劉栩州 鞠 瑩 黃麗玲 羅陽蘭 劉明智 薄佳寧 周同宇 張宇峰 劉 闖 馮明明 閻 勇*

(1.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所，南寧530007；2.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣西作物遺傳改良生物技術(shù)重點(diǎn) 開放實(shí)驗(yàn)室，南寧530007；3.梨樹黑土地健康食品有限公司，四平136500)

2019年，全國飼料總產(chǎn)量為22 885萬t，飼料工業(yè)總產(chǎn)值已經(jīng)達(dá)到8 088億元[1]。我國飼料產(chǎn)業(yè)龐大，但同時(shí)我國也是一個(gè)飼料資源尤其是優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)原料匱乏的國家。每年我國糧油飼料資源進(jìn)口量都在1億t以上，對進(jìn)口的嚴(yán)重依賴也制約了我國飼料行業(yè)長久、健康的發(fā)展[2]。

豆粕與其他植物源性蛋白質(zhì)原料相比較，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值，如較高的賴氨酸和蛋白質(zhì)含量，且氨基酸組成均衡，但同時(shí)豆粕也含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子和致敏因子等，這些物質(zhì)的存在會(huì)引起仔豬的過敏反應(yīng)，很大程度上影響了營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收，嚴(yán)重時(shí)還能引起腹瀉[3]，這些因素都限制了豆粕在仔豬階段的大量添加。針對目前存在的問題，如何去除豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高其營養(yǎng)價(jià)值和擴(kuò)大應(yīng)用范圍，具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。發(fā)酵無疑是去除豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子的一種經(jīng)濟(jì)且有效的手段，隨著研究的深入，發(fā)酵豆粕技術(shù)日漸成熟，在亞洲和美國的養(yǎng)殖業(yè)中得到了大規(guī)模的應(yīng)用[4]。

近些年，發(fā)酵豆粕技術(shù)在我國也得到了長足的進(jìn)步和發(fā)展，但整個(gè)行業(yè)研發(fā)和產(chǎn)業(yè)化水平不高，生產(chǎn)企業(yè)普遍存在：1)菌種方面，發(fā)酵菌種來源不明、不純及退化現(xiàn)象嚴(yán)重；2)工藝方面，未經(jīng)過嚴(yán)格的工藝匹配，往往進(jìn)行粗放式自然發(fā)酵，生產(chǎn)工藝的不穩(wěn)定致使揮發(fā)性鹽基氮、霉菌毒素及有害微生物超標(biāo)嚴(yán)重[5]。這些不穩(wěn)定因素嚴(yán)重制約了發(fā)酵豆粕在養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用。混菌發(fā)酵是近年來飼料行業(yè)研究的熱點(diǎn)，混菌發(fā)酵不僅可降低豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高營養(yǎng)價(jià)值，還可保留一定量的有益菌。本試驗(yàn)采用納豆芽孢桿菌和嗜酸乳酸桿菌作為發(fā)酵菌種，采用兩步法發(fā)酵制備發(fā)酵豆粕，并通過仔豬生長試驗(yàn)驗(yàn)證飼喂效果，旨在為飼料行業(yè)的發(fā)展提供一些借鑒和參考。

1 材料與方法

1.1 發(fā)酵豆粕的制備

本試驗(yàn)中所用發(fā)酵豆粕是由分離自健康豬腸道的納豆芽孢桿菌(Bacillussubtilisnatto)和嗜酸乳酸桿菌(Lactobacillusacidophilus)進(jìn)行兩步發(fā)酵后獲得。

首先是菌種擴(kuò)大培養(yǎng)，把斜面保藏的納豆芽孢桿菌接種于LB培養(yǎng)基中，然后置于恒溫振蕩搖床中，在180 r/min及36 ℃條件下培養(yǎng)18 h；嗜酸乳酸桿菌接種于MRS培養(yǎng)基中，在厭氧瓶中35 ℃條件下靜置培養(yǎng)20 h。實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的菌種通過鏡檢達(dá)到要求后，分別接種于5 m3的不銹鋼通風(fēng)發(fā)酵罐，以及5 m3的厭氧發(fā)酵罐中(通入無菌氮?dú)?。

