蔡元麗 張維銘 宋志剛*

(1.齊魯師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，濟(jì)南250200；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，泰安271018)

肉雞生長(zhǎng)性能的發(fā)揮離不開高能飼糧的良好供給[1]，肉雞飼養(yǎng)后期(3～6周齡)，飼糧中往往添加較高比例的油脂來滿足其高能需求。不過，過多的油脂不僅會(huì)引起飼料制粒方面的困難，還會(huì)導(dǎo)致肉雞消化負(fù)擔(dān)增加。飼糧中的脂肪進(jìn)入含水的胃腸道時(shí)，膽汁鹽作為一種乳化劑能將脂肪乳化為小液滴，進(jìn)而促進(jìn)脂肪酶對(duì)脂肪的水解，被脂肪酶水解的脂肪會(huì)形成微膠粒穿過小腸壁被吸收[1]。然而，由于雛雞膽汁鹽分泌量低，脂肪大顆粒無法被完全乳化或乳化不及時(shí)，導(dǎo)致其脂肪的利用受限[2]，同時(shí)也導(dǎo)致了飼料資源的浪費(fèi)。

溶血磷脂，也稱作溶血卵磷脂(lysophosphatidylcholine，LPL)，是一種天然的表面活性劑，是由磷脂酶A2裂解掉磷脂的1個(gè)疏水性脂肪酸得到的產(chǎn)物[3]。LPL因其非極性基團(tuán)和易氧化的不飽和雙鍵的減少而明顯增加了親水性和穩(wěn)定性。LPL能使小腸中的脂肪滴變成更小、更穩(wěn)定的微膠粒，這樣脂肪滴就有更大的表面積與胰脂酶相互作用，從而更有效地消化脂肪，進(jìn)而增加禽類對(duì)脂肪的生物利用率。同時(shí)，LPL的添加還可以改變腸道黏膜細(xì)胞雙層膜結(jié)構(gòu)的通透性，增加膜孔的大小[4-5]，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。本研究以肉雞作為試驗(yàn)對(duì)象，初步探討飼糧中額外添加LPL對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、腸道消化酶活性和抗氧化能力的影響，揭示其影響生長(zhǎng)性能的可能機(jī)制，并確定LPL在肉雞飼糧中的適宜添加水平。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用LPL主要成分為從大豆磷脂中提取的高濃度功能性溶血磷脂(由韓國某公司提供)，產(chǎn)品中大豆卵磷脂石油醚提取物>35%，其余成分為水、大豆油和脂肪酸等載體。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇600只1日齡愛拔益加(AA)肉仔雞，飼喂相同飼糧至17日齡，然后選取480只體重相近的肉雞，隨機(jī)分為4個(gè)組，每組10個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12只雞。從22日齡開始，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，其余3組在基礎(chǔ)飼糧基礎(chǔ)上分別添加200(LPL200組)、300(LPL300組)和400(LPL400組) mg/kg LPL。試驗(yàn)雞自由采食和飲水，光照、溫度、濕度和免疫程序等按照肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。試驗(yàn)期21 d。

1.3 基礎(chǔ)飼糧

基礎(chǔ)飼糧參照標(biāo)準(zhǔn)NRC(1994)和中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 33—2004配制并制粒，基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.4 測(cè)定指標(biāo)和方法

試驗(yàn)雞在第28、35和42日齡時(shí)，計(jì)算每個(gè)重復(fù)的平均體重，選取與平均體重相近的試驗(yàn)雞進(jìn)行樣品采集。

1.4.1 生長(zhǎng)性能

記錄22～42日齡各重復(fù)的耗料量、死亡雞數(shù)和體重，統(tǒng)計(jì)肉雞42日齡時(shí)的平均體重和22～42日齡的平均日增重、平均日采食量、料重比以及死亡率。

1.4.2 血清生化指標(biāo)

