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        灰霉病菌對4種常用殺菌劑的抗藥性監(jiān)測

        2021-07-16 09:50:12周明洋
        農(nóng)村科學(xué)實驗 2021年10期

        周明洋

        (南京市高淳區(qū)固城街道農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心,江蘇 南京 211300)

        1.前言

        灰霉病是由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的一種全球范圍的真菌病害?;移咸焰呖梢郧秩?35種蔬菜、果樹以及其他經(jīng)濟作物(李保聚,1998),一旦發(fā)病就會引起大量減產(chǎn),甚至絕收,給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成重大危害(陳鳳平等,2010)。灰葡萄孢的菌核可直接萌發(fā)產(chǎn)生菌絲體、分生孢子梗及分生孢子,分生孢子成熟后脫落,借氣流、雨水或露珠及農(nóng)事操作進行傳播(李保聚等,1998)。在18~23℃和相對濕度持續(xù)90%以上的多濕、弱光條件下,農(nóng)作物最易發(fā)病;溫度低于15℃或高于25℃時,則發(fā)病明顯減輕;溫度高于30℃時,基本不發(fā)病。另外,在田間分生孢子可多次再侵染(Meyer,2008)。

        灰霉病的防治一直是個重要問題,目前生產(chǎn)上主要通過物理防治、化學(xué)防治和生物防治等幾種方法,其中最有效的方法為化學(xué)防治(張彩鳳等,2013)?;瘜W(xué)防治常用藥劑主要有苯并咪唑類、二甲酰亞胺類、氨基甲酸酯類和抗菌素類四大類。而由于灰霉病菌具有繁殖速度快、遺傳變異大和適合度高等特點,連續(xù)長期使用單一藥劑容易產(chǎn)生抗藥性。目前,灰葡萄孢已對苯并咪唑類、二甲酰亞胺類、氨基甲酸酯類等藥劑產(chǎn)生抗藥性。其抗藥性機理主要為毒劑滲透性減弱、脫毒作用增強與毒性代謝產(chǎn)物轉(zhuǎn)換作用的減弱、靶標位點敏感性降低等(于永學(xué)等,2009)。由于灰霉病菌抗藥性在生產(chǎn)上造成了一系列問題,因此,我們需要通過進一步的研究來深入了解灰霉病菌的抗藥性。為明確不同地區(qū)不同作物上灰霉病菌的抗藥性情況,本研究主要對采自蘇州、南通、揚州、上海、嘉善、寧波等地的番茄、萵苣、草莓、瓠瓜、西瓜、黃瓜等不同作物上的153種灰霉菌菌株的抗藥性進行了檢測。

        2.材料與方法

        2.1 菌株的采集

        2020 年,在蘇州、揚州、南通、上海和浙江等地的塑料大棚內(nèi),采集番茄、萵苣、草莓、黃瓜、瓠瓜和西瓜等灰霉病病株,共分離得灰霉菌株153個(表1)。

        表1 分離自不同地區(qū)的灰霉菌株

        2.2 供試藥劑

        多菌靈:95% 多菌靈原藥;速克靈:98% 速克靈原藥;

        嘧霉胺:98% 嘧霉胺原藥;咯菌腈:97.1% 咯菌腈原藥。

        2.3 培養(yǎng)基

        PDA:馬鈴薯洗凈去皮,稱取200g馬鈴薯切成小塊,加水煮爛,用八層紗布過濾。繼續(xù)加熱,再加入15~20g瓊脂,攪拌混勻,待瓊脂溶解完后,加入10 g葡萄糖。攪拌均勻,稍冷卻后再加水定容至1000mL。分裝于錐形瓶中,加塞、包扎,121℃,滅菌20 min后取出,冷卻后貯藏備用。

        LSP:10 g Glucose,1.5 g K2HPO4,2.0 g KH2PO4,1g(NH4)2SO4,0.5 g MgSO4?7H2O,16 g Agar,1000 ml H2O。