接下來是固體發(fā)酵階段，豆粕經(jīng)過紫外線照射滅菌后，與水和納豆芽孢桿菌菌液(1×109CFU/mL)按照體積比100.0∶80.0∶0.5的比例經(jīng)過連續(xù)混料機(jī)混合均勻，再通過物料輸送設(shè)備輸送至履帶式發(fā)酵機(jī)上，通過布料板保持履帶上物料厚度為20 cm?？刂瓢l(fā)酵室的溫度為30 ℃，相對濕度為70%，并通入無菌空氣保持一定的氧氣濃度，好氧發(fā)酵階段持續(xù)時(shí)間為24 h。第1階段發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵機(jī)上的物料輸送至混料機(jī)，按照體積比100.0∶0.5比例與嗜酸乳酸桿菌菌液(1×109CFU/mL)混合均勻后輸送至下一發(fā)酵室。保持溫度和相對濕度恒定，然后緩慢通入無菌氮?dú)膺M(jìn)行48 h厭氧發(fā)酵。72 h的固體發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵產(chǎn)物通過三回程滾筒干燥機(jī)進(jìn)行低溫(55 ℃)干燥，再粉碎既得成品。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選用120頭28日齡、初始體重為(6.72±1.06) kg的健康三元雜交(杜×長×大)斷奶仔豬，隨機(jī)分為4組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5頭豬。試驗(yàn)期為28 d，分為2個(gè)階段，第1～14天為試驗(yàn)前期，第15～28天為試驗(yàn)后期。

試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。各組飼糧均滿足NRC(2012)推薦的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，其中試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組及試驗(yàn)3組分別以4.87%、9.74%和14.61%的發(fā)酵豆粕替代基礎(chǔ)飼糧中6%、12%和18%的豆粕，并保證蛋白質(zhì)原料為各組飼糧提供相同含量的粗蛋白質(zhì)。各組飼糧均添加0.3%的三氧化二鉻作為指示劑，用以測定營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平(飼喂基礎(chǔ))

每個(gè)重復(fù)的5頭豬處于同一欄中飼養(yǎng)，每欄配有不銹鋼食槽及自動(dòng)飲水器，圈舍環(huán)境溫度控制在(28±2) ℃，相對濕度控制在(60±5)%。所有仔豬自由采食和飲水。試驗(yàn)期間仔豬的消毒、免疫及驅(qū)蟲等工作按照豬場常規(guī)進(jìn)行，每天早晚各打掃1遍圈舍，保持圈舍衛(wèi)生清潔，并根據(jù)測定指標(biāo)記錄日常數(shù)據(jù)。

1.3 樣品采集

在試驗(yàn)的第14天及第28天，每欄選擇1頭與平均體重相近的仔豬，采用前腔靜脈采血方式取10 mL左右血液樣品。靜置2 h后，4 000 r/min、4 ℃條件下離心15 min，即得血清樣品。在試驗(yàn)的第13～14天及第27～28天，收集每欄豬糞便樣品，并置于-20 ℃保存，用于測定營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率。

試驗(yàn)結(jié)束后，每欄選出與平均體重相近的仔豬，每組從中選擇4頭進(jìn)行屠宰，分別取十二指腸、空腸和回腸樣品，用生理鹽水清洗后，浸泡在10%福爾馬林溶液中保存，用于制作組織切片。再使用載玻片分別刮取腸黏膜樣品(十二指腸、空腸和回腸)，立即置于液氮中保存，用于測定腸道炎性因子含量和消化酶活性。最后，再分別收集盲腸和結(jié)腸食糜樣品，置于-20 ℃冰箱保存，用于測定短鏈脂肪酸含量。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 生長性能及腹瀉率

在試驗(yàn)第1天、第14天和第28天的08：00對仔豬進(jìn)行空腹稱重，同時(shí)記錄飼料消耗量，用以計(jì)算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、增重耗料比(G/F)。每日09:00和16:00，檢查每1頭仔豬肛門，觀察有無腹瀉情況并記錄，結(jié)束試驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)腹瀉仔豬頭數(shù)，腹瀉率計(jì)算公式如下：

腹瀉率(%)=100×仔豬腹瀉頭次總和/

(仔豬頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù))。

1.4.2 豆粕、發(fā)酵豆粕和飼糧中化學(xué)成分

干物質(zhì)含量參照GB/T 6435—2006、粗蛋白質(zhì)含量參照GB/T 6432—1994、粗脂肪含量參照GB/T 6433—2006、總能參照ISO 9831:1998、粗灰分含量參照GB/T 6438—2007、中性洗滌纖維含量參照GB/T 20806—2006、酸性洗滌纖維含量參照NY/T 1459—2007、酸溶蛋白含量參考GB/T 22492—2008、乳酸桿菌活菌數(shù)參照GB 4789.35—2016測定。

