王岳青　曲淼　茹塵　鄧璐瑤　謝穎楨

〔摘要〕 目的 通過應(yīng)用磁共振波譜（magnetic resonance spectroscopy， MRS）觀察母嬰分離產(chǎn)后抑郁大鼠腦組織內(nèi)代謝物的濃度，探索參芪解郁方對(duì)母嬰分離產(chǎn)后抑郁大鼠模型的干預(yù)作用。方法 SD孕鼠72只，孕16 d，隨機(jī)分為正常組、模型組、參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組，共4組，每組18只，模型組、參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組，采用母嬰分離法制備產(chǎn)后抑郁大鼠模型，在產(chǎn)后1～21 d每日分離4 h。造模結(jié)束后，分別給予雙蒸水、參芪解郁方、鹽酸氟西汀灌胃，正常組給予等容雙蒸水灌胃，再設(shè)1、2、4周3個(gè)時(shí)點(diǎn)，分別對(duì)大鼠進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，并于第4周采用MRS定量檢測(cè)技術(shù)掃描各組大鼠雙側(cè)海馬、前額葉皮質(zhì)的N-乙酰天冬氨酸（N-acety1 aspartate， NAA）、含膽堿化合物（choline， Cho）、肌醇（myo-inositol， mI）、肌酸（creatine， Cr）以及谷氨酸（glutamate， Glu），測(cè)定NAA、Cho、G1u及mI相對(duì)濃度變化，計(jì)算NAA/Cr、Cho/Cr、Glu/Cr及mI/Cr的比值。結(jié)果 行為學(xué)結(jié)果：與正常組相比，模型組大鼠各時(shí)點(diǎn)的不動(dòng)時(shí)間均明顯增加（P<0.01），掙扎時(shí)間、游泳時(shí)間、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)總分、蔗糖水消耗、進(jìn)入開放臂的次數(shù)比例（OE/TE）和進(jìn)入開放臂的時(shí)間比例（OT/TT）明顯降低（P<0.01）;與模型組相比，參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組大鼠各時(shí)點(diǎn)的不動(dòng)時(shí)間明顯減少（P<0.01）;掙扎時(shí)間、游泳時(shí)間、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)總分、蔗糖水消耗、OE/TE和OT/TT明顯升高（P<0.01）。MRS結(jié)果：與正常組相比，模型組大鼠雙側(cè)前額葉皮質(zhì)、海馬的NAA/Cr、Cho/Cr明顯降低（P<0.01），Glu/Cr明顯升高（P<0.01）;與模型組相比，參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組大鼠雙側(cè)海馬NAA/Cr、Cho/Cr值顯著升高（P<0.01）。結(jié)論 參芪解郁方可以調(diào)節(jié)母嬰分離PPD模型大鼠的抑郁樣行為，修復(fù)PPD受損神經(jīng)元，促進(jìn)神經(jīng)重塑，調(diào)節(jié)谷氨酸能系統(tǒng)及膜磷脂代謝，從而對(duì)PPD發(fā)揮治療作用。

〔關(guān)鍵詞〕 母嬰分離;產(chǎn)后抑郁;磁共振波譜;參芪解郁方

〔中圖分類號(hào)〕R285.5? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.03.003

〔Abstract〕 Objective To observe brain metabolites changes in rats with maternal and infant separation post-partum depression （PPD） and effects of Shen-Qi-Jie-Yu-Fang （SJ Fang） on maternal and infant separated PPD rat model by magnetic resonance spectroscopy （MRS）. Methods 72 pregnant SD rats on the 16th day of pregnancy were randomly divided into four group， normalgroup， model group， SJ Fang group and fluoxetine group， and with 18 rats in each group. Model group， fluoxetine group， and SJ Fang group were created in SD rats by suffered with maternal infant separation stress （MISS）. They were separated daily for 4 hours from 1 to 21 day postpartum. After the modeling， rats were given intragastric administration with SJ Fang， fluoxetine and distilled water， normal group was given equal volume double distilled water. Behavioral tests were conducted at 3 time points at 1st， 2nd， 4th week， respectively. At the 4th week， the N-acety1 aspartate （NAA）， choline （Cho）， myo-inositol （mI）， creatine （Cr） and glutamate （Glu） in the bilateral hippocampus and prefrontal cortex of rats in each group were scanned by MRS quantitative detection technology. Changes in the relative concentrations of NAA， Cho， G1u and mI were determined， and the ratios of NAA/Cr， Cho/Cr， Glu/Cr and mI/Cr were calculated. Results Behavioral results： compared with the normal group， the immobility time of model group was significantly increased at each time point （P<0.01）， while the struggle time， swimming time， total score of open field experiment， sucrose water consumption， the proportion of times entering the open arm （OE/TE） and the proportion of open entries/total entries （OT/TT） were significantly decreased （P<0.01）; compared with model group， both fluoxetine group and SJ Fang group decreased immobility time （P<0.01）， increased swimming time， struggling time， sucrose consumption， OT/TT and OE/TE （P<0.01）. MRS results： compared with normal group， NAA/Cr， Cho/Cr in bilateral prefrontal cortex and hippocampus of model group were significantly decreased （P<0.01）， and Glu/Cr was significantly increased （P<0.01）; compared with model group， the values of NAA/Cr and Cho/Cr in bilateral hippocampus of rats in SJ Fang group and fluoxetine group were significantly increased （P<0.01）. Conclusion SJ Fang could regulate the depression-like behavior of maternal and infant separation PPD model rats， repair PPD damaged neurons， and promote neural remodeling， regulate glutamatergic system and membrane phospholipid metabolism， and thus play a therapeutic role in PPD.

