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        血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962對(duì)非小細(xì)胞肺癌的聯(lián)合診斷

        2021-07-13 13:20:18韓慧芳任麗坤
        關(guān)鍵詞:病患者靈敏度良性

        韓慧芳,任麗坤

        (邯鄲市第二醫(yī)院腫瘤科,邯鄲 056500)

        【關(guān)鍵字】hsa_circ_0109320;hsa_circ_0134501;hsa_circ_0005962;非小細(xì)胞肺癌;診斷

        肺癌是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因,其中約80%為非小細(xì)胞肺癌[1]。盡管在診斷和治療方面有所改善,但肺癌的5年生存率約為18%,這主要是因?yàn)榇蠖鄶?shù)患者診斷為晚期[2]。因此,發(fā)現(xiàn)準(zhǔn)確、靈敏的生物標(biāo)志物對(duì)于肺腺癌的早期診斷具有重要意義。環(huán)狀RNA(Circular RNA,circRNAs)具有環(huán)狀共價(jià)閉合結(jié)構(gòu),是由真核生物數(shù)千個(gè)基因的前體mRNA反剪接而來,使環(huán)狀RNA具有更高的外切酶消化能力[3]。目前,越來越多的研究表明,環(huán)狀RNA與肺癌、胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、乳腺癌等多種癌癥密切相關(guān)[4-8]。Liu X X等人[9]通過基因表達(dá)Omnibus(Gene Expression Omnibus,GEO)數(shù)據(jù)集發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0005962在非小細(xì)胞肺癌患者血清中表達(dá)較高。Liu YT等人[10]通過高通量RNASeq發(fā)現(xiàn)血清中hsa_circ_0109320和hsa_circ_0134501在非小細(xì)胞肺癌患者血清中的高表達(dá)與不良預(yù)后相關(guān)。基于此,本研究旨在回顧性探討hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962對(duì)非小細(xì)胞肺癌聯(lián)合診斷的價(jià)值。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料納入2016年1月~2018年12月我院收治的早期非小細(xì)胞肺癌120例為腫瘤組;其中,男78例,女42例;年齡25~76歲;平均年齡(56.21±23.19)歲;TNM分期Ⅰ期73例,Ⅱ期47例。納入2016年1月~2018年12月我院收治的肺部良性疾病患者120例,為良性病組;其中,男69例,女51例;年齡31~77歲;平均年齡(58.10±22.39)歲;在120例良性疾病中,慢性阻塞性肺疾病有36例,肺炎有73例,肺結(jié)核有11例。早期非小細(xì)胞肺癌患者120例和肺部良性疾病患者120例均經(jīng)我院病理科證實(shí)。排除標(biāo)準(zhǔn):①嚴(yán)重心、肝、腎功能損害者;②長期使用皮質(zhì)類固醇激素及免疫抑制劑者;③患有精神疾病者;④患有其他癌癥者;⑤未經(jīng)相關(guān)治療者。同時(shí),納入2016年11月~2019年6月至我院體檢的健康體檢者120例為對(duì)照組;其中,男75例,女45例;年齡21~79歲;平均年齡(54.10±26.30)歲。各組一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可納入此次分析。受試者均在抽取血液樣本前簽署知情同意書。

        1.2 RNA抽取與實(shí)時(shí)熒光定量PCR采取早期非小細(xì)胞肺癌患者120例、肺部良性疾病患者120例和健康體檢者120例的肘前靜脈血6mL。使用金克?。ū本┥锛夹g(shù)有限公司的總RNA提取試劑盒(貨號(hào):EX1882-100T)進(jìn)行患者血液的總RNA的提取。通過上海羽朵生物科技有限公司的逆轉(zhuǎn)錄RT試劑盒(貨號(hào):YDJ2547)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。使用上海樊克生物科技有限公司的一步法RT-qPCR試劑盒(貨號(hào):RT-02111)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR試驗(yàn)。3個(gè)指標(biāo)為同一批樣本分批檢測,去除極大值和極小值保留其余數(shù)據(jù)。