        2.4 含藥平板的制備

        95%多菌靈原藥用0.1 mol/L HCL水溶液配制成1000 μg/mL 母液;98%速克靈原藥用丙酮配置成10000 μg/mL 母液;98%嘧霉胺原藥用甲醇配制成1000 μg/mL 母液;97.1% 的咯菌腈原藥用甲醇配制成1000 μg/mL 母液。各母液在4 ℃冰箱內(nèi)貯藏,使用時將多菌靈、速克靈和咯菌腈分別配制成1μg/mL、5μg/mL和0.5μg/mL 的含藥PDA平板;將嘧霉胺配制成1μg/mL 的含藥LSP平板,然后用以進行抗藥性測定。

        2.5 抗藥性監(jiān)測

        采用區(qū)分劑量法。將在1μg/mL多菌靈含藥平板、5μg/mL速克靈、0.5μg/mL咯菌腈和1μg/mL的嘧霉胺含藥平板上不能正常生長的菌株定義為敏感菌株,能在平板上生長的菌株定義為抗性菌株。將待測菌株在PDA平板上25 ℃培養(yǎng)96 h 后,將帶菌平板切成小塊,然后用接種針將其接于含藥平板上。25 ℃黑暗培養(yǎng)72 h 后,觀察菌絲生長情況,統(tǒng)計各地區(qū)敏感和抗性菌株的頻率,每處理重復(fù)3次。

        抗性頻率(%)=(抗性菌株數(shù)/測定總菌株數(shù))×100%。

        3.結(jié)果與分析

        3.1 不同地區(qū)來源灰霉病菌對幾種藥劑的抗性頻率

        由表2可知,供試的153個菌株中,對嘧霉胺表現(xiàn)抗性的菌株有98個,占總數(shù)的64.05%??梢钥闯?,在揚州和南通地區(qū),灰霉病菌對嘧霉胺的抗性頻率在50%以下,而其它地區(qū)抗性頻率均較高,特別是在上海地區(qū),高達97.61%。因此,在上海、嘉善等地區(qū),嘧霉胺已不再適宜用于蔬菜灰霉病的防治。

        表2 不同地區(qū)來源菌株對嘧霉胺的抗性頻率

        平均 98 153 64.05

        由表3可知,供試153個菌株中,對多菌靈表現(xiàn)抗性的菌株有104個,抗性頻率為67.97%。可以看出,灰霉病菌對多菌靈的抗性頻率均較高,但揚州地區(qū)僅為8.33%,說明多菌靈在揚州地區(qū)仍可作為防治蔬菜灰霉病的主要藥劑。

        表3 不同地區(qū)來源菌株對多菌靈的抗性頻率

        由表4可知,供試153個菌株中,對速克靈表現(xiàn)抗性的菌株有98個,抗性頻率為64.05%。可以看出,在揚州和南通地區(qū),灰霉病菌對速克靈的抗性頻率在50%以下,而其它地區(qū)抗性頻率均較高,特別是在上海地區(qū),高達95.23%。因此,在上海、嘉善等地區(qū),速克靈已不再適宜用于蔬菜灰霉病的防治。

        表4 不同地區(qū)來源菌株對速克靈的抗性頻率

        由表5可知,所有供試的153個菌株均對咯菌腈敏感,未能檢測到抗性菌株,因此,咯菌腈可認為是目前生產(chǎn)上各地防治灰霉病的首選藥劑。

        表5 不同地區(qū)來源菌株對咯菌腈的抗性頻率

        3.2 不同寄主來源灰霉病菌對幾種藥劑的抗性頻率

        由表6可知,供試153個菌株中,對嘧霉胺表現(xiàn)抗性的菌株有98個,抗性頻率為64.05%??梢钥闯?,來源于西瓜和萵苣的灰霉病菌對嘧霉胺的抗性頻率較低,而其它來源菌株抗性頻率較高,特別是源自瓠瓜和黃瓜的灰霉菌株全部對嘧霉胺表現(xiàn)抗性,這可能是因為在西瓜和萵苣上嘧霉胺使用較少,而在瓠瓜和黃瓜上施用較多的緣故。

