陸燦強(qiáng)，劉遠(yuǎn)華，舒鄧群*，臧一天，袁興云，喬 芳，溫凌嵩

（1.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，江西南昌 330045；2.山東省榮成市滕家畜牧獸醫(yī)站，山東榮成 264300）

高溫是影響畜禽生產(chǎn)主要的環(huán)境因子；成年蛋雞因其體表羽毛豐滿、汗腺不發(fā)達(dá)，夏季高溫常使其出現(xiàn)急性或慢性的應(yīng)激反應(yīng)[1-2]?，F(xiàn)代規(guī)模化蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)基本采用“風(fēng)機(jī)+水簾”系統(tǒng)降溫，但環(huán)境濕度會(huì)影響系統(tǒng)降溫效果[3]；且現(xiàn)代蛋雞場(chǎng)多為層疊或階梯式籠養(yǎng)模式，其舍內(nèi)垂直空間的溫差較大，有些雞舍在高溫期的溫度持續(xù)在30℃左右，在異常高溫期可能會(huì)超過32℃[4]。較高溫度（大于34℃）的熱應(yīng)激導(dǎo)致生產(chǎn)性能下降的同時(shí)，機(jī)體也會(huì)發(fā)生氧化應(yīng)激。Barrett 等[2]研究發(fā)現(xiàn)，24 周齡海蘭蛋雞在持續(xù)熱應(yīng)激（35℃ 6.5 h/d）4周后，產(chǎn)蛋性能和雞蛋品質(zhì)明顯下降，但其并未研究機(jī)體的抗氧化功能；徐紅蕊等[5]則發(fā)現(xiàn)，38 周齡海蘭褐蛋雞在（33±2）℃熱應(yīng)激（9 h/d）21 d 后，其血清抗抗氧化指標(biāo)顯著下降。上述這些報(bào)道的應(yīng)激溫度大都在32℃以上；然而在高溫季節(jié)，現(xiàn)代養(yǎng)殖場(chǎng)有些雞舍溫度長(zhǎng)期持續(xù)在30 ℃左右，會(huì)引起慢性熱應(yīng)激（溫度在28～32℃），進(jìn)而導(dǎo)致生產(chǎn)性能下降，但是否會(huì)引起蛋雞發(fā)生氧化應(yīng)激尚不明確。測(cè)定分析夏季慢性熱應(yīng)激蛋雞是否造成氧化應(yīng)激，將對(duì)提高蛋雞的群體健康度、生產(chǎn)性能以及動(dòng)物福利具有重要意義。

因此，本試驗(yàn)利用江西地區(qū)的氣候特征，測(cè)定不同環(huán)境溫度對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和血漿抗氧化功能等的影響，為慢性熱應(yīng)激對(duì)蛋雞抗氧化功能影響的研究和養(yǎng)殖生產(chǎn)提供參考。

1 材料方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)共選取120 只27 周齡、健康且體重相近的白來航蛋雞，分為高溫組和常溫組，每組5 個(gè)重復(fù)、每個(gè)重復(fù)12 只雞，預(yù)試期7 d、正試期45 d。其中，常溫組在5—6 月，舍內(nèi)白天平均溫度為19.8～26.5℃、相對(duì)濕度為66.1%±4.2%；高溫組飼養(yǎng)在夏季7—8 月，試驗(yàn)期間監(jiān)測(cè)舍內(nèi)白天平均溫度為29.8～35.7℃、相對(duì)濕度為68.3%±4.5%。2 組雞的品種、周齡相同，體重、健康狀況相似；飼養(yǎng)在不同季節(jié)同一棟封閉式雞舍內(nèi)，雙層籠養(yǎng)，每籠2 只雞，每只雞約占600 cm2籠面積，喂食和飲水條件均相同。

1.2 飼養(yǎng)管理 蛋雞分雙層雙籠飼養(yǎng)，按常規(guī)飼養(yǎng)管理進(jìn)行；蛋雞用料為南昌正大蛋雞全價(jià)配合飼料，飼料主要營(yíng)養(yǎng)成分見表1，每天07:00、18:30 給料，雞自由采食和飲水；每天恒定光照16 h；每周人工清糞1 次，每2 周清潔飲水系統(tǒng)、料槽并且在舍內(nèi)帶雞消毒1 次；試驗(yàn)前按常規(guī)程序免疫。

表1 蛋雞324 配合飼料的營(yíng)養(yǎng)成分 %

1.3 指標(biāo)測(cè)定與方法

1.3.1 生產(chǎn)性能測(cè)定 以重復(fù)為單位，每天08:00 收集剩料并準(zhǔn)確稱重，而后投入新的飼料；每天08:00、12:00、18:00 收集剩余水量，而后添加新制備的堿性富氫電解水；每天18:00 —19:00 收蛋；記錄平均日采食量、飲水量、產(chǎn)蛋重、產(chǎn)蛋數(shù)、不合格蛋數(shù)量（沙殼蛋、軟殼蛋、破殼蛋），統(tǒng)計(jì)各重復(fù)的產(chǎn)蛋率、平均蛋重、料蛋比、不合格蛋率。

