cè)定細(xì)胞活性和關(guān)鍵基因表達(dá)水平。

1.4 細(xì)胞活性測(cè)定

將hBMSCs以4 000個(gè)·孔-1的密度接種于96孔板中，每組設(shè)置3個(gè)平行。在CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，換用含體積比為0.1% DMSO的溶劑對(duì)照培養(yǎng)基以及含PFOS的暴露培養(yǎng)基，每3 d更換暴露液。使用CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活性，根據(jù)公式計(jì)算細(xì)胞活性：細(xì)胞活性=(暴露組吸光度-空白對(duì)照組吸光度)÷(溶劑對(duì)照組吸光度-空白對(duì)照吸光度)。

1.5 成骨/成脂雙向誘導(dǎo)分化

作為成骨細(xì)胞和成脂細(xì)胞共同的祖細(xì)胞，hBMSCs的成骨和成脂分化之間相互制約抗衡，通過(guò)分化平衡維持骨骼紊態(tài)，hBMSCs雙向誘導(dǎo)分化是一種常用的干細(xì)胞生物學(xué)模型，適合于研究外源化學(xué)物對(duì)細(xì)胞分化的影響[16-17]。本研究采用成骨/成脂雙向誘導(dǎo)分化體系，研究PFOS對(duì)成骨成脂分化平衡的影響。采用成骨誘導(dǎo)因子BMP2和成脂誘導(dǎo)因子ROSI作為陽(yáng)性對(duì)照。hBMSCs匯合度達(dá)100%以上后分別換用含0.1% DMSO、200 ng·mL-1BMP2、500 nmol·L-1ROSI或PFOS的成骨/成脂雙向誘導(dǎo)培養(yǎng)基，混合培養(yǎng)基包含體積比為1∶1的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基(賽業(yè))和成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基(低糖基礎(chǔ)培養(yǎng)基、10%胎牛血清、1%青鏈霉素、0.5 mmol·L-1IBMX、0.5 μmol·L-1地塞米松和50 μmol·L-1吲哚美辛)，每3 d更換暴露液，共暴露14 d。在細(xì)胞分化第14天，分別通過(guò)鈣結(jié)節(jié)形成和脂質(zhì)形成表征成骨分化和成脂分化水平。用茜素紅染色的方法表征鈣結(jié)節(jié)形成。吸去暴露液，用磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline, PBS)洗滌。使用體積比為70%的乙醇固定細(xì)胞1 h后，再次用PBS洗滌，用40 mmol·L-1茜素紅染液染色細(xì)胞20 min，用PBS沖洗。加入10%氯化十六烷基吡啶萃取20 min，將萃取溶液加入96孔板中，用酶標(biāo)儀在584 nm檢測(cè)吸光度。

用油紅O染色表征脂質(zhì)形成。吸去暴露液，用PBS洗滌。使用4%甲醛固定細(xì)胞30 min后，再次用PBS洗滌，用油紅O染液染色細(xì)胞30 min，用PBS沖洗。加入異丙醇萃取20 min，將萃取溶液加入96孔板中，用酶標(biāo)儀在584 nm檢測(cè)吸光度。

1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)

將hBMSCs以8×104個(gè)·孔-1的密度接種于6孔板中，每組設(shè)置3個(gè)平行。接種48 h后將基礎(chǔ)培養(yǎng)基分別更換為含0.1% DMSO的溶劑對(duì)照培養(yǎng)基或含PFOS的暴露培養(yǎng)基，每3 d更換暴露液。暴露7 d后，使用總RNA急速提取試劑盒進(jìn)行RNA抽提。以總RNA為模板，使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)條件為：42 ℃孵育15 min，85 ℃加熱5 s。引物由上海生工合成，以cDNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，反應(yīng)條件為：94 ℃，30 s；94 ℃，5 s；60 ℃，15 s；72 ℃，10 s。每個(gè)平行樣本3個(gè)復(fù)孔進(jìn)行RT-qPCR分析。以GAPDH基因?yàn)閮?nèi)參基因，對(duì)目的基因進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，用StepOne軟件進(jìn)行CT值分析，用2-ΔΔCT法計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)倍數(shù)。