〔Keywords〕 maternal and infant separation; post-partum depression; magnetic resonance spectroscopy; Shen-Qi-Jie-Yu-Fang

產(chǎn)后抑郁癥（postpartum depression， PPD）是與分娩相關(guān)的暫時(shí)性重度抑郁癥發(fā)作，是全球范圍內(nèi)女性常見的精神心理問題之一，其發(fā)病率約為13%～19%[1]。有相關(guān)研究[2]已經(jīng)證實(shí)，PPD直接影響產(chǎn)婦的生活質(zhì)量，如果不及時(shí)治療，可使產(chǎn)婦出現(xiàn)精力下降、注意力不集中、睡眠障礙，甚至影響母嬰關(guān)系，嚴(yán)重者誘發(fā)產(chǎn)婦殺嬰和自殺。因此，了解PPD的病理生理過程具有重要意義。

磁共振波譜（magnetic resonance spectroscopy， MRS）作為一種無創(chuàng)性的功能影像技術(shù)，可以測(cè)量腦組織內(nèi)多種代謝物的水平，對(duì)大腦功能進(jìn)行定性及定量分析，課題組前期[3-4]采用MRS對(duì)腦卒中后抑郁和廣泛性焦慮大鼠腦內(nèi)形態(tài)學(xué)進(jìn)行探索性研究?jī)煞N模型的大鼠均存在腦組織形態(tài)學(xué)的改變及神經(jīng)元的損傷，相比之下，采用MRS技術(shù)研究PPD尚處于早期階段，PPD發(fā)病與腦內(nèi)代謝物濃度的改變有待進(jìn)一步研究。因此，本研究以腦代謝水平為切入點(diǎn)，采用母嬰分離法制備產(chǎn)后抑郁大鼠模型，以中藥參芪解郁方為干預(yù)手段，利用MRS技術(shù)定量分析PPD大鼠前額葉皮質(zhì)和海馬腦組織內(nèi)的相關(guān)能量代謝物，揭示PPD大鼠的腦功能變化，并以補(bǔ)益心脾方藥參芪解郁方對(duì)PPD大鼠進(jìn)行干預(yù)，從大鼠腦代謝水平及不同時(shí)間點(diǎn)的行為學(xué)等相關(guān)指標(biāo)，闡釋參芪解郁方對(duì)PPD大鼠的干預(yù)機(jī)制，為臨床提供治療思路和理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

采用SPF級(jí)，Sprague-Dawley孕鼠，孕16 d購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司[動(dòng)物許可證：SCXK（京）2016-0006]。母鼠僅在懷孕期間給予繁殖營(yíng)養(yǎng)飼料，產(chǎn)后則給予普通飼料。實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物自由攝食和飲水（蔗糖水消耗實(shí)驗(yàn)除外），室內(nèi)安靜，光照周期為12 h（7：00～19：00），室溫 20～22 ℃，相對(duì)濕度為60%～70%。

1.2? 實(shí)驗(yàn)藥物

參芪解郁方由黨參12 g、黃芪20 g、炒棗仁 30 g、當(dāng)歸15 g、郁金15 g、山茱萸肉30 g、陳皮 10 g、佛手9 g組成[4]。參芪解郁方中藥配方顆粒購(gòu)于北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，按成人用量7倍計(jì)算大鼠用量，生藥配比1.25 g/mL，溶于雙蒸水，于4 ℃冰箱貯存?zhèn)溆?，臨用前加熱。鹽酸氟西汀膠囊購(gòu)買于禮來蘇州制藥有限公司（20 mg×7粒，批號(hào)：0943A），60 kg體質(zhì)量成人用量20 mg/d，按成人用量的7倍計(jì)算大鼠每天用量為0.25 g/100 g，臨用時(shí)溶于雙蒸水中，濃度為0.25 mg/mL。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1? 動(dòng)物分組與造模

