張艷，王文博，陳子雷，李慧冬，郭長英，張文君，毛江勝，顏朦朦，丁蕊艷

（山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所／農(nóng)業(yè)農(nóng)村部產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險評估實驗室（濟南）／山東省食品質(zhì)量與安全檢測技術(shù)重點實驗室，山東 濟南 250100）

番茄（Solanum lycopersicum）是番茄屬一年生或多年生草本植物，富含維生素、礦物質(zhì)及各種微量元素，還含有人體所需的番茄紅素等營養(yǎng)物質(zhì)［1］。番茄富含大量的水分和糖分，且長期連作、錯季種植和大水大肥栽培等使得番茄病蟲害增多［2］，進而造成腐爛變質(zhì)［3］。為了增加產(chǎn)量并改善質(zhì)量，需要噴灑農(nóng)藥以控制病蟲害和雜草，但長時間使用或濫用農(nóng)藥使得番茄中存在農(nóng)藥殘留現(xiàn)象。

茚蟲威，別名安打、因得克，美國杜邦公司開發(fā)的新型噁二嗪類殺蟲劑，其結(jié)構(gòu)獨特新穎，殺蟲效果好且用量低［4］，通過在昆蟲體內(nèi)產(chǎn)生的活化代謝產(chǎn)物導(dǎo)致靶標(biāo)昆蟲死亡，兼具化學(xué)農(nóng)藥的高效性與生物農(nóng)藥的安全性，在國內(nèi)農(nóng)藥市場上占據(jù)一定份額［5］，廣泛用于防治糧、棉、果、蔬等作物上的蟲害［6］。

目前，國內(nèi)外對果蔬中常見農(nóng)藥殘留檢測方法有氣相色譜法、氣相色譜－質(zhì)譜法、氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法、液相色譜法、液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法、原位質(zhì)譜法［7－12］等。本試驗對前處理方法的部分條件進行優(yōu)化，建立高效簡單的高效液相色譜方法并分析番茄施用茚蟲威后的消解動態(tài)和最終殘留，以期評價其在番茄上的使用安全性，為田間施藥提供科學(xué)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

15%安打懸浮劑，美國杜邦公司；乙腈（色譜純）：美國Fisher公司；甲醇（色譜純）、二氯甲烷、無水硫酸鈉（分析純）、磷酸二氫鉀（優(yōu)級純）：國藥集團；試驗用水為去離子水。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀：Waters公司，Alliance2695泵，二極管陣列檢測器（PDA）；BSA224S－CW 萬分之一電子天平：德國Sartorius公司；LDZS－2高速離心機：北京京立離心機公司；T25 D均質(zhì)機、RV10 D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：德國IKA公司。

1.3 田間試驗設(shè)計

試驗時間：2018年；試驗地點：消解動態(tài)試驗和最終殘留試驗在山東東營進行。小區(qū)面積30 m2。試驗設(shè)置3個重復(fù)小區(qū)，同時設(shè)置空白對照區(qū)。

1.3.1 消解動態(tài)試驗 666.7m2施藥量30 mL，對水噴霧施藥1次，間隔1 h及1、3、5、7、10 d取樣。將可食部分用組織攪碎機攪碎，充分混勻，四分法保留500 g裝瓶，于－20℃冰柜中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 最終殘留試驗 分別設(shè)置666.7m220 mL和30 mL兩個施藥濃度，各施藥3次，每次間隔7 d，于最后一次施藥后5、7、10 d取樣，同時設(shè)清水空白對照。

1.4 分析方法

1.4.1 樣品提取 準(zhǔn)確稱取10.0 g番茄樣品于80 mL離心管，加30 mL甲醇提取，用勻漿機高速勻漿1 min，于4 000 r／min離心5 min，取上清液，殘渣再加入提取液30 mL，重復(fù)提取操作，合并兩次上清液于分液漏斗中，加入2%的氯化鈉水溶液100 mL，用二氯甲烷40、40、30 mL各萃取一次，過無水硫酸鈉于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，40℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加甲醇溶解定容，過0.22μm微孔濾膜，HPLC測定。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇稀釋至合適濃度，按1.4.1的方法進行預(yù)處理，用番茄空白提液稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到濃度為0.05、0.1、0.2、0.5、1.0μg／mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，供高效液相色譜測定。以茚蟲威的峰面積（y）為縱坐標(biāo)，以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4.3 液相色譜條件 色譜柱：symmetry C18 4.0 mm×250 mm（4μm）；柱溫：30℃；流動相：水＋甲醇＋乙腈為22:41:37；流速：1.0 mL／min；檢測波長：275 nm；相對保留時間：7.5 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的確定