1.7 基因芯片分析

細(xì)胞經(jīng)0.1 μmol·L-1PFOS或0.1% DMSO連續(xù)暴露7 d后，使用TRIzol提取細(xì)胞總RNA，按照Affymetrix表達(dá)譜芯片的標(biāo)準(zhǔn)流程由上海伯豪生物公司進(jìn)行微陣列測(cè)定[12]。篩選差異表達(dá)基因的標(biāo)準(zhǔn)為P<0.05且log2(表達(dá)差異倍數(shù))>0.3。使用基因富集分析(Gene Set Enrichment Analysis, GSEA)對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行分析，識(shí)別PFOS影響的生物學(xué)通路。原始數(shù)據(jù)已上傳至GEO數(shù)據(jù)庫(kù)(GSE115836)。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示，采用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-Way ANOVA)。用GSEA篩選差異表達(dá)基因和通路富集?！?、**”表示兩組之間有顯著性差異(P<0.05、P<0.01)。

2 結(jié)果(Results)

2.1 PFOS對(duì)hBMSCs未分化條件下PPARs各亞型mRNA表達(dá)水平的影響

在0.1～10 μmol·L-1濃度范圍內(nèi)，PFOS暴露7 d對(duì)細(xì)胞增殖未產(chǎn)生顯著性影響，細(xì)胞存活率均>90%(圖1)。因此，選擇0.1～10 μmol·L-1作為后續(xù)研究的PFOS暴露濃度，可避免細(xì)胞毒性對(duì)機(jī)理研究的干擾。在對(duì)細(xì)胞增殖未產(chǎn)生顯著性影響的濃度下，PFOS暴露誘導(dǎo)hBMSCs細(xì)胞中PPARα、PPARβ和PPARγ表達(dá)上調(diào)(圖2)。在1 μmol·L-1PFOS作用下，PPAR各亞型mRNA表達(dá)上調(diào)幅度最大，分別上調(diào)至對(duì)照組的6.31倍、6.44倍和15.4倍。其中，PPARγ顯著上調(diào)，由于PPARα和PPARβ誤差較大，與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。

圖1 未分化hBMSCs暴露于全氟辛烷磺酸(PFOS) 7 d后的細(xì)胞存活率Fig. 1 Cell viability of un-induced hBMSCs after 7 d of perfluorooctane sulfonate (PFOS) exposure

圖2 PFOS暴露7 d對(duì)未分化hBMSCs中PPARα、PPARβ和PPARγ mRNA表達(dá)水平的影響注：與對(duì)照組相比，*P<0.05。Fig. 2 Effects of PFOS on mRNA expressions of PPARα, PPARβ, and PPARγ after 7 d of exposure in un-induced hBMSCsNote: Compared with the control, *P<0.05.

2.2 PFOS對(duì)hBMSCs分化關(guān)鍵調(diào)控基因mRNA表達(dá)水平的影響

ALP和Runx2均為成骨分化早期的標(biāo)志性基因，經(jīng)PFOS暴露7 d后，細(xì)胞ALP和Runx2的mRNA表達(dá)水平下降(圖3)。PFOS在1 μmol·L-1濃度下產(chǎn)生的抑制作用最強(qiáng)，ALP和Runx2的mRNA表達(dá)水平分別下調(diào)至對(duì)照組的50.2%和67.4%，但差異不顯著(P>0.05)。

圖3 PFOS暴露7 d對(duì)未分化hBMSCs中ALP、RUNX2和OPG mRNA表達(dá)水平的影響注：與對(duì)照組相比，**P<0.01。Fig. 3 Effects of PFOS on mRNA expressions of ALP, RUNX2, and OPG after 7 d of exposure in un-induced hBMSCsNote: Compared with the control, **P<0.01.

與ALP和Runx2相反，PFOS暴露使OPG的mRNA表達(dá)水平升高。在0.1 μmol·L-1PFOS作用下，OPG表達(dá)水平升高至對(duì)照組的2.62倍，且差異顯著(P<0.05)。

2.3 PFOS對(duì)hBMSCs成骨/成脂分化表型標(biāo)志物的影響

進(jìn)一步研究PFOS暴露對(duì)hBMSCs成骨/成脂分化的影響。陽(yáng)性對(duì)照成骨誘導(dǎo)因子BMP2對(duì)鈣沉積產(chǎn)生促進(jìn)作用，但差異不顯著。成脂誘導(dǎo)因子ROSI對(duì)脂肪滴形成產(chǎn)生顯著的促進(jìn)作用(圖4和圖5)。PFOS抑制鈣沉積，0.1 μmol·L-1和1 μmol·L-1的PFOS表現(xiàn)出顯著性抑制作用(圖5)。同時(shí)，PFOS呈劑量依賴(lài)性促進(jìn)脂質(zhì)形成，在1 μmol·L-1和10 μmol·L-1濃度下，細(xì)胞脂質(zhì)形成顯著升高，分別升高至對(duì)照組2.1倍和2.7倍。