孕16 d SD大鼠，單籠飼養(yǎng)，購(gòu)入后適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，3 d后進(jìn)行曠場(chǎng)測(cè)試，根據(jù)評(píng)分結(jié)果篩選72只合格孕鼠，并隨機(jī)分為正常組、模型組、參芪解郁方組和鹽酸氟西汀組，共4組。每組再設(shè)處理后第1、2、4周觀察時(shí)間點(diǎn)，各組不同時(shí)間點(diǎn)設(shè)大鼠6只。

造模方法參照實(shí)驗(yàn)進(jìn)行，采用母嬰分離應(yīng)激法制備動(dòng)物模型[5-6]，于分娩后第1天至第21天進(jìn)行母嬰分離，每天分離4 h，分離時(shí)間為每天上午9：00 至下午1：00，分離時(shí)將幼鼠移至另一籠中，分離結(jié)束后將幼鼠放回對(duì)應(yīng)母鼠籠子中，對(duì)照組幼鼠不做任何處理，所有幼鼠于第22天斷乳。造模后1、2、4 周觀察模型組與正常組行為學(xué)變化，明確造模成功。

2.2? 給藥方法

于造模結(jié)束后進(jìn)行藥物干預(yù)，以相當(dāng)于成人用量的7倍計(jì)算，配成419 mg/kg的混懸液（即1劑配方顆粒加100 mL的蒸餾水）藥物灌胃體積為1 mL/100 g體質(zhì)量。參芪解郁方組給予自擬參芪解郁方（該方已提交專利申請(qǐng)，專利號(hào)201810157146.5）中藥配方顆粒，鹽酸氟西汀組予鹽酸氟西汀膠囊，正常組和模型組給予等容雙蒸水。母鼠灌胃1、2、4周進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，灌胃結(jié)束后行影像學(xué)檢測(cè)。

2.3? 行為學(xué)測(cè)試

2.3.1? 大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)情況? 實(shí)驗(yàn)開始后，每周監(jiān)測(cè)大鼠體質(zhì)量，并計(jì)算大鼠灌胃1、2、4周的體質(zhì)量增長(zhǎng)情況，根據(jù)體質(zhì)量情況調(diào)整藥物劑量。

2.3.2? 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)? 強(qiáng)迫游泳（forced swimming test， FST）實(shí)驗(yàn)參照文獻(xiàn)[7-8]進(jìn)行，第1天，將各組大鼠在安靜狀態(tài)下分別置于直徑25 cm、高度60 cm、水深35 cm的圓柱形缸內(nèi)進(jìn)行預(yù)游泳，時(shí)間15 min，水溫24～25 ℃。結(jié)束后，用毛巾擦干鼠毛，將大鼠置于28 ℃的環(huán)境中30 min后放回鼠籠。第2天同一時(shí)間（24 h后）進(jìn)行強(qiáng)迫游泳正式實(shí)驗(yàn)，在同一時(shí)間、同樣條件下讓待測(cè)大鼠游泳5 min，并記錄5 min內(nèi)大鼠呈現(xiàn)的不動(dòng)狀態(tài)、掙扎狀態(tài)、游泳狀態(tài)的時(shí)間，以秒（s）為單位。FST在一定程度上反映了大鼠的抑郁狀態(tài)。

2.3.3? 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)? 曠場(chǎng)試驗(yàn)（open field test， OFT）參照文獻(xiàn)[9-10]進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)裝置為曠場(chǎng)箱（100 cm×100 cm×40 cm），四壁涂黑，記錄動(dòng)物穿越方格次數(shù)作為水平活動(dòng)得分，以動(dòng)物兩前肢離地次數(shù)作為垂直活動(dòng)得分，將大鼠放入敞箱中央，記錄5 min內(nèi)大鼠水平活動(dòng)與垂直活動(dòng)得分。最后將水平得分和垂直得分相加，記錄為曠場(chǎng)試驗(yàn)的總分。

2.3.4? 蔗糖水消耗實(shí)驗(yàn)? 參照文獻(xiàn)[11-12]進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)前，大鼠禁食禁水24 h，24 h后給予各組大鼠1%的蔗糖水，并計(jì)算1 h內(nèi)每只大鼠自由飲用1%蔗糖水的消耗量。用測(cè)量前水瓶液體的體質(zhì)量減去測(cè)量后水平液體的體質(zhì)量，得出的差值即為蔗糖水消耗量。

2.3.5? 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)? 高價(jià)十字迷宮（elevated plus-maze， EPM）是一種經(jīng)典的非條件性焦慮測(cè)試，被廣泛用于焦慮相關(guān)神經(jīng)生物學(xué)中。參照Marchette等人[13]報(bào)道的方法將大鼠面朝閉合臂輕放于中央平臺(tái)，測(cè)試時(shí)間5 min，觀察指標(biāo)：進(jìn)入開放臂的次數(shù)（open-arm entries， OE）、時(shí)間（open-arm time， OT）和進(jìn)入閉合臂的次數(shù)和時(shí)間。計(jì)算出OE占進(jìn)入兩臂總次數(shù)（total entries， TE）的百分比OE/TE和0T占在兩臂中停留的總時(shí)間（total time， TT）的百分比OT/TT。

