劉家杰 肖澤林 莊仕龍

目前肺癌發(fā)病率與病死率占全球惡性腫瘤發(fā)病率和病死率的第1 位,而且隨著人們生活水平的提高,肺癌患者年齡日趨年輕化,因此該疾病已成為廣大醫(yī)生及患者較為重視的問(wèn)題。通?？煞譃榉切〖?xì)胞肺癌和小細(xì)胞肺癌2 種類(lèi)型,但由于肺泡沒(méi)有感覺(jué)神經(jīng),無(wú)法感受到疼痛,因此早期肺癌沒(méi)有較典型的臨床癥狀,多數(shù)患者難以及時(shí)確診,當(dāng)出現(xiàn)咳嗽咳痰、咳血、胸痛時(shí)可能已發(fā)展到晚期［1］。肺結(jié)節(jié)作為肺癌早期主要臨床表現(xiàn)之一,一般可通過(guò)穿刺病理活檢進(jìn)行確診,但對(duì)于較小的肺結(jié)節(jié),其診斷率會(huì)受到實(shí)質(zhì)成分、結(jié)節(jié)結(jié)構(gòu)、技術(shù)要求等因素的影響。據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)顯示,高分辨CT 三維重建聯(lián)合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A基因甲基化檢測(cè)在診斷早期肺結(jié)節(jié)與早期肺癌中的應(yīng)用價(jià)值較好,尤其是較小的單發(fā)性肺結(jié)節(jié)的檢出率較高,能減少早期肺癌的漏診及誤診率［2,3］?；诖?本研究將本院60 例小細(xì)胞肺癌患者及100 例良性肺結(jié)節(jié)患者作為觀察對(duì)象,進(jìn)一步分析高分辨CT 三維重建聯(lián)合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè)的診斷優(yōu)勢(shì),以期為早期肺癌臨床診斷提供科學(xué)的理論依據(jù)與實(shí)踐依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2019 年1 月～2020 年12 月收治的160 例肺結(jié)節(jié)患者為研究對(duì)象,后期經(jīng)CT 引導(dǎo)下經(jīng)皮肺部病理穿刺活檢確診的小細(xì)胞肺癌(肺惡性腫瘤直徑≤3 cm)患者60 例,良性肺結(jié)節(jié)患者100 例。小細(xì)胞肺癌患者男43 例,女17 例；年齡30～65 歲,平均年齡(52.76±11.53)歲。良性肺結(jié)節(jié)患者男69 例,女31 例；年齡25～68 歲,平均年齡(51.89±12.68)歲。兩種疾病患者的一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①均符合肺結(jié)節(jié)相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］,且臨床資料完整詳實(shí)；②視覺(jué)、聽(tīng)覺(jué)等功能正常；③患者及其家屬對(duì)本研究知情同意。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①非肺部腫瘤患者；②嚴(yán)重傳染病患者；③依從性較差的患者；④?chē)?yán)重精神障礙患者。

1.3 方法 所有患者先后進(jìn)行高分辨CT 聯(lián)合肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)檢測(cè),肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A基因甲基化檢測(cè),高分辨CT 三維重建聯(lián)合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè)。

1.3.1 高分辨CT 聯(lián)合肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)檢測(cè) 高分辨螺旋CT 常規(guī)胸部掃描,參數(shù)分別為層距10 mm、層厚10 mm、矩陣512×512、螺距1.0～1.1 mmm、時(shí)間1 s、電流140 mA、電壓120 kV,在標(biāo)準(zhǔn)圖像重建算法的基礎(chǔ)上對(duì)患者病灶區(qū)域進(jìn)行高分辨CT 掃描,設(shè)置層距1.0～3.0 mm,層厚1.0～1.5 mm,掃描視野為24～35 cm,高分辨精細(xì)算法條件為電流170 mA、電壓140 kV；然后于局部麻醉狀態(tài)下根據(jù)影像學(xué)定位將支氣管鏡放置于患者病灶部位,應(yīng)用生理鹽水反復(fù)灌洗,回收灌洗液50 ml,除去雜質(zhì)與黏液后1500 r/min 離心10 min,應(yīng)用BP-MI1640 培養(yǎng)液與10%小牛血清培養(yǎng)液于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h 后采集細(xì)胞,并應(yīng)用抗CD3+、抗CD4+、抗CD8+、單克隆抗體染色后對(duì)T 淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.2 肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè) 取患者肺泡灌洗液10 ml,行10000 r/min離心5 min,除去上清液,將剩余沉淀用于提取DNA,提取DNA 結(jié)束后應(yīng)用亞硫酸鹽進(jìn)行修飾；應(yīng)用Primer 5.0 設(shè)計(jì)引物,SHOX2 的正向引物序列為：5’-GGTGTTGTGTCGTATAGGGAGT-3’,反向引物序列為：5’-TCCGCCTCCTACCTTCTAAC-3’；RASSF1A 的正向引物序列為：5’-GAGGGAAGGAAGGGTAAGG-3’,反向引物序列為：5’-GAGGGAAGGAAGGGTAAGG-3’。測(cè)序聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)體系(40 μl)：將修飾后的DNA 5 μl,上游引物(10 μmol/L)0.8 μl,下游引物(10 μmol/L)0.8 μl,2×Taq 緩沖液(含有Taq 酶與dNTPs)加水13.4 μl；PCR 擴(kuò)增：PCR 預(yù)變性95℃ 10 min,循環(huán)95 ℃ 30 s,58 ℃ 35 s,72 ℃ 30 s,45 個(gè) 循環(huán)。延 伸72℃ 8 min,上述PCR 產(chǎn)物經(jīng)檢測(cè)合格后送生物工程有限公司測(cè)序。