試驗選用乙腈、甲醇、乙酸乙酯3種有機溶劑分別作為茚蟲威的提取溶劑，通過比對發(fā)現(xiàn)甲醇作為茚蟲威的提取溶劑時具有較高的回收率，且提取溶液中雜質(zhì)較少，因此本試驗選用甲醇作為提取溶劑。茚蟲威的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見圖1。

圖1 茚蟲威標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

在上述儀器條件下，注射茚蟲威標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，進樣量為10μL，以進樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，求得線性方程為y＝1461825x－30267.4（圖2），R2＝0.9998。該方法的儀器最小檢出量為2 ng。表明茚蟲威質(zhì)量濃度與色譜峰面積在一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，儀器檢出限達到分析檢測要求。

圖2 茚蟲威標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 回收率與精密度

在番茄空白基質(zhì)中添加不同質(zhì)量分數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個加標(biāo)水平做5個平行。由表1可知，在0.05、0.2、1.0 mg／kg三個加標(biāo)水平下，茚蟲威的回收率為82.5%～102.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.2%～4.3%。表明該方法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度，可滿足農(nóng)殘檢測分析要求。圖3、圖4分別為番茄樣品空白與加標(biāo)圖譜。

圖3 空白對照檢測譜圖

圖4 番茄樣品添加茚蟲威檢測譜圖

表1 番茄中茚蟲威的添加回收和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.4 茚蟲威在番茄中的消解動態(tài)試驗結(jié)果

茚蟲威在番茄中的消解動態(tài)殘留試驗結(jié)果見表2。施藥1 h后，茚蟲威在番茄上的沉積量為0.127 mg／kg，消解動態(tài)回歸方程為 y＝0.1154e－0.259x，R2為0.9949。茚蟲威在番茄樣品中的消解規(guī)律符合一級動力學(xué)方程。根據(jù)回歸方程可知，茚蟲威的半衰期（T1／2）為2.7 d，屬于易降解農(nóng)藥，施藥7 d后降解率達85%以上。茚蟲威在番茄中的降解動態(tài)曲線見圖5。

圖5 茚蟲威在番茄中的降解動態(tài)曲線

表2 茚蟲威在番茄上的殘留消解動態(tài)

2.5 茚蟲威在番茄中的最終殘留量

從表3可以看出，茚蟲威在不同施藥劑量下的殘留量均隨施藥時間的延長而逐漸降低，距最后一次施藥10 d時，兩種施藥劑量下番茄中茚蟲威殘留量均小于0.01 mg／kg。

表3 茚蟲威在番茄上的最終殘留量

3 結(jié)論

本研究建立了利用高效液相色譜技術(shù)測定茚蟲威在番茄中最終殘留及消解動態(tài)的方法。樣品經(jīng)甲醇提取和二氯甲烷萃取后，采用高效液相色譜檢測，回收率為82.5%～102.4%，RSD 為2.2%～4.3%，準(zhǔn)確度和精密度符合殘留試驗準(zhǔn)則要求；消解動態(tài)回歸方程為y＝0.1154e－0.259x，R2為0.9949，半衰期為2.7 d；15%安打懸浮劑666.7m220 mL和30 mL兩個施藥量對水噴霧，10 d后茚蟲威殘留量均低于0.01 mg／kg。表明15%安打懸浮劑消解快，半衰期短，在番茄上使用是安全的。

本研究建立的茚蟲威HPLC檢測方法步驟簡單，分析周期快，有機溶劑用量少，對環(huán)境和人員危害小，可為農(nóng)產(chǎn)品中茚蟲威殘留監(jiān)測提供技術(shù)支撐。