2.4? MRS測(cè)定

2.4.1? 動(dòng)物準(zhǔn)備? 動(dòng)物腹腔麻醉下，俯臥位置于掃描床上，頭部固定，在大鼠軀干覆蓋棉布保溫，連接呼吸監(jiān)控接收裝置。掃描過程中保持室內(nèi)溫度在20～22 ℃，同時(shí)監(jiān)測(cè)大鼠的呼吸頻率，使其保持在70～80次/min之間。

2.4.2? 磁共振波譜測(cè)定? 在雙側(cè)海馬及雙側(cè)前額葉皮質(zhì)部位，分別選擇一3 mm×3 mm×3 mm大小的立方體感興趣區(qū)，因?yàn)橛信R床和神經(jīng)影像學(xué)證據(jù)證據(jù)表明抑郁癥患者這一區(qū)域的功能神經(jīng)化學(xué)發(fā)生了改變[14-15]，經(jīng)勻場(chǎng)和抑水后，采用PRESS序列采集1H譜，譜寬1 500 Hz，采樣點(diǎn)數(shù)2 048，TR=2 500 ms，TE=20 ms，累加次數(shù)500次，所得1H譜經(jīng)傅立葉變換，基線校正后，指定水峰的化學(xué)位移為4.77 ppm，從而確定2.02 ppm的N-乙酰天冬氨酸（NAA）、3.0 ppm的肌酸（Cr）、3.22 ppm的膽堿化合物（Cho）、2.35 ppm的谷氨酸（Glu）及3.56 ppm的肌醇（mI）等信號(hào)。測(cè)定這些譜峰的高度，計(jì)算NAA/Cr、Cho/Cr、Glu/Cr、MI/Cr。

2.5? 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 26.0及Graphpad prism 8.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理，所得數(shù)據(jù)以“x±s”表示。計(jì)量資料先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布且方差齊時(shí)，多組組間比較采用one-way ANOVA檢驗(yàn)分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。不符合正態(tài)分布者進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化使其符合正態(tài)分布或采用非參數(shù)檢驗(yàn)。顯著性水準(zhǔn)取α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1? 各組大鼠產(chǎn)后體質(zhì)量比較

在灌胃1、2、4周后，與正常組相比，模型組大鼠體質(zhì)量明顯下降（P<0.05）。灌胃1周后，與模型組相比，參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組體質(zhì)量增加，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;治療2周后，參芪解郁方組與模型組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），鹽酸氟西汀組與模型組相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;治療4周后，參芪解郁方組與模型組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。正常組、模型組、參芪解郁方組灌胃2周后體質(zhì)量明顯上升（P<0.01）;正常組、參芪解郁方組灌胃4周后體質(zhì)量較灌胃2周明顯上升（P<0.01）。各時(shí)間點(diǎn)參芪解郁方組與鹽酸氟西汀組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

3.2? 各組大鼠產(chǎn)后游泳時(shí)間比較

灌胃1、2、4周后，與正常組相比，模型組大鼠的游泳時(shí)間顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。與模型組相比，參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組游泳時(shí)間顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。正常組、模型組、參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組灌胃2周較灌胃1周游泳時(shí)間明顯增加（P<0.01）;正常組、模型組、參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組灌胃4周較灌胃2周游泳時(shí)間明顯增加（P<0.01）。各時(shí)點(diǎn)參芪解郁方組與鹽酸氟西汀組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

3.3? 各組大鼠OFT總分比較

灌胃1、2、4周后，與正常組相比，模型組大鼠曠場(chǎng)試驗(yàn)總分顯著降低（P<0.01）;與模型組相比，參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組灌胃2周較灌胃1周曠場(chǎng)試驗(yàn)得分總分明顯增加（P<0.01）;正常組、參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組灌胃4周較灌胃2周曠場(chǎng)試驗(yàn)得分總分明顯增加（P<0.01，P<0.05）。各時(shí)點(diǎn)參芪解郁方組與鹽酸氟西汀組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

3.4? 各組大鼠的蔗糖水消耗比較

灌胃1、2、4周后，與正常組相比，模型組大鼠各時(shí)間點(diǎn)蔗糖水消耗顯著降低（P<0.01），說明抑郁模型復(fù)制成功。與模型組相比，參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組蔗糖水消耗明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組灌胃2周較灌胃1周蔗糖水消耗明顯增加（P<0.01）;正常組、參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組灌胃4周較灌胃2周曠場(chǎng)蔗糖水消耗明顯增加（P<0.01）。各時(shí)間點(diǎn)參芪解郁方組與鹽酸氟西汀組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表4。