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,多組間比較采用one-way ANOVA檢驗(yàn),方差齊者采用t檢驗(yàn)比較,方差不齊者采用Tamhane′T2法比較。應(yīng)用受試者工作特征(ROC)曲線下面積(AUC)分析血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962檢測非小細(xì)胞肺癌的臨床診斷價(jià)值。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 3組受試者血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962的相對(duì)表達(dá)量比較早期非小細(xì)胞肺癌患者血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962的相對(duì)表達(dá)量均高于良性病患者和健康體檢者(P<0.05);良性病患者血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962的相對(duì)表達(dá)量均高于健康體檢者(P<0.05),見表1。

        表1 3組受試者血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962的相對(duì)表達(dá)量比較

        2.2 早期非小細(xì)胞肺癌患者與良性病患者血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962的ROC曲線、AUC、靈敏度、特異度和約登指數(shù)為了評(píng)估血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962在早期非小細(xì)胞肺癌患者與良性病患者中的診斷價(jià)值,繪制120例早期非小細(xì)胞肺癌患者與120例良性病患者的ROC曲線(圖2)。hsa_circ_0109320,的ROC曲線下面積為0.88±0.02(95%CI 0.8376~0.9257),以hsa_circ_0109320的陽性臨界值1.675,其診斷靈敏度為83%,特異度為91%;hsa_circ_0134501的ROC曲線下面積為0.80±0.03(95%CI 0.749~0.8601),以hsa_circ_0134501的陽性臨界值1.532,其診斷靈敏度為94%,特異度為63%;hsa_circ_0005962的ROC曲線下面積為0.82±0.03(95%CI 0.7726~0.8757),以hsa_circ_0005962的陽性臨界值1.308,其診斷靈敏度為85%,特異度為79%。見圖1和表2。

        表2 早期非小細(xì)胞肺癌患者與良性病患者血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962的AUC、靈敏度、特異度和約登指數(shù)

        圖1 早期非小細(xì)胞肺癌患者與良性病患者血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962的ROC曲線

        2.3 早期非小細(xì)胞肺癌患者與健康體檢者血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962的ROC曲線、AUC、靈敏度、特異度和約登指數(shù)為了評(píng)估血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962在早期非小細(xì)胞肺癌患者與健康體檢者中的診斷價(jià)值,繪制120例早期非小細(xì)胞肺癌患者與120例健康體檢者的ROC曲線(圖2)。hsa_circ_0109320,的ROC曲線下面積為0.92±0.02(95%CI 0.8919~0.9667),以hsa_circ_0109320的陽性臨界值1.028,其診斷靈敏度為93%,特異度為93%;hsa_circ_0134501的ROC曲線下面積為0.86±0.03(95%CI 0.8087~0.912),以hsa_circ_0134501的陽性臨界值1.054,其診斷靈敏度為87%,特異度為88%;hsa_circ_0005962的ROC曲線下面積為0.87±0.03(95%CI 0.8129~0.9186),以hsa_circ_0005962的陽性臨界值1.082,其診斷靈敏度為88%,特異度為83%。見圖2和表3。

        表3 早期非小細(xì)胞肺癌患者與健康體檢者血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962的AUC、靈敏度、特異度和約登指數(shù)

        圖2 早期非小細(xì)胞肺癌患者與健康體檢者血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962的ROC曲線

        2.4 血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962聯(lián)合診斷早期非小細(xì)胞肺癌患有早期非小細(xì)胞肺癌的為真陽性,未患有早期非小細(xì)胞肺癌的為真陰性。以以hsa_circ_0109320的陽性臨界值1.675、hsa_circ_0134501的陽性臨界值1.532、hsa_circ_0005962的陽性臨界值1.308為診斷標(biāo)準(zhǔn),三者均滿足為聯(lián)合診斷陽性,反之則為聯(lián)合診斷陰性。血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962聯(lián)合對(duì)早期非小細(xì)胞肺癌的診斷的靈敏度為91.67%(110/120),特異度為87.91%(211/240),準(zhǔn)確度為89.17%(321/360),見表4。