1.3.2 蛋品質(zhì)測(cè)定 以重復(fù)為單位，每4 d 在每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)采 3 枚雞蛋用于常規(guī)蛋品質(zhì)測(cè)定。蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀（KQ-1A，北京天翔飛域儀器設(shè)備公司）測(cè)定蛋殼強(qiáng)度；蛋白高度測(cè)定儀（KQ-1A，北京天翔飛域儀器設(shè)備公司）測(cè)定蛋白高度、計(jì)算哈夫單位；使用游標(biāo)卡尺（上海梅內(nèi)特實(shí)業(yè)有限公司MΝT-150）測(cè)定雞蛋的縱徑、橫徑，千分尺（MODEL-1061，日本）測(cè)定蛋殼尖端、中端和鈍端3 個(gè)點(diǎn)的厚度，計(jì)算平均值；采用蛋黃分離器分離蛋黃，用電子天平測(cè)定（JJ223BC，常熟市雙杰儀器測(cè)試廠）蛋重和蛋黃。

1.3.3 血漿指標(biāo)測(cè)定 第46 天早晨，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取3 只蛋雞（已禁食12 h），翅靜脈采血（5 mL 肝素鈉抗凝真空管），靜置于冰盒15 min 后，3500 r/min 離心5 min，取上清液-20℃保存。采用鉬酸銨法測(cè)定肌酸激酶（Creatine Kinase，CK）、磷酸苯二鈉法測(cè)定堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，AKP）、丙酮酸法測(cè)定乳酸脫氫酶（Actate Dehydrogenase，LDH）、賴氏法測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine Aminotransferase，ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate Aminotransferase，AST）；羥胺法測(cè)總超氧化物歧化酶（Total Superoxide Dismutase，T-SOD）、GSH 法測(cè)谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione Peroxidase，GSH-Px）、TBA 法測(cè)丙二醛（Malondial dehyde，MDA）、鉬酸銨法測(cè)過氧化氫酶（Catalase，CAT）、還原鐵法測(cè)總抗氧化能力（Total Antioxidative Capacity，T-AOC）。所用的試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示；P＜0.05 表示差異顯著，P＞0.05 表示差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 慢性熱應(yīng)激對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響 由表2 可知，飼養(yǎng)45 d 后，與常溫組相比，高溫組采食量和產(chǎn)蛋率均下降（P＜0.05），平均蛋重有下降趨勢(shì)（P＞0.05）；料蛋比、不合格蛋率和飲水量均升高（P＜0.05）。

表2 慢性熱應(yīng)激對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 慢性熱應(yīng)激對(duì)蛋品質(zhì)的影響 由表3 可知，飼養(yǎng)45 d后，與常溫組相比，高溫組蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度分別下降6.98%、20.09%（P＜0.05）；2 組的蛋型指數(shù)、蛋黃重量蛋白高度、哈弗單位差異不顯著。

表3 慢性熱應(yīng)激對(duì)雞蛋品質(zhì)的影響

2.3 慢性熱應(yīng)激對(duì)蛋雞血漿酶活性的影響 由表4 可知，飼養(yǎng)45 d 后，與常溫組對(duì)比，高溫組CK 活性上升（P＜0.05），AKP 活性下降（P＞0.05）；2 組的LDH 活性水平差異不顯著；高溫組ALT、AST 活性上升（P＜0.05）。

表4 慢性熱應(yīng)激對(duì)蛋雞血漿酶活性的影響

2.4 慢性熱應(yīng)激對(duì)蛋雞血清抗氧化功能的影響 由圖1 可知，飼養(yǎng)45 d 后，與常溫組對(duì)比，高溫組T-SOD活性和T-AOC 水平下降（P＜0.05）；GSH-Px 和CAT活性有下降趨勢(shì)（P＞0.05）；MDA 濃度上升18.02%（P＜0.05）。

