李應(yīng)明，陳 華，伍 燕，詹文麗

（?？谑腥嗣襻t(yī)院輸血科，?？?570208）

輸血治療作為改善循環(huán)、提高血漿蛋白、增強(qiáng)免疫力、凝血功能、增加攜氧能力的治療方法［1，2］，常用于急性出血、貧血、低蛋白血癥、重癥感染、凝血機(jī)制障礙等疾病的臨床治療中。準(zhǔn)確的血型鑒定及交叉配血方法，不僅可有效減少ABO血型不符導(dǎo)致的不良后果，對(duì)保證輸血安全有著作用的意義［3］。雖血型鑒定及交叉配血在臨床已普遍應(yīng)用，但由不規(guī)則抗體導(dǎo)致的溶血性輸血反應(yīng)仍有發(fā)生［4，5］，給患者的生命安全造成不良影響。故輸血前不規(guī)則抗體篩選及血型鑒定對(duì)提高輸血安全性意義重大?；诖?，本研究以我院2019年12月～2020年12月收治的600例接受檢驗(yàn)的輸血患者為研究對(duì)象，比較卡式微柱凝膠技術(shù)與聚凝胺法在血型鑒定、輸血前紅細(xì)胞不規(guī)則抗體檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果，總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料研究對(duì)象為我院收治的600例接受檢驗(yàn)的輸血患者，其中男性325例，女275性例；年齡位于16～75歲之間，平均年齡為（40.82±5.76）歲。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。納入標(biāo)準(zhǔn)：①無輸血治療禁忌證；②意識(shí)清晰，無精神疾?。虎叟R床資料完整，依從性良好，可配合完成研究；④自愿簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在影響免疫功能的原發(fā)性疾病；②存在腎臟、肝臟、心臟等重要器官功能障礙；③存在嚴(yán)重血液系統(tǒng)疾病。

1.2 檢測(cè)試劑聚凝胺試劑盒購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司。 抗A、抗B血清購(gòu)自上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任功能，抗D單克隆血清購(gòu)自長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司。ABO、RhD血型鑒定微柱凝膠卡購(gòu)自荷蘭皇家血液基金會(huì)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 聚凝胺法標(biāo)記3支 相同試管，1支作為主測(cè)管，1支作為次測(cè)管，1支作為對(duì)照管。主測(cè)管于受血者血漿中滴入1滴獻(xiàn)血者3%～5%紅細(xì)胞。次測(cè)管于獻(xiàn)血者血漿中滴入1滴受血者3%～5%紅細(xì)胞。對(duì)照管于陽性對(duì)照血漿中滴入1滴獻(xiàn)血者3%～5%紅細(xì)胞。所有試管內(nèi)置入0.65mL低離子溶液，充分混勻后，于室溫下孵育1min。再于試管內(nèi)置入2滴聚凝胺溶液，充分混勻后，于室溫下孵育15s。3400rpm/min離心10s，留取0.1mL上清液。觀察紅細(xì)胞是否出現(xiàn)凝聚反應(yīng)。最后，滴加2滴復(fù)懸液，充分混勻后，置于玻片上，顯微鏡下觀察是否出現(xiàn)凝聚反應(yīng)。利用3個(gè)已知抗原表型的O型篩選RBC上存在的多種RBC抗原與被檢血清在凝聚胺介質(zhì)中反應(yīng)，出現(xiàn)凝集表示血清中存在不規(guī)則抗體。

1.3.2 卡式微柱凝膠法標(biāo)記好凝膠卡后，以3中譜紅細(xì)胞配制成0.5%～0.8%的濃度，加入標(biāo)記好的微管中，每管50L。分離血漿后，將50L血漿加入Ⅰ孔、Ⅱ孔、Ⅲ孔內(nèi)，并相應(yīng)加入50LⅠ、Ⅱ、Ⅲ號(hào)不規(guī)則抗體篩查譜細(xì)胞。置于37℃孵育15min。以微柱凝膠專用離心機(jī)900rpm/min離心2min，1500rpm/min離心3min。按照譜紅細(xì)胞反應(yīng)格局，判斷結(jié)果。以3個(gè)已知抗原表型的O型篩選RBC上存在的多種RBC抗原與被檢血清在微柱凝膠中反應(yīng)，有凝集出現(xiàn)提示存在不規(guī)則抗體。

1.4 觀察指標(biāo)①兩種檢測(cè)方法對(duì)ABO、RhD血型鑒定的準(zhǔn)確率比較。聚凝胺法結(jié)果判斷：陰性為不出現(xiàn)凝集反應(yīng)；陽性為出現(xiàn)凝集反應(yīng)［6］?？ㄊ轿⒅z法結(jié)果判斷：陰性為凝膠管底部處紅細(xì)胞完全降解；陽性為紅細(xì)胞凝集塊處于凝膠中端或表面［7］。②兩種檢測(cè)方法對(duì)不規(guī)則抗體檢出情況比較。觀察兩種方法對(duì)抗-c、抗-C、抗-e、抗-E、抗-D等不規(guī)則抗體的檢出率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有數(shù)據(jù)均錄入SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以mean±SD表示，采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測(cè)方法血型鑒定準(zhǔn)確率卡式微柱凝膠法ABO血型、RhD血型的一次性準(zhǔn)確率均高于聚凝胺法（P<0.05），見表1。