3.5? 各組大鼠0T/TT比較

灌胃1、2、4周后，與正常組相比，模型組0T/TT顯著降低（P<0.01），說明模型復(fù)制成功;與模型組相比，參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組0T/TT比值明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。正常組、參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組灌胃2周較灌胃1周0T/TT明顯增加（P<0.01）;正常組、參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組灌胃4周較灌胃2周0T/TT明顯增加（P<0.01）。各時(shí)間點(diǎn)參芪解郁方組與鹽酸氟西汀組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表5。

3.6? 各組大鼠雙側(cè)前額葉皮質(zhì)、海馬的腦代謝物濃度

與正常組相比，模型組大鼠雙側(cè)前額葉皮質(zhì)的NAA/Cr、Cho/Cr值明顯下降，Glu/Cr明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01或P<0.05）。與模型組相比，參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組NAA/Cr、Cho/Cr值顯著升高、Glu/Cr值顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01或P<0.05）;參芪解郁方組與鹽酸氟西汀組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表6。

與正常組相比，PPD模型組大鼠雙側(cè)海馬的NAA/Cr、Cho/Cr值明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01或P<0.05）。與模型組相比，參芪解郁方組、鹽酸氟西汀組雙側(cè)海馬NAA/Cr、Cho/Cr值顯著升高（P<0.01）。參芪解郁方組與鹽酸氟西汀組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表7。

4 討論

在中醫(yī)理論中，產(chǎn)后抑郁可歸屬“郁病”“百合病”的范疇。中醫(yī)傳統(tǒng)理論認(rèn)為氣血虧虛貫穿于產(chǎn)后病的始終，氣機(jī)失調(diào)是產(chǎn)后精神障礙類疾病發(fā)病的重要原因。肝處中焦，為一身氣機(jī)之樞紐，氣血的運(yùn)行，情志的條暢，均取決于肝主疏泄功能的正常。產(chǎn)后氣血虧虛，運(yùn)行無力，氣機(jī)不暢，心神失養(yǎng)，因虛致實(shí)，產(chǎn)生氣滯痰瘀等時(shí)邪，又兼有情志不舒，使?jié)岫攫鰷X絡(luò)而誘發(fā)郁病。而氣郁日久又會(huì)導(dǎo)致氣血耗傷，因?qū)嵵绿?，從而遷延難愈。本病多本虛標(biāo)實(shí)，與心、肝、脾等臟腑功能失調(diào)密切相關(guān)，治當(dāng)補(bǔ)血養(yǎng)心、解郁醒神，故立參芪解郁方。

4.1? 參芪解郁方對(duì)PPD大鼠行為學(xué)的調(diào)節(jié)作用

本實(shí)驗(yàn)采用母嬰分離應(yīng)激誘導(dǎo)母鼠出現(xiàn)抑郁癥的典型癥狀來制備產(chǎn)后抑郁動(dòng)物模型，母嬰分離動(dòng)物模型是將母鼠和仔鼠進(jìn)行為期21 d的分離應(yīng)激是一種較為成熟的公認(rèn)的產(chǎn)后抑郁大鼠模型[16-17]，已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用。課題組前期[18-20]在母嬰分離應(yīng)激后，成功制備了產(chǎn)后抑郁的動(dòng)物模型，經(jīng)測(cè)試，產(chǎn)后抑郁模型的大鼠蔗糖水消耗降低，曠場(chǎng)試驗(yàn)中水平和垂直活動(dòng)次數(shù)減少，這與產(chǎn)后抑郁患者的臨床癥狀相近。因此，本研究繼續(xù)采用此種造模方法。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)PPD模型組大鼠的不動(dòng)時(shí)間較正常組增加，游泳時(shí)間、OFT總分、蔗糖水消耗、進(jìn)入OE/TE比例較正常組減少，而中藥參芪解郁方能夠有效改善上述指標(biāo)，提示中藥對(duì)焦慮、抑郁情緒具有明顯的治療作用，且隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，治療效果逐漸顯著。

4.2? 參芪解郁方對(duì)PPD大鼠腦內(nèi)代謝物濃度的影響

MRS是基于磁共振成像，利用化學(xué)位移作用，測(cè)定人體內(nèi)能量代謝及進(jìn)行化合物定量分析的一種技術(shù)，是目前唯一顯示活體組織代謝的無創(chuàng)影像學(xué)方法[21-22]。它不僅能夠?qū)δ芰看x水平進(jìn)行量化，而且還可以為我們提供神經(jīng)元完整性和神經(jīng)遞質(zhì)可用性的參數(shù)，因此，它也可以用來評(píng)價(jià)大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶能力。本研究采用MRS檢測(cè)PPD大鼠前額葉皮質(zhì)及海馬區(qū)域代謝物的濃度，并從腦代謝的角度觀察參芪解郁方對(duì)PPD發(fā)生發(fā)展的干預(yù)作用。