第28、35和42日齡，分別于每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)取1只雞，禁飼8 h后翅靜脈采血，分離血清，分裝于采樣管中，-20 ℃凍存。使用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定血清中甘油三酯(TG)(A110-2)、總膽固醇(TC)(A111-2)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)(A112-2)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)(A113-2)的含量。

1.4.3 腸道消化酶活性和抗氧化指標(biāo)

第28、35和42日齡，分別于每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)取1只雞采血后屠宰，取回腸食糜和肝臟、胸肌的同一部位組織樣品于凍存管中，整個(gè)過程在冰上操作。使用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定肝臟和胸肌樣品中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)以及回腸食糜樣品中脂肪酶和淀粉酶的活性。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

利用SAS 9.13軟件中的one-way ANOVA程序進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P<0.01表示差異極顯著，P<0.05表示差異顯著，0.05≤P<0.10表示有變化趨勢(shì)。

2 結(jié) 果

2.1 LPL對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，LPL200組和LPL300組肉雞42日齡平均體重和22～42日齡平均日增重顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，料重比顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；LPL300組肉雞各項(xiàng)生長(zhǎng)性能指標(biāo)顯著優(yōu)于LPL200組和LPL400組(P<0.05)。

表2 LPL對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.2 LPL對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，LPL300組肉雞35日齡血清TC含量顯著降低(P<0.05)，各組肉雞28和42日齡血清TC含量無顯著差異(P>0.05)；LPL300組肉雞42日齡血清TG含量有降低的趨勢(shì)(P=0.055)；飼糧添加LPL對(duì)肉雞血清HDL-C和LDL-C含量無顯著影響(P>0.05)。

表3 LPL對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響

續(xù)表3項(xiàng)目 Items日齡 Days of age對(duì)照組Control groupLPL200組 LPL200 groupLPL300組 LPL300 groupLPL400組 LPL400 groupP值 P-value低密度脂蛋白膽固醇 LDL-C280.73±0.070.62±0.060.54±0.060.58±0.060.23350.59±0.070.67±0.100.50±0.050.67±0.110.47420.74±0.050.61±0.040.80±0.130.62±0.050.28

2.3 LPL對(duì)肉雞回腸食糜消化酶活性的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，LPL300組肉雞28、35和42日齡回腸食糜中脂肪酶活性顯著提高(P<0.05)，而LPL400組肉雞回腸食糜脂肪酶活性無顯著差異(P>0.05)；LPL300組肉雞42日齡回腸食糜中淀粉酶活性顯著提高(P<0.05)，但其他日齡回腸食糜中淀粉酶活性無顯著差異(P>0.05)。

表4 LPL對(duì)肉雞回腸食糜消化酶活性的影響

2.4 LPL對(duì)肉雞抗氧化能力的影響

由表5可知，與對(duì)照組相比，LPL200組肉雞28日齡胸肌GSH-Px活性顯著提高(P<0.05)； LPL200組和LPL300組肉雞35日齡胸肌GSH-Px活性顯著提高(P<0.05)，LPL200組、LPL300組和LPL400組肉雞28和35日齡肝臟GSH-Px活性顯著提高(P<0.05)；LPL300組肉雞28和35日齡肝臟SOD活性顯著提高(P<0.05)，LPL300組和LPL400組肉雞42日齡肝臟SOD活性顯著降低(P<0.05)。

表5 LPL對(duì)肉雞抗氧化能力的影響

續(xù)表5項(xiàng)目 Items日齡 Days of age對(duì)照組Control groupLPL200組 LPL200 groupLPL300組 LPL300 groupLPL400組 LPL400 groupP值 P-value肝臟超氧化物歧化酶 SOD in liver28981.37±11.95c1 011.00±18.46c1 593.87±20.98a1 121.58±24.87b<0.0135537.71±7.58b545.15±11.15b625.38±17.00a559.95±12.87b<0.0142725.36±13.89a720.38±18.95a661.10±22.21bc610.12±26.75c<0.01

