丁雪珍
(濰坊職業(yè)學(xué)院農(nóng)林科技學(xué)院,山東 濰坊 262737)
長(zhǎng)壽花(Narcissus jonquilla L.)又名壽星花、伽藍(lán)花,為景天科伽藍(lán)菜屬多肉植物。多年生肉質(zhì)草本。株高10-30厘米。圓錐狀聚傘花序,花序長(zhǎng)7-10厘米。每株有花序5-7個(gè),花瓣4片,花朵色彩豐富。近年來(lái)長(zhǎng)壽花憑借植株小巧、株型緊湊、花色艷麗、花量大、花期長(zhǎng)、易養(yǎng)植、耐干旱等特點(diǎn)脫穎而出,成為人見(jiàn)人愛(ài)的室內(nèi)觀花小盆栽。
長(zhǎng)壽花通常采用播種、扦插和分株等繁殖,但由于市場(chǎng)銷(xiāo)量大的重瓣系列多為進(jìn)口品種,扦插繁殖退化嚴(yán)重,播種繁殖變異較大,遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了市場(chǎng)的需要。為保持重瓣長(zhǎng)壽花品種的優(yōu)良特性,同時(shí)提高其繁殖速率,為生產(chǎn)提供大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗,本試驗(yàn)對(duì)重瓣長(zhǎng)壽花進(jìn)行組織培養(yǎng),以找到一種適合重瓣長(zhǎng)壽花的快速繁殖方法。
試驗(yàn)用長(zhǎng)壽花品種為紫繽,取自濰坊職業(yè)學(xué)院農(nóng)林科技學(xué)院智能溫室。2017年11月從盆栽植株上選取幼嫩葉片和莖段作為外植體。
以MS為基本培養(yǎng)基,添加2%-3%的白砂糖和0.65%的瓊脂粉。根據(jù)各階段試驗(yàn)設(shè)計(jì)添加不同濃度的6-BA和NAA,pH值均為6.2-6.4。按照固體培養(yǎng)基常規(guī)制作方法進(jìn)行配制、分裝、高壓滅菌,滅菌完成后取出冷卻備用。
從盆栽植株上,選取健壯無(wú)病蟲(chóng)害的最上端第一片展開(kāi)葉片和幼嫩莖段(2~3cm)作為外植體。
將莖段剪去葉片,留下大約5mm長(zhǎng)的葉柄;葉片不用修剪。把處理好的莖段和葉片沖洗干凈,再放到5%的洗潔精溶液中浸洗約5min,最后用流水沖洗干凈,放到帶蓋的廣口瓶中備用。
超凈工作臺(tái)按照常規(guī)進(jìn)行消毒后,將洗凈的外植體放到超凈工作臺(tái)上,先用75%酒精消毒30-60s,再用有效氯濃度1%的次氯酸鈉溶液滅菌 10~20 min。最后,用無(wú)菌水沖洗3遍后,分別接種于不同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。
將外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)分化試驗(yàn)所用激素濃度和配比如下:6-BA選擇0.2mg/L,0.5mg/L兩個(gè)濃度梯度,NAA選擇0.1mg/L,0.2mg/L兩個(gè)濃度梯度,以不添加任何激素的空白MS培養(yǎng)基為對(duì)照,共5個(gè)處理,每個(gè)處理接種20瓶。接種后放到溫度25℃左右、光照時(shí)間12 h/d、光照強(qiáng)度1000~2000 lx的培養(yǎng)條件下,每天觀察記錄分化情況,30天統(tǒng)計(jì)分化率。
以初代培養(yǎng)分化出的新生小苗(或愈傷組織)為轉(zhuǎn)接材料,把它們接種到不同配方的MS培養(yǎng)基上,6-BA(mg/L)設(shè)0.1,0.5,1.0三個(gè)濃度梯度,NAA(mg/L)設(shè)0.1,0.2兩個(gè)濃度梯度。30天統(tǒng)計(jì)增殖情況。
將幼苗剪切成1.5~2.0cm長(zhǎng)的嫩莖,轉(zhuǎn)接至1/2MS培養(yǎng)基上,添加IBA濃度(mg/L)為0.1,0. 25,0.5 三個(gè)梯度。每天觀察記錄生根情況,15天統(tǒng)計(jì)生根率,從而篩選出最適生根培養(yǎng)基配方。
外植體在不同配方的初代培養(yǎng)基的分化情況見(jiàn)表1、表2。
表1 不同培養(yǎng)基配方對(duì)長(zhǎng)壽花葉片誘導(dǎo)分化的影響
表2 不同培養(yǎng)基配方對(duì)長(zhǎng)壽花莖段誘導(dǎo)分化的影響
1 0.2 0.1 55 18.2 2 0.2 0.2 65 38.5 3 0.5 0.1 80 62.5 4 0.5 0.2 95 84.2 5 0 0 0 0
由表1可知,不同濃度的激素配比,既影響到葉片的愈傷組織發(fā)生率,也影響到芽的分化率。6-BA0.5mg/L與NAA0.2mg/L組合下,長(zhǎng)壽花葉片分化率高,為最佳組合。
由表2可以看出,6-BA0.5mg/L與NAA0.1mg/L的激素組合,長(zhǎng)壽花莖段不僅分化率高,而且分化芽數(shù)量多,芽體大小適中,為莖段培養(yǎng)最佳初代培養(yǎng)基。
將初代培養(yǎng)得到的小芽轉(zhuǎn)入不同激素濃度的增殖培養(yǎng)基中,觀察繼代增殖情況,30天的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 不同濃度激素對(duì)長(zhǎng)壽花增殖培養(yǎng)的影響
由表3可知, 6-BA與NAA組合對(duì)長(zhǎng)壽花的增殖有明顯的促進(jìn)作用,但長(zhǎng)壽花對(duì)激素比較敏感,高濃度的6-BA雖能促進(jìn)增殖,但苗體細(xì)弱不利于后期的生根與移栽。所以,增殖培養(yǎng)適宜的激素組合為6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L或6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L。
長(zhǎng)壽花組培苗在生根培養(yǎng)基上,大約5天左右就開(kāi)始生根,同時(shí)苗體也開(kāi)始長(zhǎng)高,不同濃度IBA處理對(duì)生根的影響見(jiàn)表4。
表4 不同濃度IBA對(duì)長(zhǎng)壽花生根培養(yǎng)的影響
IBA(mg/L) 0.1 0.25 0.5根原基形成時(shí)間(天) 7 5 8生根率(%) 92 100 100根系生長(zhǎng)情況 較細(xì) 健壯基部有愈傷組織,生長(zhǎng)較慢
由表4可以看出,處理2(1/2MS +NAA0.25mg/L)不僅生根速度快,而且生根率高、根系生長(zhǎng)健壯,是最佳生根培養(yǎng)基。
試驗(yàn)結(jié)果表明,以重瓣長(zhǎng)壽花的葉片和莖段作為外植體進(jìn)行組培快繁,操作容易、速度快,便于推廣。
葉片誘導(dǎo)(圖1)、莖段誘導(dǎo)(圖2)、增殖培養(yǎng)(圖3)情況如下圖所示。
圖1
圖2
圖3