李丹丹 宇曉軍 王 群 王 光 王利華

(青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，青島266109)

三丁酸甘油酯(TB)是丁酸和甘油酯化后的產(chǎn)物，是一種穩(wěn)定的、快速吸收的丁酸前體物，可以被動物腸道中的胰脂肪酶分解產(chǎn)生3分子丁酸和1分子甘油，然后被運(yùn)送至機(jī)體各組織器官發(fā)揮作用[1]。相比于丁酸及其衍生物，TB具有脂肪香味、不易被胃液分解、代謝速度慢等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)養(yǎng)殖中[2]。飼糧中添加TB可以改善動物的生長性能，促進(jìn)腸道發(fā)育，改善腸道組織形態(tài)，提高動物的免疫力，優(yōu)化腸道菌群，提高營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率，保障動物機(jī)體的健康[3-6]。水貂是肉食性動物，具有獨(dú)特的消化道結(jié)構(gòu)及特性，食糜通過胃腸道的時間非常短，維持腸道健康對于提高水貂生長性能、營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和毛皮品質(zhì)尤為重要[7]。因此，本試驗(yàn)在育成期母貂飼糧中添加不同水平的TB，探究TB對育成期母貂生長性能、營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率及十二指腸消化酶活性的影響，以確定TB在水貂飼糧中的適宜添加水平。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計

將120只65日齡體重相近的健康白色母貂隨機(jī)分為6組，每組10個重復(fù)，每個重復(fù)2只(飼養(yǎng)在1籠內(nèi))。各組飼糧中分別添加0(Ⅰ組，對照組)、0.1%(Ⅱ組)、0.2%(Ⅲ組)、0.3%(Ⅳ組)、0.4%(Ⅴ組)和0.5%(Ⅵ組)的TB(純度≥50%，其余部分為載體二氧化硅)?；A(chǔ)飼糧參照NRC(1982)和生產(chǎn)實(shí)踐中飼喂效果較好的配方配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)于2019年7月3日至2019年9月10日在山東省諸城市某水貂養(yǎng)殖場進(jìn)行，預(yù)試期7 d，正試期60 d，前30 d為Ⅰ期，后30 d為Ⅱ期。水貂采用棚舍飼養(yǎng)，已完成犬瘟熱和細(xì)小病毒疫苗接種，每天05：00和17：00各飼喂1次，自由飲水，自然光照。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表1項目 Items含量 Content預(yù)混料 Premix1)3.19雞肝 Chicken liver2.68膨化小麥 Extruded wheat1.61魚粉 Fish meal1.34雞蛋 Egg0.81合計 Total100.00營養(yǎng)水平 Nutrient levels2)代謝能 ME/(MJ/kg)16.83粗脂肪 EE19.09粗蛋白質(zhì) CP29.97粗灰分 Ash9.44鈣 Ca2.35磷 P1.13

1.2 測定指標(biāo)及方法

1.2.1 生長性能的測定

試驗(yàn)正式開始時和每期結(jié)束后對水貂逐只進(jìn)行空腹體重，記錄每天采食量，計算每期平均日增重、平均日采食量、料重比。

1.2.2 營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的測定

分別在試驗(yàn)第3周和第6周，每組選6個重復(fù)進(jìn)行消化試驗(yàn)。消化試驗(yàn)采用內(nèi)源指示劑法收集新鮮的水貂糞便，用10%的鹽酸固氮，同時采集每組飼糧樣品。將3 d收集的糞便、飼糧樣品分別混合均勻后于65 ℃烘至恒重，制成風(fēng)干樣，并測定初水分。樣品粉碎過40目篩，參照相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)測定糞樣和飼糧樣品中的鹽酸不溶灰分(GB/T 23742—2009)、粗蛋白質(zhì)(GB/T 6432—2018)、粗脂肪(GB/T 6433—2006)、水分(GB/T 6435—2014)、粗灰分(GB/T 6438—2007)、鈣(GB/T 6436—2018)、磷(GB/T 6437—2018)、氨基酸(GB/T 5009.124—2016)含量，并計算營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率。

1.2.3 十二指腸消化酶活性的測定

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，每組選擇6個重復(fù)，從每個重復(fù)中取1只水貂進(jìn)行屠宰試驗(yàn)，取十二指腸于-80 ℃保存。測定前將腸道樣品4 ℃解凍，稱取0.5～1.0 g腸道內(nèi)容物，按重量1∶9的比例制作組織勻漿(α-淀粉酶和脂肪酶活性測定用生理鹽水進(jìn)行冰水浴勻漿，胰蛋白酶活性測定用勻漿介質(zhì)進(jìn)行冰水浴勻漿)，低溫離心機(jī)2 500 r/min離心10 min，取上清液用試劑盒(南京建成生物工程研究所)測定，α-淀粉酶和脂肪酶活性用酶標(biāo)儀(RZ-9618)比色測定，胰蛋白酶活性用紫外可見分光光度計(UV-6200)比色測定。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 9.4軟件中MIXED過程進(jìn)行單因素方差分析，計算最小二乘均值及標(biāo)準(zhǔn)誤，用Tukey法對最小二乘均值進(jìn)行多重比較，并用REG過程對TB添加水平與生長性能、營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率及十二指腸消化酶活性各指標(biāo)進(jìn)行線性和二次曲線回歸分析，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 TB對育成期母貂生長性能的影響