3 討 論

3.1 LPL對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

現(xiàn)代商品肉雞生長(zhǎng)發(fā)育快，飼糧一般采用高能、高蛋白質(zhì)模式，因此肉雞飼糧中通常要添加較高比例的油脂來滿足其對(duì)能量的高需求。油脂添加比例過高會(huì)影響飼料制粒效果，因此多采用后噴涂工藝，但這增加了飼料生產(chǎn)成本。同時(shí)，過高的飼糧油脂也會(huì)引起肉雞消化系統(tǒng)的負(fù)擔(dān)，在飼糧中合理添加乳化劑成為必然選擇。飼糧中的乳化劑主要包括苷酯類、磷脂類、膽汁酸鹽類及甘油脂肪酸酯類等。LPL是由磷酸卵磷脂失去1分子脂肪酸得到的衍生物，飼糧中添加磷脂，特別是大豆卵磷脂能通過其乳化作用促進(jìn)動(dòng)物對(duì)脂肪的吸收[6]，并可調(diào)控動(dòng)物機(jī)體的脂類代謝[7]。研究表明，LPL的乳化性能優(yōu)于普通磷脂，在飼糧中添加LPL可提高肉雞的表觀消化能、養(yǎng)分利用率以及平均日采食量[8-11]，并可提高肉雞的體增重，降低料重比[12-14]。還有研究指出，LPL可以維持低能量飼糧喂養(yǎng)肉雞的生長(zhǎng)性能[15-17]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加300 mg/kg LPL可顯著降低肉雞22～42日齡料重比，提高平均日增重，說明LPL的添加可顯著提高飼料報(bào)酬，降低料重比，提高肉雞生長(zhǎng)性能，這與前人的研究結(jié)果一致。另外，LPL300組肉雞無論是42日齡的平均體重還是料重比都顯著優(yōu)于LPL200組和LPL400組，這說明LPL的添加水平為300 mg/kg時(shí)，飼養(yǎng)效果最佳。Wealleans等[18]研究發(fā)現(xiàn)，LPL的添加水平為250 g/t時(shí)能獲得最優(yōu)的飼料轉(zhuǎn)化效率，與本試驗(yàn)的添加水平十分相近。LPL作為一種優(yōu)良的乳化劑可促進(jìn)脂肪的消化與吸收，進(jìn)而改善肉雞的生長(zhǎng)性能[15]。Zhang等[11]也研究表明，肉雞生長(zhǎng)性能的提高與脂肪酸消化率的增加有關(guān)。LPL改善生長(zhǎng)性能的另外1個(gè)原因是LPL能進(jìn)入腸上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜，這能改變細(xì)胞膜的通透性和流動(dòng)性以及蛋白質(zhì)通道的功能[4]，進(jìn)而增加細(xì)胞膜對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收。

3.2 LPL對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響

血液指標(biāo)是機(jī)體生化反應(yīng)以及物質(zhì)代謝的重要反映，其中TG、TC、高密度脂蛋白(HDL)及低密度脂蛋白(LDL)均參與機(jī)體的能量代謝，同時(shí)TG也是機(jī)體貯存能量最主要的形式。TC通常與HDL、LDL結(jié)合，以HDL-C、LDL-C等形式存在，而HDL、LDL的含量在一般情況下則用HDL-C、LDL-C的含量來表示。LDL是由極低密度脂蛋白(VLDL)轉(zhuǎn)變而來，前者主要作用是向組織轉(zhuǎn)運(yùn)肝臟合成的內(nèi)源膽固醇；HDL主要參與膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，即將肝外組織中的膽固醇運(yùn)回肝臟，在肝臟中轉(zhuǎn)化為膽汁酸或直接排出體外。因此血清LDL-C和HDL-C含量反映機(jī)體的膽固醇代謝情況。