NAA是1H-MRS譜中觀察到的主峰，是神經(jīng)元、軸突結(jié)構(gòu)完整性的標(biāo)志[23]，NAA的減少可以反映神經(jīng)元細(xì)胞死亡或功能障礙[24]。本研究觀察到PPD模型組大鼠雙側(cè)前額葉皮質(zhì)、海馬區(qū)域的NAA的濃度顯著下降，可能提示PPD大鼠存在神經(jīng)元密度降低、完整性喪失以及空間學(xué)習(xí)和記憶能力下降，這與目前的大多數(shù)研究結(jié)果大致相似[25-27]。其機(jī)制可能與糖皮質(zhì)激素水平升高有關(guān)，已有研究表明，慢性生理或心理壓力會(huì)刺激糖皮質(zhì)激素的分泌[28]。大量觀察表明[29-31]，糖皮質(zhì)激素治療可抑制齒狀回的神經(jīng)發(fā)生，減少海馬、前額葉皮質(zhì)神經(jīng)元樹突萎縮、突觸丟失，最終恢復(fù)神經(jīng)元功能，在MRS上可表現(xiàn)為NAA增加Cho是與情緒、認(rèn)知密切相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的前體[32]，是情感障礙發(fā)生的病理生理基礎(chǔ)，也是神經(jīng)細(xì)胞膜磷脂代謝的一部分。本研究發(fā)現(xiàn)PPD模型組大鼠雙側(cè)前額葉皮質(zhì)、海馬的Cho/Cr值降低，與既往多項(xiàng)研究結(jié)果一致[33-34]，分析其可能原因?yàn)楫a(chǎn)后抑郁作為一種慢性應(yīng)激造成腦內(nèi)細(xì)胞膜磷脂代謝異常，影響細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而阻礙情緒調(diào)節(jié)環(huán)路神經(jīng)元功能的實(shí)現(xiàn)，導(dǎo)致抑郁癥狀，但也可能是多種代謝物異常的綜合作用所致，需要進(jìn)一步研究來進(jìn)行證實(shí)。

Glu被認(rèn)為是抑郁癥的潛在生物標(biāo)志物[35]，關(guān)于PPD腦內(nèi)代謝物Glu/Cr的變化，目前尚無統(tǒng)一結(jié)論，本研究結(jié)果顯示，雙側(cè)海馬的Glu/Cr顯著升高，雙側(cè)前額葉皮質(zhì)的Glu/Cr降低，這可能與所測(cè)腦區(qū)的不同有關(guān)，有相關(guān)研究[36]指出大鼠體內(nèi)海馬區(qū)域代謝物濃度的變化可能與其他區(qū)域不同，海馬和前額葉皮質(zhì)內(nèi)Glu/Cr變化提示PPD大鼠體內(nèi)興奮性氨基酸與抑制性氨基酸遞質(zhì)相對(duì)濃度失去平衡，佐證了谷氨酸能系統(tǒng)障礙在產(chǎn)后抑郁的病理生理中所發(fā)揮的重要作用。

mI被認(rèn)為神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物，它的升高通常被解釋為反映了細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的紊亂和膠質(zhì)細(xì)胞功能障礙[37]，mI的代謝水平的常與重度抑郁密切相關(guān)[30]。本研究發(fā)現(xiàn)在PPD大鼠雙側(cè)海馬和前額葉皮質(zhì)的mI無明顯變化，這可能與該組大鼠正處于產(chǎn)后抑郁的早期有關(guān)，但本研究認(rèn)為其對(duì)于PPD早期預(yù)示并無明確相關(guān)性。

參芪解郁方由黨參、黃芪、炒棗仁、當(dāng)歸、郁金、山茱萸肉、陳皮、佛手組成，具有補(bǔ)血養(yǎng)心、解郁醒神之效，課題組前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究從腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平及其代謝產(chǎn)物變化、T細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)等方面論述了參芪解郁方的確切療效。本研究主要從腦代謝的角度分析參芪解郁方的作用機(jī)制，結(jié)果顯示，與模型組相比，中藥參芪解郁方組能夠升高NAA/Cr、Cho/Cr，降低Glu/Cr值，提示參芪解郁方可修復(fù)受損的神經(jīng)元，促進(jìn)神經(jīng)的重塑，調(diào)節(jié)膜磷脂的代謝、興奮性神經(jīng)遞質(zhì)和抑制性神經(jīng)遞質(zhì)濃度，這可能是其發(fā)揮抗抑郁作用、改善產(chǎn)后抑郁癥狀的主要機(jī)制。

綜上所述，本研究結(jié)果表明產(chǎn)后抑郁腦內(nèi)代謝物濃度的改變，海馬及前額葉皮質(zhì)神經(jīng)元的損傷，膽堿物質(zhì)的代謝異常，以及谷氨酸能系統(tǒng)異常等病理過程。本研究通過采用MRS技術(shù)觀察參芪解郁方對(duì)PPD大鼠的干預(yù)作用，參芪解郁方作用特點(diǎn)為多靶點(diǎn)、多途徑、整體調(diào)節(jié)，能夠明顯改善產(chǎn)后抑郁癥狀，且其對(duì)于情緒調(diào)節(jié)環(huán)路神經(jīng)元的功能修復(fù)和保護(hù)的作用尤為突出，值得推廣應(yīng)用于臨床。

參考文獻(xiàn)

[1] OHARA M W， MCCABE J E. Postpartum Depression： Current Status and Future Directions[J]. Annu Rev Clin Psychol， 2013， 9： 379-407.