由表2可知，TB對育成期母貂試驗(yàn)Ⅱ期的末重、平均日增重和平均日采食量有顯著影響(P<0.05)，對試驗(yàn)Ⅰ期的生長性能無顯著影響(P>0.05)。試驗(yàn)Ⅱ期，與對照組相比，Ⅱ、Ⅲ組的末重顯著升高(P<0.05)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組的平均日采食量顯著升高(P<0.05)；末重與TB添加水平呈二次曲線相關(guān)(P<0.05)。

表2 TB對育成期母貂生長性能的影響

2.2 TB對育成期母貂營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

由表3可知，TB對育成期母貂試驗(yàn)Ⅰ期和Ⅱ期的干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、鈣、磷表觀消化率有顯著影響(P<0.05)。試驗(yàn)Ⅰ期，與對照組相比，Ⅱ組的粗蛋白質(zhì)表觀消化率顯著升高(P<0.05)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組的鈣表觀消化率顯著升高(P<0.05)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組的磷表觀消化率顯著升高(P<0.05)；其中，Ⅱ組的粗蛋白質(zhì)、鈣、磷表觀消化率較對照組分別提高了10.69%、33.16%、23.24%；粗蛋白質(zhì)和磷表觀消化率與TB添加水平呈二次曲線相關(guān)(P<0.05)。試驗(yàn)Ⅱ期，與對照組相比，Ⅱ、Ⅲ組的干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)表觀消化率顯著升高(P<0.05)，Ⅱ組的鈣表觀消化率顯著升高(P<0.05)，Ⅲ、Ⅳ組的磷表觀消化率顯著升高(P<0.05)；磷表觀消化率與TB添加水平呈二次曲線相關(guān)(P<0.05)。

表3 TB對育成期母貂營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

由表4可知，TB對育成期母貂試驗(yàn)Ⅰ期和Ⅱ期的氨基酸(除試驗(yàn)Ⅰ期蛋氨酸和半胱氨酸外)及總氨基酸表觀消化率有顯著影響(P<0.05)。試驗(yàn)Ⅰ期，與對照組相比，Ⅱ組的組氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸表觀消化率顯著升高(P<0.05)；精氨酸、半胱氨酸表觀消化率與TB添加水平呈線性和二次曲線相關(guān)(P<0.05)。試驗(yàn)Ⅱ期，與對照組相比，Ⅱ組的氨基酸(除賴氨酸、半胱氨酸、纈氨酸外)表觀消化率均顯著升高(P<0.05)；半胱氨酸、賴氨酸表觀消化率與TB添加水平呈二次曲線相關(guān)(P<0.05)。

表4 TB對育成期母貂氨基酸表觀消化率的影響

續(xù)表4項目Items組別 GroupsⅠ(對照 Control)ⅡⅢⅣⅤⅥ標(biāo)準(zhǔn)誤SEP值 P-value三丁酸甘油酯TB線性Linear二次Quadratic蛋氨酸 Met93.50bc94.89a93.10c94.47ab92.48c93.12c0.39<0.010.080.13異亮氨酸 Ile88.85bc91.02a87.84c90.21ab88.72bc89.63abc0.650.030.930.99亮氨酸 Leu90.07bc91.81a88.89c91.30ab89.36c90.42abc0.52<0.010.570.85蘇氨酸 Thr85.31b88.87a85.29b88.17a85.48b85.95b0.68<0.010.770.73苯丙氨酸 Phe93.72bc95.16a93.13c94.53ab93.45c93.98bc0.29<0.010.480.77半胱氨酸 Cys81.68ab82.77a78.31c79.40bc78.53c80.67abc0.980.020.090.04纈氨酸 Val86.43a87.49a82.38b87.77a85.53a87.69a1.050.010.600.31總氨基酸 TAA90.02bc91.75a88.64c91.09ab88.97c89.93bc0.52<0.010.270.56

2.3 TB對育成期母貂十二指腸消化酶活性的影響

由表5可知，TB對育成期母貂十二指腸胰蛋白酶活性有顯著影響(P<0.05)，對十二指腸脂肪酶、α-淀粉酶活性無顯著影響(P>0.05)。Ⅱ組的十二指腸胰蛋白酶活性顯著高于其他各組(P<0.05)，十二指腸胰蛋白酶活性與TB添加水平呈線性和二次曲線相關(guān)(P<0.05)。