研究表明，飼糧添加卵磷脂能夠顯著降低血清TG和HDL-C含量，提高家禽對(duì)脂類物質(zhì)的吸收[19]。由于LPL能增加腸道細(xì)胞膜的通透性并促進(jìn)離子通道的形成[4]，因此LPL就能使游離脂肪酸穿過細(xì)胞膜被吸收，這是血液中膽固醇和TG含量降低的原因之一。Zhang等[11]研究發(fā)現(xiàn)，改良的卵磷脂產(chǎn)品能顯著提高脂肪酸的消化率并能提高代謝能。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加300 mg/kg LPL能顯著降低肉雞35日齡血清TC含量，也有降低42日齡血清TG含量的趨勢(shì)。研究表明，在豬飼糧中添加卵磷脂能夠降低血脂的原因是攝入脂肪的吸收和代謝率較快[20]。LPL降低血脂和膽固醇的機(jī)制可能是乳糜微粒以較快的速率從血液中被清除掉，或者是以較低的速率分泌進(jìn)入血液。

3.3 LPL對(duì)肉雞腸道消化酶活性的影響

消化酶負(fù)責(zé)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和利用，因此它們的活性高低可以用于評(píng)估動(dòng)物體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)狀況和生長(zhǎng)性能。脂肪酶在分解飼糧中脂肪(尤其是TG)的過程中發(fā)揮重要作用。飼糧添加6%、9%和12%的大豆卵磷脂均能夠提高里海鱒魚的脂肪酶活性[21]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在肉雞飼糧中添加300 mg/kg LPL能顯著提高其回腸食糜中脂肪酶的活性。淀粉酶的作用是分解飼糧中的碳水化合物。Adel等[22]研究發(fā)現(xiàn)，在鯉魚飼料中添加大豆卵磷脂能提高其淀粉酶的活性。Haghparast等[21]研究表明，大豆卵磷脂有提高里海褐鱒淀粉酶活性的趨勢(shì)。本研究結(jié)果表明，肉雞飼糧添加300 mg/kg LPL能顯著提高肉雞42日齡回腸食糜中淀粉酶活性，與前人研究結(jié)果相似。

3.4 LPL對(duì)肉雞抗氧化能力的影響

動(dòng)物體內(nèi)活性氧自由基的產(chǎn)生與抗氧化酶[如SOD、過氧化氫酶(CAT)等]之間的平衡若被打破，就會(huì)引起氧化應(yīng)激，并導(dǎo)致組織損傷。自由基是機(jī)體在日常有氧代謝的產(chǎn)物，也是機(jī)體老化的主要原因，自由基可通過一定的條件破壞機(jī)體的氧化還原過程，也會(huì)對(duì)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)造成一定的損壞，影響體內(nèi)正常的生化代謝反應(yīng)，并導(dǎo)致一些疾病的發(fā)生。SOD通過阻止自由基的連鎖反應(yīng)，從而起到對(duì)機(jī)體的保護(hù)作用[23]，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力；GSH-Px是動(dòng)植物體內(nèi)廣泛存在的一種重要的過氧化物分解酶。因此這些抗氧化酶的活性通?？勺鳛楣烙?jì)動(dòng)物機(jī)體抗氧化能力的指標(biāo)。在鯉魚飼料中添加大豆卵磷脂能顯著提高CAT、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)和SOD活性[21]；在里海褐鱒飼料中添加大豆磷脂也能顯著提高CAT、GST等抗氧化酶的活性[21]。本試驗(yàn)結(jié)果也表明，飼糧添加LPL能夠顯著提高肉雞28和35日齡胸肌和肝臟GSH-Px活性，顯著提高28和35日齡肝臟SOD活性。以上研究都說明大豆卵磷脂或者LPL能提高動(dòng)物的抗氧化能力，這能增強(qiáng)細(xì)胞抗氧化應(yīng)激的能力，并降低脂質(zhì)的過氧化反應(yīng)，最終提高細(xì)胞活力。

4 結(jié) 論

當(dāng)飼糧表觀代謝能為13.19 MJ/kg時(shí)，飼糧添加LPL可改善肉雞生長(zhǎng)性能，提高肉雞腸道消化酶活性及機(jī)體抗氧化能力，其最適添加水平為300 mg/kg(有效成分含量為105 mg/kg)。