圖4 成骨/成脂雙向分化第14天用茜素染色測(cè)定鈣沉積和用油紅O染色測(cè)定脂肪滴注：(a)～(c)為鈣結(jié)節(jié)染色，依次為溶劑對(duì)照、10 μmol·L-1 PFOS處理組和陽(yáng)性對(duì)照BMP2處理組；(d)～(f)為脂肪滴染色，依次為溶劑對(duì)照、10 μmol·L-1 PFOS和陽(yáng)性對(duì)照ROSI處理組。Fig. 4 Calcium deposition measured by Alizarin Red S staining and fat droplets measured by Oil Red O staining on day 14th of osteogenic/adipogenic bidirectional differentiationNote: (a)～(c) show nodule staining of solvent control, 10 μmol·L-1 PFOS treatment group and positive control BMP2 treatment group; (d)～(f) show fat drop staining of solvent control, 10 μmol·L-1 PFOS and positive control ROSI treatment group.

圖5 誘導(dǎo)分化條件下PFOS暴露14 d對(duì)hBMSCs中鈣結(jié)節(jié)形成和脂肪滴形成的影響注：與對(duì)照組相比，*P<0.05。Fig. 5 Effects of 14 d of exposure to PFOS on calcium nodule formation or droplet formation in hBMSCs cultured in induction mediumNote: Compared with the control, *P<0.05.

2.4 PFOS對(duì)hBMSCs基因表達(dá)譜的影響

在未分化條件下經(jīng)0.1 μmol·L-1PFOS暴露7 d后，hBMSCs的基因表達(dá)譜中篩選出597個(gè)差異表達(dá)基因(P<0.05且log2(表達(dá)差異倍數(shù))>0.3)。通過(guò)GSEA對(duì)差異基因進(jìn)行通路富集分析，在表1中列出了根據(jù)P值選取受影響最顯著的10個(gè)通路。其中，細(xì)胞凋亡(P=0.028)與骨質(zhì)疏松癥之間聯(lián)系緊密，成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞凋亡可能與骨質(zhì)疏松直接相關(guān)[18]。剪接體(P=0.106)通路相關(guān)基因異常突變可導(dǎo)致E/A剪接復(fù)合體功能受損，是骨髓增生異常的發(fā)病的主要機(jī)理[19]。

表1 PFOS誘導(dǎo)hBMSCs差異表達(dá)基因富集的生物學(xué)通路Table 1 Biological pathways enriched by the differentially expressed genes affected by PFOS in hBMSCs

3 討論(Discussion)

盡管PPARs是PFOS的首要分子靶標(biāo)，PPARs相關(guān)的PFOS毒性作用通路仍不清楚。筆者比較研究了PFOS對(duì)PPARs各亞型的干擾及其與細(xì)胞分化之間的關(guān)聯(lián)，對(duì)深入理解PFOS的毒性作用機(jī)理具有重要意義。PFOS暴露誘導(dǎo)hBMSCs細(xì)胞PPARα、PPARβ和PPARγ表達(dá)均上調(diào)，與以往研究結(jié)果一致。動(dòng)物毒理學(xué)研究表明，PFOS激活PPARα信號(hào)通路，并可誘發(fā)小鼠和大鼠肝癌[20]。Li等[21]發(fā)現(xiàn)，PFOS激活3T3-LI細(xì)胞中PPARs信號(hào)傳導(dǎo)促進(jìn)脂肪形成，其中PPARγ起主要作用，PPARα和PPARβ作用相對(duì)較弱，通過(guò)分子對(duì)接模擬顯示PFOS直接與PPARα、PPARβ和PPARγ結(jié)合。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)，hBMSCs在成脂誘導(dǎo)分化條件下，經(jīng)0.2～100 nmol·L-1PFOS暴露7 d后，PPARγ的mRNA表達(dá)水平升高至對(duì)照組的1.05倍～1.53倍[15]，上調(diào)倍數(shù)低于本研究，主要原因可能為未誘導(dǎo)分化條件下，無(wú)其他成脂誘導(dǎo)因子共同作用，PFOS對(duì)hBMSCs中PPARγ的激活作用更明顯。