表5 TB對育成期母貂十二指腸消化酶活性的影響

3 討 論

3.1 TB對育成期母貂生長性能的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，TB可有效改善育成期母貂的生長性能，這與白國勇等[8]在保育豬上得到的結(jié)果一致，即TB可改善平均日增重和平均日采食量。采食量在一定程度上可反映飼糧的適口性，因?yàn)門B略具有香味，且能夠增加水貂的采食量，可以推斷TB可以改善飼糧的適口性，增進(jìn)食欲。有研究表明，TB可以促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化，從而改善動物的生長性能[9]。另外，TB還可以緩解高溫?zé)釕?yīng)激。水貂育成期正值一年中氣溫最高的夏季，高溫可影響水貂的采食量和免疫功能，造成水貂的應(yīng)激損傷，飼糧添加TB可維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，減少應(yīng)激損傷[10]，改善水貂生長性能。

3.2 TB對育成期母貂營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，TB可提高育成期母貂干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、鈣和磷表觀消化率，與劉統(tǒng)等[11]在仔豬上的研究一致。水貂對于營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收主要依賴于腸道發(fā)育的健康水平[12]，動物在攝入TB后，在小腸中受到胰脂肪酶的分解作用，釋放1分子甘油和3分子丁酸，其中甘油會被酯化生成甘油三酯，大部分以乳糜微粒的形式經(jīng)過淋巴進(jìn)入血液循環(huán)，丁酸則是通過肉堿轉(zhuǎn)運(yùn)途徑進(jìn)入到腸黏膜上皮細(xì)胞中，并在線粒體中發(fā)生β-氧化同時釋放大量能量，腸腔中的丁酸不僅可以酸化環(huán)境，阻止病原菌的增殖，還可以改善腸道結(jié)構(gòu)與屏障功能[13]。另外，TB可調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，促進(jìn)腸道對營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收[14]，營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的提高促進(jìn)了育成期水貂的生長。

水貂作為一種肉食性動物，較其他動物蛋白質(zhì)需求量大[15]。水貂對蛋白質(zhì)的需要最終表現(xiàn)在對氨基酸的需要，氨基酸對水貂的健康及毛皮品質(zhì)至關(guān)重要。精氨酸是廣泛存在于哺乳動物機(jī)體組織蛋白和體液中的一種基礎(chǔ)氨基酸，在促進(jìn)生長、參與脂質(zhì)代謝、改善腸道健康、增強(qiáng)免疫功能等方面發(fā)揮著重要作用。精氨酸在水貂的皮毛發(fā)育過程中起著至關(guān)重要的作用，并可能影響后期毛皮品質(zhì)[16]。蛋氨酸作為一種含硫氨基酸，參與機(jī)體內(nèi)眾多代謝過程，為動物體內(nèi)合成胱氨酸和蛋白質(zhì)提供原料，從而促進(jìn)毛皮生長，提高毛皮品質(zhì)[17]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，TB可提高母貂的精氨酸、蛋氨酸和賴氨酸等必需氨基酸表觀消化率。這說明TB提高粗蛋白質(zhì)表觀消化率主要是因?yàn)樘岣吡吮匦璋被岜碛^消化率，而必需氨基酸表觀消化率的提高有利于促進(jìn)水貂生長及毛皮品質(zhì)的改善。

3.3 TB對育成期母貂十二指腸消化酶活性的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，TB可提高育成期母貂十二指腸胰蛋白酶活性。水貂以高脂肪、高蛋白質(zhì)飼糧為主，主要是依靠腸道分泌的酶進(jìn)行消化，胰蛋白酶活性的提高有利于母貂對粗蛋白質(zhì)和氨基酸的消化吸收。由此可以推斷，消化試驗(yàn)中TB改善粗蛋白質(zhì)和氨基酸表觀消化率可通過胰蛋白酶活性的提高來實(shí)現(xiàn)，從而達(dá)到促進(jìn)母貂生長的作用。該結(jié)果與鐘翔等[18]在仔豬、楊在賓等[19]在肉雞上的研究結(jié)果一致?？赡苁怯捎赥B在十二指腸經(jīng)胰脂肪酶初步消化分解，釋放丁酸，降低腸道pH,提高胃腸道酸度,激活蛋白酶原,提高消化酶活性。另外，丁酸還可以誘導(dǎo)胰島素和胰高血糖素，并通過和胰腺腺泡細(xì)胞上的特異受體結(jié)合，起到調(diào)節(jié)消化酶生物合成的作用[2]。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，TB添加水平為0.1%時可改善育成期母貂生長性能，提高營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率和十二指腸胰蛋白酶活性。