1.3.3 高分辨CT 三維重建 行高分辨CT 常規(guī)掃描后,將二維圖像傳入工作站,應(yīng)用Hitachi 3D Display 軟件進(jìn)行三維容積處理：確定上閾值為-250～350 Hu 和下閾值為-650～800 Hu,劃出興趣區(qū),選擇參與重建的斷層圖像(參與重建的斷層圖像應(yīng)當(dāng)是同一掃描序列的連續(xù)層面,包括患者病灶每一個(gè)病變的層面與上下2～4 層),三維圖像顯示只有根據(jù)具體需要行進(jìn)一步調(diào)整,最大程度地顯示病灶處病變狀況及病灶周?chē)夤芘c肺血管狀況,三維圖像顯示之后對(duì)圖像的亮度和對(duì)比度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié),使其達(dá)到最佳的視覺(jué)效果。同時(shí)對(duì)病灶進(jìn)行旋轉(zhuǎn)、切割,進(jìn)一步觀察病灶內(nèi)部的邊緣、結(jié)構(gòu)以及相鄰的血管及支氣管的狀況。

1.4 觀察指標(biāo) 以CT 引導(dǎo)下經(jīng)皮肺部病理穿刺活檢為金標(biāo)準(zhǔn),對(duì)比三種檢測(cè)方式診斷早期肺結(jié)節(jié)的效能。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

高分辨CT 三維重建聯(lián)合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè)的靈敏度、準(zhǔn)確率高于高分辨CT 聯(lián)合肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)、肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè),高分辨CT 三維重建聯(lián)合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè)的特異度高于高分辨CT 聯(lián)合肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)檢測(cè),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)。高分辨CT 聯(lián)合肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)、肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè)的靈敏度、準(zhǔn)確率比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè)、高分辨CT 三維重建聯(lián)合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè)的特異度比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1,表2。

表1 不同檢測(cè)方式的診斷結(jié)果(n)

表2 不同檢測(cè)方式的靈敏度、特異度及準(zhǔn)確率比較(%)

3 討論

據(jù)臨床數(shù)據(jù)顯示,肺癌患者5 年存活率<12.00%,若早期及時(shí)給予準(zhǔn)確診斷及治療措施,其存活率可提升至70.00%,因此近幾年肺小結(jié)節(jié)與早期肺癌的診斷備受臨床醫(yī)師關(guān)注,隨著我國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù)的不斷發(fā)展以及CT 在臨床的廣泛應(yīng)用,加上高分辨CT 三維重建技術(shù)能更細(xì)膩地顯示出肺結(jié)節(jié)征象,從多方位角度對(duì)患者病變部位進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析,從而使得肺結(jié)節(jié)的檢出率愈來(lái)愈高,即便如此CT 檢測(cè)在早期肺癌診斷中依然存在某些不足之處,就算是高分辨CT 在圖像顯示中也僅見(jiàn)縱隔創(chuàng)傷病灶結(jié)節(jié)中的實(shí)性成分,在一定程度上會(huì)直接影響肺結(jié)節(jié)診斷準(zhǔn)確率［5］。此外,林列坤等［6］的研究結(jié)果顯示,等電子纖維支氣管鏡取樣后的肺泡灌洗液進(jìn)行基因甲基化檢測(cè)能夠減少惡性腫瘤患者的機(jī)體損傷,不僅能改善肺癌患者早期診斷準(zhǔn)確率,還能進(jìn)一步提高其生存率。但迄今為止,鮮有高分辨CT 三維重建聯(lián)合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè)診斷分辨早期肺結(jié)節(jié)與早期肺癌相關(guān)的研究,因此本研究將高分辨CT 聯(lián)合肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)與高分辨CT 三維重建聯(lián)合肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè)用于早期肺結(jié)節(jié)診斷中。

本研究診斷結(jié)果顯示,高分辨CT 三維重建聯(lián)合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè)的靈敏度96.67%、準(zhǔn)確率96.25%高于高分辨CT 聯(lián)合肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)(靈敏度83.33%、準(zhǔn)確率84.38%)、肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè)(靈敏度86.67%、準(zhǔn)確率88.75%),高分辨CT 三維重建聯(lián)合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè)的特異度96.00%高于高分辨CT 聯(lián)合肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的85.00%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)。表明高分辨CT 三維重建聯(lián)合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè)方式在早期肺結(jié)節(jié)中的診斷效能更高,分析原因可能是首先通過(guò)多方位多層面的高分辨CT 三維重建技術(shù)顯示肺部結(jié)節(jié)征象,清楚地顯示支氣管、胸膜、血管等與肺部結(jié)節(jié)的關(guān)系,以便于早期惡性結(jié)節(jié)的診斷［7］；而肺泡灌洗液檢測(cè)是指通過(guò)微生物學(xué)及化學(xué)方法對(duì)肺泡灌洗液進(jìn)行分析,利用纖維支氣管鏡對(duì)支氣管以下肺段和亞肺段進(jìn)行灌洗后,采集肺泡表面襯液可獲得肺泡灌洗液,對(duì)其進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查；而DNA 甲基化分子標(biāo)志物SHOX2 對(duì)小細(xì)胞肺癌和肺鱗癌的診斷敏感性較高；RASSF1A 在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中有著重要的作用,在肺癌中有著較高的表達(dá),尤其與肺腺癌的發(fā)生有著密切的關(guān)聯(lián)性,因此SHOX2 和RASSF1A 基因亦可作為早期肺結(jié)節(jié)鑒別條件之一,這與田祺等［8］的研究結(jié)果具有一致性。

綜上所述,高分辨CT 三維重建聯(lián)合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(cè)用于早期肺結(jié)節(jié)診斷中,可有效提高其準(zhǔn)確率,以減少誤診率和漏診率,值得推廣。