[2] WISNER K L， SIT D K， MCSHEA M C， et al. Onset timing， thoughts of self-harm， and diagnoses in postpartum women with screen positive depression findings[J]. JAMA Psychiatry， 2013， 70（5）： 490-498.

[3] 張? 媛.頤腦解郁方對(duì)腦出血后抑郁、焦慮、癡呆大鼠腦功能影像的干預(yù)作用研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2018.

[4] 王? 嬈.疏肝清熱健脾法對(duì)廣泛性焦慮模型大鼠腦磁共振波譜的干預(yù)作用研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2015.

[5] WANG Q， LI M， DU W， et al. The different effects of maternal separation on spatial learning and reversal learning in rats[J]. Behavioural Brain Research， 2015， 280： 16-23.

[6] 王? 丹，趙瑞珍，李小黎，等.補(bǔ)益心脾法對(duì)產(chǎn)后抑郁癥患者中醫(yī)證候積分以及雌、孕激素的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，38（11）：772-776.

[7] PORSOLT R D， BERTIN A， JALFRE M. Behavioral despair in mice： A primary screening test for antidepressants[J]. Archives Internationales De Pharmacodynamie et De Therapie， 1977， 229（2）： 327-336.

[8] MUIR J， LOPEZ J， BAGOT R C. Wiring the depressed brain： Optogenetic and chemogenetic circuit interrogation in animal models of depression[J]. Neuropsychopharmacology， 2019， 44（6）： 1013-1026.

[9] KUNIISHI H， ICHISAKA S， YAMAMOTO M， et al. Early deprivation increases high-leaning behavior， a novel anxiety-like behavior， in the open field test in rats[J]. Neuroscience Research， 2017， 123： 27-35.

[10] STURMAN O， GERMAIN P L， BOHACEK J. Exploratory rearing： A context- and stress-sensitive behavior recorded in the open-field test[J]. Stress， 2018， 21（5）： 443-452.

[11] WILLNER P， MUSCAT R， PAPP M. Chronic mild stress-induced anhedonia： A realistic animal model of depression[J]. Neuroscience & Biobehavioral Reviews， 1992， 16（4）： 525-534.

[12] DELBENDE C， TRANCHAND BUNEL D， TAROZZO G， et al. Effect of chronic treatment with the antidepressant tianeptine on the hypothalamo-pituitary-adrenal axis[J]. European Journal of Pharmacology， 1994， 251（2/3）： 245-251.

[13] MARCHETTE R C N， BICCA M A， SANTOS E C D S， et al. Distinctive stress sensitivity and anxiety-like behavior in female mice： Strain differences matter[J]. Neurobiology of Stress， 2018， 9： 55-63.

[14] TIAN L， PU J C， LIU Y Y， et al. Metabolomic analysis of animal models of depression[J]. Metabolic Brain Disease， 2020， 35（6）： 979-990.

[15] RASHIDI-RANJBAR N， RAJJI T K， KUMAR S， et al. Frontal-executive and corticolimbic structural brain circuitry in older people with remitted depression， mild cognitive impairment， Alzheimers dementia， and normal cognition[J]. Neuropsychopharmacology， 2020， 45（9）： 1567-1578.

[16] 李凈婭，章正祥，戚觀樹，等.母嬰分離方法制備產(chǎn)后抑郁大鼠模型的行為學(xué)及海馬病理變化的觀察[J].浙江臨床醫(yī)學(xué)，2018，20（6）：991-993.

[17] VON POSER TOIGO E， DIEHL L A， FERREIRA A G， et al. Maternal depression model： Long-lasting effects on the mother following separation from pups[J]. Neurochemical Research， 2012， 37（1）： 126-133.

[18] 趙瑞珍，楊歆科，唐啟盛，等.參芪解郁方對(duì)產(chǎn)后抑郁大鼠腦組織ER表達(dá)分布的干預(yù)研究[J].北京中醫(yī)藥，2013，32（3）：195-199.

[19] 曲? 淼，李凈婭，唐啟盛，等.Treg/Th17平衡對(duì)產(chǎn)后抑郁大鼠的影響及參芪解郁方的細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用[J].中華中醫(yī)藥雜志，2015，30（5）：1452-1458.