除含硫氨基酸和色氨酸外的15種氨基酸含量參照GB/T 18246—2000進(jìn)行測定：樣品先在6 mol/L鹽酸、110 ℃條件下水解24 h，再使用日立L-8900型氨基酸自動(dòng)分析儀進(jìn)行測定。含硫氨基酸依據(jù)GB/T 15399—94進(jìn)行測定：樣品置于0 ℃條件下，用甲酸氧化16 h后，再經(jīng)鹽酸水解24 h，同樣使用日立L-8900型氨基酸自動(dòng)分析儀進(jìn)行測定。色氨酸含量依據(jù)GB/T 18246—2000中附錄A的方法進(jìn)行測定：樣品在110 ℃條件下，經(jīng)4 mol/L氫氧化鈉水解22 h，再用安捷倫1200型高效液相色譜進(jìn)行測定。

1.4.3 腸道食糜中短鏈脂肪酸含量

短鏈脂肪酸含量根據(jù)Wu等[6]的方法測定：將冷凍的食糜置于4 ℃條件下解凍，再稱取食糜樣品0.5 g左右于10 mL離心管中，加入8 mL超純水，置于超聲儀中超聲30 min，5 000 r/min、4 ℃條件下離心10 min，吸取上清液，稀釋50倍后過濾，使用賽默飛ICS3000型離子色譜儀進(jìn)行測定。

1.4.4 血清生化指標(biāo)

血清免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)及免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)使用松上A6型半自動(dòng)生化儀進(jìn)行測定。血清谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、過氧化氫酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性以及總抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量按照試劑盒(南京建成生物工程研究所)所列出的步驟進(jìn)行測定。

1.4.5 腸黏膜中消化酶活性、炎性因子含量

腸黏膜消化酶活性根據(jù)試劑盒的說明書(南京建成生物工程研究所)，通過比色法進(jìn)行測定。腸黏膜炎性因子[白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和干擾素-γ(interferon-γ,IFN-γ)]含量采用試劑盒(南京建成生物工程研究所)測定。

1.4.6 腸道形態(tài)學(xué)觀察

首先把腸道樣品進(jìn)行酒精脫水，再通過二甲苯進(jìn)行透明處理，然后進(jìn)行石蠟包埋，切成6 μm組織切片后，進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色。在顯微鏡下，每個(gè)切片選取5個(gè)清晰完整的視野，測定絨毛高度和隱窩深度，并計(jì)算絨腺比(即絨毛高度/隱窩深度)。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

采用SAS 9.2統(tǒng)計(jì)軟件中的ANOVA程序?qū)?shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，并采用Tukey法進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)結(jié)果采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。以P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 豆粕發(fā)酵后化學(xué)成分變化

由表2可以看出，豆粕經(jīng)過發(fā)酵后，粗蛋白質(zhì)和酸溶蛋白含量分別增加了12.84%和5.45倍，大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白和水蘇糖含量分別降低了99.18%、91.69%和97.09%，而棉子糖和胰蛋白酶抑制劑則完全被降解；另外，賴氨酸、蛋氨酸和蘇氨酸的含量分別提高了4.29%、16.21%和21.97%，乳酸桿菌活菌數(shù)達(dá)到1×107CFU/g。

表2 豆粕與發(fā)酵豆粕化學(xué)成分比較

2.2 發(fā)酵豆粕對斷奶仔豬生長性能和腹瀉率的影響

如表3所示，各組仔豬初始體重差異不顯著(P>0.05)。與對照組相比，各試驗(yàn)組仔豬終末體重有所升高，且試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組顯著高于對照組(P<0.05)。在試驗(yàn)前期，與對照組及試驗(yàn)1組相比，試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組的ADG顯著提高(P<0.05)，腹瀉率顯著降低(P<0.05)，同時(shí)試驗(yàn)3組的G/F也顯著提高(P<0.05)。在試驗(yàn)后期，各組ADG、ADFI、G/F及腹瀉率差異都不顯著(P>0.05)。從全期來看，與對照組和試驗(yàn)1組相比，試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組的ADG顯著提高(P<0.05)，腹瀉率顯著降低(P<0.05)，同時(shí)試驗(yàn)3組的G/F也顯著提高(P<0.05)。