表1 血型鑒定準(zhǔn)確率比較

2.2 不規(guī)則抗體檢出情況比較卡式微柱凝膠法的不規(guī)則抗體總檢出率高于聚凝胺法（2.00% VS 0.33%，P<0.05），見表2。

表2 不規(guī)則抗體檢出情況［n（%）］

2.3 不規(guī)則抗體陽性科室分布14例不規(guī)則抗體陽性患者中，血液科5例，占35.71%；腎病科4例，占28.57%；感染科3例，占21.43%。其余科室2例，占14.29%。既往有輸血史12例，占85.71%。有妊娠史7例，占50.00%。

3 討論

輸血治療為目前臨床常用的挽救大量失血患者的重要方法［8］，在臨床應(yīng)用中受到血液、血液制品抗原、抗體成分多樣性的影響，可有不同程度、不同類型的不良反應(yīng)出現(xiàn)［9］。在輸血前進(jìn)行血型鑒定、交叉配血可減少速發(fā)性溶血性輸血不良反應(yīng)的發(fā)生［10］，但異體/自體輸血、血液制品靜脈滴注、免疫刺激等產(chǎn)生的不規(guī)則抗體，可導(dǎo)致血型正反定型不符等問題［11］，從而誘發(fā)嚴(yán)重輸血反應(yīng)，危及患者生命。傳統(tǒng)的輸血前檢測(cè)方法包括：聚凝胺法、酶法、鹽水法等［12］。聚凝胺法檢測(cè)原理為：紅細(xì)胞表明電荷收到低價(jià)電離子破壞后，可發(fā)生凝集現(xiàn)象，在加入凝聚液后，紅細(xì)胞未分散則為特異性。但該方法具有自動(dòng)化程度較低，受人為因素干擾過多，缺乏標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，最低檢測(cè)限較高等缺點(diǎn)［13］。

卡式微柱凝膠技術(shù)為美國(guó)FDA批準(zhǔn)的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，具有較高的特異性、靈敏度。其檢測(cè)原理為：通過調(diào)節(jié)葡聚糖凝膠濃度，控制分子篩孔徑大小，使分子篩僅允許單個(gè)紅細(xì)胞通過，從而達(dá)到分離凝集紅細(xì)胞與游離紅細(xì)胞的目的。將紅細(xì)胞與血清加入凝膠的上不反應(yīng)離心后，凝集紅細(xì)胞受到凝膠的阻礙而停留在凝膠的上部/凝膠中，未凝集的紅細(xì)胞則停留在凝膠腔底部。該方法目前已采用標(biāo)準(zhǔn)化定量操作，可使操作人員的誤差降至最低水平，具有較高的重復(fù)性。且由于該方法采用了凝膠分子篩技術(shù)、免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，可顯著提高血型鑒定的靈敏度、安全性。凝集的紅細(xì)胞與游離紅細(xì)胞分開，檢測(cè)結(jié)果一目了然，有效避免檢測(cè)人員經(jīng)驗(yàn)不足導(dǎo)致的誤差。且該檢測(cè)方法操作方便，去除了繁瑣的洗滌紅細(xì)胞過程，人球蛋白抗體不易被中和，從而降低假陰性率導(dǎo)致的血型鑒定錯(cuò)誤的發(fā)生。 本研究結(jié)果表明，卡式微柱凝膠技術(shù)在ABO血型、RhD血型鑒定中的一次性準(zhǔn)確率分別為99.67%、99.67%，均高于傳統(tǒng)聚凝胺法，這與牛天林等［14］的研究結(jié)論一致。說明卡式微柱凝膠技術(shù)在血型鑒定中的準(zhǔn)確性高于凝聚胺法。鑒于不規(guī)則抗體導(dǎo)致的輸血反應(yīng)較為常見，本次研究進(jìn)一步比較了兩種方法在不規(guī)則抗體（抗-D、抗-E、抗-e、抗-C、抗-c）檢測(cè)中的應(yīng)用效果，這些抗體均屬IgG抗體，由輸血/妊娠等免疫刺激產(chǎn)生，對(duì)相應(yīng)的紅細(xì)胞有致敏作用，且輸血過程中的輸血反應(yīng)程度與IgG的效價(jià)密切相關(guān)。兩種檢測(cè)方法檢出的總陽性率為2.00%、0.33%，與李蓮華等［15］的文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)論一致。這可能與IgG抗體分子鏈短小，無法有效凝聚有關(guān)。

綜上所述，卡式微柱凝膠技術(shù)在ABO、RhD血型鑒定及輸血前紅細(xì)胞不規(guī)則抗體檢測(cè)中具有更好的檢測(cè)效果，操作方便易行，可有效保證臨床輸血的安全性。