        表4 血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962聯(lián)合診斷早期非小細(xì)胞肺癌

        3 討論

        肺癌是常見的,全世界癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一[11]。在2012年,有超過180萬新病例,幾乎160萬人的死亡于肺癌。盡管其診斷和治療每年都有進(jìn)展,但是肺癌的預(yù)后仍然是不樂觀的,其5年總體生存率只有18%[12]。此外,由于腫瘤的異質(zhì)性,單個(gè)活檢的基因檢測并不能很好地描述腫瘤的整體遺傳變化。因此,為了實(shí)現(xiàn)對(duì)非小細(xì)胞肺癌廣泛的診斷,一個(gè)靈敏、方便、多基因的基于血液的診斷系統(tǒng)將具有很高的價(jià)值。在本研究中,發(fā)現(xiàn)血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962聯(lián)合對(duì)非小細(xì)胞肺癌診斷的靈敏度為91.67%,特異度為87.91%,準(zhǔn)確度為89.17%。

        circRNA是最近發(fā)現(xiàn)的一類非編碼RNA分子,它是由多個(gè)外顯子的反向剪接形成的[13]。CircRNAs在真核細(xì)胞豐富,表現(xiàn)出組織,時(shí)間,和疾病特異性。在本研究中,發(fā)現(xiàn)早期非小細(xì)胞肺癌患者血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962的相對(duì)表達(dá)量均高于良性病患者和健康體檢者。有研究指出[14]宮頸癌患者血漿中存在大量CircRNAs,這些CircRNAs在術(shù)前和術(shù)后均有差異表達(dá),其中部分CircRNAs被認(rèn)為是預(yù)后標(biāo)志物。提示血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962可能與癌癥進(jìn)展有關(guān)。血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962在腫瘤組與良性組的靈敏度分別為83%、94%、85%,特異度分別為91%、63%、79%。血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962在腫瘤組與對(duì)照組的靈敏度分別為93%、87%、88%,特異度分別為93%、88%、83%。顯示了其較好的診斷效能。因此,本研究提供了一個(gè)極好的機(jī)會(huì)來發(fā)現(xiàn)CircRNAs的生物標(biāo)志物,可進(jìn)一步將其用于非小細(xì)胞肺癌的診斷和相關(guān)藥物的開發(fā)。

        一些CircRNAs海綿影響microRNA的釋放的抑制作用的microRNA在他們的目標(biāo)基因,讓目標(biāo)基因的表達(dá),在多個(gè)生物過程發(fā)揮著至關(guān)重要的監(jiān)管作用,甚至一些疾?。?5-17]。CircRNAs發(fā)揮重要作用在許多疾病,如腫瘤通過調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)翻譯。不像線性RNA,CircRNAs共價(jià)閉合連續(xù)循環(huán)沒有5 ' 3 '極性或腺苷反面,使他們不太容易被核酸外切酶降解和穩(wěn)定比線性RNA。[18-19]近年來,CircRNAs因其豐富、穩(wěn)定、保守和特異性等特點(diǎn)成為新的生物標(biāo)志物。此外,CircRNAs不僅可以在癌組織中穩(wěn)定存在,還可以在外泌體和血液中穩(wěn)定存在。在分析腫瘤組織中的生物標(biāo)志物時(shí),液體活檢比傳統(tǒng)活檢更方便、侵入性更小。因此,血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962可能適合作為潛在的癌癥診斷生物標(biāo)志物。

        綜上所述,血清中hsa_circ_0109320,hsa_circ_0134501,hsa_circ_0005962的相對(duì)表達(dá)量檢測可作為非小細(xì)胞肺癌的潛在標(biāo)志。

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