圖1 慢性熱應(yīng)激對(duì)蛋雞血漿抗氧化功能的影響

3 討論

3.1 慢性熱應(yīng)激對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響 熱應(yīng)激引起機(jī)體能量代謝和體溫平衡的改變；動(dòng)物出于自我保護(hù)，通過神經(jīng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)調(diào)節(jié)采食行為，減少產(chǎn)熱、增加散熱，以利于機(jī)體維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)[6]。本試驗(yàn)中高溫組的采食量下降、飲水量上升，趨勢(shì)與Aswathi 等[7]的報(bào)道一致，該研究指出，熱應(yīng)激蛋雞降低能量攝入以減少產(chǎn)熱，增加飲水減少體內(nèi)積熱。類似的結(jié)果也出現(xiàn)在Abdelsamie 等[8]的報(bào)道。熱應(yīng)激引起蛋雞產(chǎn)蛋性能下降，主要包括2 方面原因；一是采食量下降和腸道消化吸收功能減弱，引起營(yíng)養(yǎng)元素?cái)z入不足，二是環(huán)境高溫引起生殖激素變化甚至是卵巢的損傷。Barrett 等[2]研究發(fā)現(xiàn)，熱應(yīng)激引起蛋雞采食量下降的同時(shí)，產(chǎn)蛋率（4.99%）以及血糖（5.63%）和鈣離子（9.22%）濃度均有明顯下降。熱應(yīng)激也會(huì)造成蛋雞血清中的卵泡刺激素、黃體生成素、雌二醇等指標(biāo)明顯下降[9-10]。另外，Li 等[11]報(bào)道，32 周齡海蘭灰蛋雞遭受5 d 高溫應(yīng)激（35℃，60% RH）后產(chǎn)蛋率顯著下降，并觀察到卵泡中MDA 明顯上升；卵泡細(xì)胞凋亡率上升，該研究認(rèn)為，熱應(yīng)激引起蛋雞卵巢組織的氧化應(yīng)激、卵泡損傷進(jìn)而降低蛋雞的產(chǎn)蛋率。本試驗(yàn)中，高溫組的產(chǎn)蛋率顯著下降，不合格蛋率和料蛋比顯著上升，該趨勢(shì)與徐紅蕊等[5]、魯鑫濤等[12]的報(bào)道相似。

3.2 慢性熱應(yīng)激對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、特別是鈣和磷等物質(zhì)的吸收和利用直接影響到雞蛋品質(zhì)[13]。環(huán)境高溫影響蛋雞的消化與吸收功能，胃腸道內(nèi)的消化酶如淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶以及脂肪酶等分泌和活力不同程度下降[14]，鈣、磷等營(yíng)養(yǎng)元素的吸收和利用效率下降[15]。刁華杰等[16]報(bào)道，循環(huán)高溫（29～35℃）引起蛋雞鈣、磷的吸收率顯著下降。熱應(yīng)激可直接影響到蛋殼腺的收縮功能和蛋殼的形成，Ebeid 等[17]報(bào)道，熱應(yīng)激（32℃）引起白來航蛋雞蛋殼腺的鈣結(jié)合蛋白calbindin-D28k 表達(dá)顯著下降，導(dǎo)致蛋殼質(zhì)量下降；類似的結(jié)果也出現(xiàn)在Bahadoran 等[18]的報(bào)道中。本試驗(yàn)中，高溫組蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度顯著降低，蛋黃重、蛋白高度和哈弗單位無顯著差異。這與Kim 等[19]研究報(bào)道相似，其研究指出，熱應(yīng)激（32℃，50% RH，42 d）蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度顯著減低，并且觀察到血液中鈣、磷離子濃度下降，但哈夫單位無顯著變化。而Barrett 等[2]則觀察到，慢性熱應(yīng)激（35℃，6.5 h/d，28 d）引起哈夫單位、蛋殼重、蛋殼厚度均顯著下降，但蛋黃相對(duì)重?zé)o顯著變化?？傊h(huán)境高溫會(huì)影響雞蛋品質(zhì)，其危害程度會(huì)因應(yīng)激溫度高低和持續(xù)時(shí)間以及雞的品種和周齡等情況而異；與雞蛋內(nèi)容物的品質(zhì)相比，熱應(yīng)激對(duì)蛋殼質(zhì)量的影響更為明顯，蛋殼質(zhì)量下降增加了雞蛋破損率，而雞蛋破損率直接導(dǎo)致蛋雞生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益下降。