表3 發(fā)酵豆粕對斷奶仔豬生長性能和腹瀉率的影響

2.3 發(fā)酵豆粕對斷奶仔豬營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

如表4所示，在試驗(yàn)第14天，與對照組相比，各試驗(yàn)組干物質(zhì)、總能、粗蛋白質(zhì)和有機(jī)物的表觀消化率均顯著提高(P<0.05)。在試驗(yàn)第28天，試驗(yàn)3組總能和有機(jī)物的表觀消化率顯著高于對照組和試驗(yàn)1組(P<0.05)，與試驗(yàn)2組差異不顯著(P>0.05)。

表4 發(fā)酵豆粕對斷奶仔豬營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

2.4 發(fā)酵豆粕對斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

如表5所示，在試驗(yàn)第14天，與對照組相比，試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組血清中IgA含量和SOD活性顯著提高(P<0.05)。另外，與對照組相比，各試驗(yàn)組血清中IgM含量均顯著提高(P<0.05)，且試驗(yàn)3組血清中GSH-Px活性顯著提高(P<0.05)。在試驗(yàn)第28天，與對照組相比，各試驗(yàn)組血清中GSH-Px活性顯著提高(P<0.05)，同時(shí)試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組血清中T-AOC顯著提高(P<0.05)。

表5 發(fā)酵豆粕對斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

2.5 發(fā)酵豆粕對斷奶仔豬腸道食糜中短鏈脂肪酸含量的影響

如表6所示，與對照組相比，試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組盲腸食糜中丁酸含量顯著提高(P<0.05)。

表6 發(fā)酵豆粕對斷奶仔豬腸道食糜中短鏈脂肪酸含量的影響

2.6 發(fā)酵豆粕對斷奶仔豬腸黏膜中消化酶活性的影響

如表7所示，與對照組相比，各試驗(yàn)組十二指腸和空腸黏膜中胰蛋白酶活性均顯著提高(P<0.05)，同時(shí)試驗(yàn)3組十二指腸黏膜以及試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組空腸黏膜中蛋白酶活性也顯著提高(P<0.05)。

表7 發(fā)酵豆粕對斷奶仔豬腸黏膜中消化酶活性的影響

2.7 發(fā)酵豆粕對斷奶仔豬腸道形態(tài)的影響

如表8所示，與對照組相比，各試驗(yàn)組十二指腸絨毛高度和絨腺比以及空腸絨毛高度均顯著提高(P<0.05)，且試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組十二指腸隱窩深度顯著降低(P<0.05)。