        表6 不同寄主來源菌株對嘧霉胺的抗性頻率

        由表7可知,供試153個菌株中,對多菌靈表現(xiàn)抗性的菌株有104個,抗性頻率為67.97%。可以看出,來源于西瓜和萵苣的灰霉病菌對多菌靈的抗性頻率為0,而其他來源菌株抗性頻率較高,特別是源自瓠瓜和黃瓜的灰霉菌株全部對多菌靈表現(xiàn)抗性,這可能是因為在西瓜和萵苣上多菌靈使用較少,而在瓠瓜和黃瓜上施用較多的緣故。

        表7 不同寄主來源菌株對多菌靈的抗性頻率

        由表8可知,供試153個菌株中,對速克靈表現(xiàn)抗性的菌株有98個,抗性頻率為64.05%。可以看出,來源于西瓜和萵苣的灰霉病菌對速克靈的抗性頻率為0,而其他來源菌株抗性頻率較高,特別是源自瓠瓜和黃瓜的灰霉菌株全部對速克靈表現(xiàn)抗性,這可能是因為在西瓜和萵苣上多菌靈使用較少,而在瓠瓜和黃瓜上施用較多的緣故。

        表8 不同寄主來源菌株對速克靈的抗性頻率

        黃瓜 3 3 100平均 98 153 64.05

        由表9可知,所有供試的153個菌株均對咯菌腈敏感,未能檢測到抗性菌株,因此,咯菌腈可認為是目前蔬菜生產(chǎn)上防治灰霉病的首選藥劑。

        表9 不同寄主來源菌株對咯菌腈的抗性頻率

        4.討論

        長期以來,灰霉菌對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了極其重大的危害,主要通過化學(xué)防治的方法進行防治,主要使用的化學(xué)藥劑有苯胺基嘧啶類、苯并咪唑類、二甲酰亞胺類以及吡咯類等。但是,近年來國內(nèi)外均相繼報道了田間出現(xiàn)灰霉病菌對上述化學(xué)藥劑產(chǎn)生抗性的菌株(王凌云等,2012)。本研究檢測了采自不同地區(qū)、不同寄主上的153種灰霉菌菌株對四種藥劑的抗藥性情況。

        研究結(jié)果表明,灰霉病菌對嘧霉胺、多菌靈、速克靈抗藥性較為嚴重,均達到了60%以上,處于高抗水平;但咯菌腈對灰霉菌仍有較好的防治效果,這與之前國內(nèi)報道的灰霉菌對幾種藥劑的抗藥性情況基本相同(潘以樓等,2013)。采自不同地區(qū)以及不同寄主上的灰霉菌對上述幾種藥劑的抗性水平也有所不同,縱觀檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),在所檢測的不同地區(qū)中,除揚州外,其他各地的灰霉菌對嘧霉胺、多菌靈、速克靈均產(chǎn)生了非常普遍的抗藥性;對與不同寄主來說,本研究采集樣本數(shù)量較多的番茄和草莓上的灰霉菌對上述藥劑也產(chǎn)生了嚴重的抗藥性。分析原因可能是由于在某些地區(qū)及寄主上長期、單一使用上述藥劑造成的。

        綜上所述,咯菌腈在防治灰霉病時可作為首選藥劑,減少嘧霉胺、多菌靈和速克靈的使用;不同地區(qū)應(yīng)對當?shù)鼗颐共【顾幮赃M行重點監(jiān)測,以指導(dǎo)科學(xué)用藥。在藥劑抗性嚴重地區(qū)或者抗性嚴重的寄主植物上停用該藥劑一段時間,或者減少該類藥劑的使用次數(shù)或使用量,盡量避免單劑使用;建議停止使用嘧霉胺、多菌靈或速克靈等高抗藥劑,或使之與不同作用機制的殺菌劑復(fù)配或者交替使用,推薦使用吡咯類殺菌劑,如咯菌腈,但使用時仍應(yīng)注意藥劑的用量,并注意與其他殺菌劑配合使用。

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