3.3 慢性熱應(yīng)激對(duì)蛋雞血漿酶活性的影響 血液生化指標(biāo)能夠?qū)崟r(shí)、準(zhǔn)確反映機(jī)體生理狀態(tài)。高溫應(yīng)激降低蛋雞采食，組織細(xì)胞引起供能不足以及外源性抗氧化劑的持續(xù)消耗會(huì)造成抗氧化功能下降，最終引起細(xì)胞膜損傷；導(dǎo)致細(xì)胞或線粒體內(nèi)部的酶類物質(zhì)會(huì)釋放到組織液中，引起血液指標(biāo)的變化[20]。CK 參與到細(xì)胞能量代謝，高溫期間，機(jī)體代謝增加，而高溫應(yīng)激降低蛋雞采食，骨骼肌因供能不足而引起細(xì)胞損傷，骨骼肌中的CK 會(huì)釋放到血液循環(huán)中，因此，熱應(yīng)激蛋雞的血液常能觀察到CK 的濃度升高現(xiàn)象；AKP 在核酸、蛋白質(zhì)和其他底物中的磷酸基團(tuán)水解過程中起到重要的作用，研究報(bào)道，熱應(yīng)激引起蛋雞體血液AKP 活性降低[21]。LDH 催化乳酸和丙酮酸之間的互逆反應(yīng)，其活性水平的升高可能與機(jī)體無氧呼吸增強(qiáng)有關(guān)。研究報(bào)道，環(huán)境高溫導(dǎo)致雞的骨骼肌和血漿中LDH 出現(xiàn)較大幅度的提高[22]。AST的升高可能與機(jī)體代謝增強(qiáng)有關(guān)；高溫環(huán)境下，蛋雞血液循環(huán)加快、因而心肌細(xì)胞的代謝也會(huì)增強(qiáng)、甚至?xí)霈F(xiàn)心肌疲勞性損傷。研究表明，熱應(yīng)激時(shí)骨骼肌和心肌ATP 的產(chǎn)生和消耗會(huì)有較大幅度的增加；熱應(yīng)激動(dòng)物采食量減少，即能量攝入減少，導(dǎo)致骨骼肌和心肌的能量供應(yīng)不足，引起細(xì)胞線粒體受損，使得AST 進(jìn)入血液而導(dǎo)致濃度上升[23]。ALT 以肝臟含量最高；熱應(yīng)激家禽血清中ALT 活性升高，可能與熱應(yīng)激引起氧化應(yīng)激導(dǎo)致肝細(xì)胞受損有關(guān)[21]。郝生燕等[24]研究報(bào)道，熱應(yīng)激環(huán)境（溫濕指數(shù)＞72，84 d）引起蛋雞血清AKP 下降，ALT、CK、AST 升高；類似的結(jié)果也出現(xiàn)在Νawab 等[25]的報(bào)道中；本試驗(yàn)也觀察到高溫組CK、ALT、AST 活性顯著上升，AKP 活性顯著下降。

3.4 慢性熱應(yīng)激對(duì)蛋雞血漿抗氧化功能的影響 蛋雞的抗氧化防御系統(tǒng)主要包括兩部分，一是以維生素為主的外源性非酶類抗氧化物質(zhì)（維生素A、類胡蘿卜素和維生素C 等），二是由微量元素（硒、銅、鋅、鐵）參與合成的抗氧化酶（SOD、GSH-Px 和CAT）[20]。夏季高溫、尤其是異常高溫和持續(xù)高溫常會(huì)引起畜禽機(jī)體代謝增強(qiáng)，發(fā)生急性或慢性熱應(yīng)激反應(yīng)；一般而言，急性熱應(yīng)激狀態(tài)下，畜禽機(jī)體內(nèi)突然升高的ROS 可刺激抗氧化酶系統(tǒng)，使得GSH-Px、SOD 和CAT 活性升高[26]；然而，夏季高溫造成長(zhǎng)期的慢性熱應(yīng)激則會(huì)大量的消耗機(jī)體內(nèi)的抗氧化劑，打破機(jī)體氧化-抗氧化之間的平衡，誘發(fā)氧化應(yīng)激[20]。本試驗(yàn)中高溫組T-AOC、T-SOD 顯著下降，GSH-Px、CAT 有下降趨勢(shì)MDA 顯著升高。該結(jié)果與徐紅蕊等[5]報(bào)道相似，即經(jīng)（33±2）℃循環(huán)高溫應(yīng)激后，38 周齡海褐蘭蛋雞血清SOD 顯著下降、MDA 顯著升高；類似的結(jié)果也出現(xiàn)在刁華杰[27]、魯鑫濤等[12]的報(bào)道。這證實(shí)了夏季環(huán)境溫度在（29.8～35.7）℃、相對(duì)濕度在68.3%±4.5%會(huì)引起蛋雞熱應(yīng)激，并伴隨著氧化損傷。

4 小 結(jié)

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，高溫組采食量（10.98%）、產(chǎn)蛋率（8.91%）顯著下降，料蛋比（8.82%）、不合格蛋率（31.14%）顯著上升；夏季高溫影響蛋殼質(zhì)量，蛋殼厚度（6.98%）和蛋殼強(qiáng)度（20.09%）顯著下降；血漿T-SOD 和T-AOC 活性顯著下降，MDA 值上升18.02%。夏季白天溫度在（29.8～35.7）℃、相對(duì)濕度在（68.3±4.5）%的飼養(yǎng)環(huán)境會(huì)造成蛋雞產(chǎn)生慢性熱應(yīng)激反應(yīng)，并引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生氧化應(yīng)激。