[20] QU M， TANG Q S， LI X L， et al. Shen-Qi-Jie-Yu-Fang has antidepressant effects in a rodent model of postpartum depression by regulating the immune organs and subsets of T lymphocytes[J]. Neuropsychiatric Disease and Treatment， 2015， 11： 1523-1540.

[21] LI Y， ZHANG C C， WEIDACKER K， et al. Investigation of anterior cingulate cortex gamma-aminobutyric acid and glutamate-

glutamine levels in obsessive-compulsive disorder using magnetic resonance spectroscopy[J]. BMC Psychiatry， 2019， 19（1）： 1-9.

[22] RASHIDI-RANJBAR N， MIRANDA D， BUTTERS M A， et al. Evidence for structural and functional alterations of frontal-executive and corticolimbic circuits in late-life depression and relationship to mild cognitive impairment and dementia： A systematic review[J]. Frontiers in Neuroscience， 2020， 14： 253.

[23] ERBAY M F， ZAYMAN E P， ERBAY L G， et al. Evaluation of transcranial magnetic stimulation efficiency in major depressive

disorder patients： A magnetic resonance spectroscopy study[J]. Psychiatry Investigation， 2019， 16（10）： 745-750.

[24] BARTNIK-OLSON B L， ALGER J R， BABIKIAN T， et al. The clinical utility of proton magnetic resonance spectroscopy in traumatic brain injury： Recommendations from the ENIGMA MRS working group[J]. Brain Imaging and Behavior， 2020： 1-12.

[25] TAE W S， KIM S S， LEE K U， et al. Progressive decrease of N-acetylaspartate to total creatine ratio in the pregenual anterior cingulate cortex in patients with major depressive disorder：

Longitudinal 1H-MR spectroscopy study[J]. Acta Radiologica， 2014， 55（5）： 594-603.

[26] 黃小燕，顧曉麗，沈小勇，等.產(chǎn)后抑郁癥患者海馬氫質(zhì)子磁共振波譜分析[J].醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志，2019，29（2）：184-186.

[27] ROSA C E， SOARES J C， FIGUEIREDO F P， et al. Glutamatergic and neural dysfunction in postpartum depression using magnetic resonance spectroscopy[J]. Psychiatry Research Neuroimaging， 2017， 265： 18-25.

[28] FAURHOLT-JEPSEN M， MISKOWIAK K W， FROST M， et al. Patient-evaluated cognitive function measured with smartphones and the association with objective cognitive function， perceived stress， quality of life and function capacity in patients with bipolar disorder[J]. International Journal of Bipolar Disorders， 2020， 8（1）： 31.

[29] KHAN A R， HANSEN B， DANLADI J， et al. Neurite atrophy in dorsal Hippocampus of rat indicates incomplete recovery of chronic mild stress induced depression[J]. NMR in Biomedicine， 2019， 32（3）： e4057. DOI：10.1002/nbm.4057.

[30] CONRAD C D， ORTIZ J B， JUDD J M. Chronic stress and hippocampal dendritic complexity： Methodological and functional considerations[J]. Physiology & Behavior， 2017， 178： 66-81.

[31] XIE Y H， ZHOU C N， LIANG X， et al. Anti-Lingo-1 antibody ameliorates spatial memory and synapse loss induced by chronic stress[J]. Journal of Comparative Neurology， 2020： 112765.

[32] CARRERA I， RICHTER H， MEIER D， et al. Regional metabolite concentrations in the brain of healthy dogs measured by use of short echo time， single voxel proton magnetic resonance spectroscopy at 3.0 Tesla[J]. American Journal of Veterinary Research， 2015， 76（2）： 129-141.

[33] 毛? 寧，劉泉源，王? 靜，等.青少年抑郁癥前額葉的磁共振波譜研究[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2014，30（15）：2394-2394.

[34] 郭志勇，譚西英，劉麗嬌，等.氟西汀對(duì)腦卒中后抑郁患者海馬磁共振氫質(zhì)子波譜影響的研究[J].中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2017，20（12）：11-14.

[35] CHEN G H， YANG D Y， YANG Y T， et al. Amino acid metabolic dysfunction revealed in the prefrontal cortex of a rat model of depression[J]. Behavioural Brain Research， 2015， 278： 286-292.

[36] AKIMOTO H， OSHIMA S， OHARA K， et al. High-resolution magic-angle spinning-1H-NMR spectroscopy-based metabolic profiling of hippocampal tissue in rats with depression-like symptoms[J]. Biological & Pharmaceutical Bulletin， 2017， 40（6）： 789-796.

[37] KIM S Y， CHOI C B， LEE H S， et al. Reversal of myo-inositol metabolic level in the left dorsolateral prefrontal cortex of rats exposed to forced swimming test following desipramine treatment： An in vivo localized 1H-MRS study at 4.7T[J]. Magnetic Resonance Imaging， 2010， 28（10）： 1461-1467.