因?yàn)镻PARs在細(xì)胞分化調(diào)控中起重要作用，因此進(jìn)一步測(cè)定了PFOS暴露對(duì)細(xì)胞分化關(guān)鍵基因mRNA表達(dá)的干擾。Runx2表達(dá)下調(diào)與PPARγ激活一致。PPARγ和Runx2均是調(diào)節(jié)hBMSCs細(xì)胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，在細(xì)胞分化過(guò)程中二者轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控機(jī)制密切關(guān)聯(lián)，但變化趨勢(shì)相反。p38MAPK介導(dǎo)絲氨酸磷酸化導(dǎo)致PPARγ失活和RUNX2激活，而蛋白磷酸化酶5通過(guò)PPARγ和Runx2蛋白的去磷酸化，激活PPARγ抑制RUNX2[7]。而OPG上調(diào)與PPARβ激活一致，主要原因可能為PPARβ的激活誘導(dǎo)成骨細(xì)胞中WNT-β-catenin介導(dǎo)的OPGmRNA表達(dá)增加[8]。OPG為骨轉(zhuǎn)換關(guān)鍵因子，成骨細(xì)胞中OPG與RANK結(jié)合，形成調(diào)節(jié)骨代謝的OPG/RANKL/RANK通路有效抑制破骨細(xì)胞的發(fā)育，并增加骨量[22]。因此，PPARs各亞型的激活可能在調(diào)控細(xì)胞分化中產(chǎn)生不同的作用。

細(xì)胞分化表型標(biāo)志物的分析結(jié)果表明，在雙向分化條件下，PFOS暴露抑制成骨分化且促進(jìn)成脂分化，與ALP和RUNX2基因表達(dá)下調(diào)一致，主要原因可能為PPARγ激活。PPARγ是成脂分化的關(guān)鍵正向調(diào)控因子，也是成脂/成骨分化平衡的關(guān)鍵因子。在骨髓中，PPARγ激活抑制Runx2介導(dǎo)的骨鈣素在成骨細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄[22]。筆者經(jīng)前期研究發(fā)現(xiàn)，在分別對(duì)hBMSCs進(jìn)行定向成骨分化誘導(dǎo)和成脂分化誘導(dǎo)時(shí)，PFOS抑制成骨分化，促進(jìn)成脂分化[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，在成脂/成骨雙向誘導(dǎo)分化模型中，PFOS干擾骨髓干細(xì)胞成骨/成脂分化平衡，進(jìn)一步證明hBMSCs多向分化是PFOS暴露的敏感靶標(biāo)，對(duì)于揭示其毒性作用機(jī)制具有重要價(jià)值。PFOS作用下hBMSCs基因表達(dá)譜中差異表達(dá)基因的富集分析顯示，受影響通路主要涉及細(xì)胞分化、骨代謝和脂質(zhì)代謝相關(guān)通路，進(jìn)一步證實(shí)了PFOS對(duì)hBMSCs分化潛能的損傷，并提示骨代謝和脂代謝相關(guān)生物學(xué)過(guò)程受到干擾。PFOS激活PPARβ可能是OPG表達(dá)上調(diào)的重要機(jī)制[8]，其在PFOS干擾細(xì)胞分化中的作用，仍需進(jìn)一步研究。盡管OPG表達(dá)上調(diào)，但細(xì)胞成骨分化仍受到抑制，可能是因?yàn)镻FOS對(duì)PPARγ的激活作用強(qiáng)于PPARβ。此外，PFOS暴露劑量和暴露時(shí)間也是影響細(xì)胞分化效應(yīng)的重要因素。研究結(jié)果提示有必要進(jìn)一步研究PFOS以及其他PFASs類(lèi)化學(xué)物對(duì)PPARs各亞型的激活與hBMSCs分化紊態(tài)失衡之間的關(guān)聯(lián)，有利于闡明PFASs損傷干細(xì)胞分化的毒性機(jī)理，并為該類(lèi)化學(xué)品健康效應(yīng)的預(yù)測(cè)和篩選提供理論依據(jù)和方法。

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