表8 發(fā)酵豆粕對斷奶仔豬腸道形態(tài)的影響

2.8 發(fā)酵豆粕對斷奶仔豬腸黏膜中炎性因子含量的影響

如表9所示，與對照組相比，各試驗(yàn)組空腸黏膜中TNF-α含量顯著提高(P<0.05)。

表9 發(fā)酵豆粕對斷奶仔豬腸黏膜中炎性因子含量的影響

3 討 論

Chi等[3]研究發(fā)現(xiàn)，豆粕經(jīng)過芽孢桿菌和乳酸桿菌發(fā)酵后，抗?fàn)I養(yǎng)因子和抗原蛋白大部分被降解，豆粕的營養(yǎng)價(jià)值得到了提升。而Yuan等[7]也發(fā)現(xiàn)，豆粕經(jīng)過發(fā)酵后大豆肽的含量提高了6倍，本試驗(yàn)結(jié)果與以上研究結(jié)果相一致。本試驗(yàn)所用發(fā)酵豆粕為采用兩步發(fā)酵法制備，該工藝可充分考慮了好氧菌(納豆芽孢桿菌)和厭氧菌(嗜酸乳酸桿菌)不同的環(huán)境條件，先由芽孢桿菌對豆粕進(jìn)行好氧發(fā)酵，再與乳酸桿菌混合均勻后，在無氧條件下進(jìn)行厭氧發(fā)酵；并且，對整個(gè)發(fā)酵過程的溫度、濕度及通風(fēng)等條件進(jìn)行控制，通過兩步發(fā)酵最大程度滿足不同益生菌對不同生長環(huán)境的需要。經(jīng)兩步法發(fā)酵后，豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子含量降低，營養(yǎng)物質(zhì)含量升高。這主要原因是由于芽孢桿菌、乳酸桿菌能夠分泌豐富的酶類物質(zhì)，如蛋白酶等，這些酶能夠把一些諸如抗原蛋白等大分子蛋白質(zhì)降解，轉(zhuǎn)化為易于吸收的肽類等物質(zhì)[8]。另外，豆粕經(jīng)過發(fā)酵后還含有一定量的乳酸桿菌活菌，而目前乳酸桿菌已經(jīng)成為飼料中應(yīng)用最廣的益生菌制劑，大量的研究報(bào)道其可以提高豬的生長性能、飼料轉(zhuǎn)化率、營養(yǎng)物質(zhì)消化率，并可以調(diào)節(jié)免疫及改善腸道健康等[9]。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，發(fā)酵豆粕可以顯著提高仔豬的生長性能，同時(shí)降低腹瀉率。這和先前的一些研究結(jié)果相一致，如Kim等[10]和Zhang等[11]發(fā)現(xiàn)發(fā)酵豆粕可以顯著提高豬的ADG和G/F。發(fā)酵豆粕對生長性能的提高很大程度上是由于發(fā)酵去除了豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，提升了豆粕的營養(yǎng)價(jià)值；另外，益生菌也會(huì)對提高生長性能起到一定作用，如Pollmann等[12]研究發(fā)現(xiàn)，在斷奶仔豬飼糧中添加乳酸桿菌能夠提高其ADG和G/F，而乳酸桿菌能夠提高生長性能，主要在于乳酸桿菌改善了豬的腸道福利[9]。

Song等[13]研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵豆粕能夠顯著降低仔豬腹瀉率，本試驗(yàn)結(jié)果也得出同樣的結(jié)論。發(fā)酵豆粕降低仔豬腹瀉率的原因很大程度上是因?yàn)槎蛊赏ㄟ^發(fā)酵后極大地降解了如大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白等抗原蛋白；另外，發(fā)酵豆粕中的益生菌能夠在一定程度上抑制致病菌的增殖[14]，從而達(dá)到了降低腹瀉率的作用。

本試驗(yàn)中對照組的營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率最低，其原因在于豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子、胰蛋白酶抑制劑以及一些難以消化的蛋白質(zhì)、糖類等的存在[15]。Teng等[16]認(rèn)為，發(fā)酵可以除去豆粕中的胰蛋白酶抑制劑，而這能夠提高蛋白質(zhì)的消化率。同時(shí)，乳酸桿菌、小肽和酶等物質(zhì)對提高營養(yǎng)物質(zhì)消化率也可能起到了一定的促進(jìn)作用[7]。Zhao等[17]認(rèn)為，乳酸桿菌作為益生菌可以提高諸如β-半乳糖苷酶的活性，這會(huì)促進(jìn)胃腸道蠕動(dòng)，從而提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化率。

抗氧化酶活性在一定程度上能夠反映仔豬的氧化應(yīng)激程度。在本試驗(yàn)中，飼糧中添加發(fā)酵豆粕增加了斷奶仔豬血清中SOD和GSH-Px的活性，這也說明發(fā)酵豆粕可以在一定程度上緩解仔豬的氧化應(yīng)激。而T-AOC反映的是非酶抗氧化系統(tǒng)，發(fā)酵豆粕對于斷奶仔豬血清中T-AOC的提高，說明發(fā)酵豆粕也可以在一定程度上防止內(nèi)源性脂質(zhì)的氧化和過氧化。

發(fā)酵豆粕能夠提高斷奶仔豬血清中IgA和IgM含量，說明發(fā)酵豆粕可以促進(jìn)仔豬的免疫系統(tǒng)發(fā)育，增強(qiáng)免疫功能。豆粕中含有大量的大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白，二者的存在會(huì)損壞仔豬的免疫系統(tǒng)，而發(fā)酵對這些抗?fàn)I養(yǎng)因子的降解是仔豬免疫功能改善的最大原因[18]。

短鏈脂肪酸是豬后腸道中微生物的發(fā)酵產(chǎn)物，短鏈脂肪酸大約能夠提供機(jī)體所需維持能量的10%。本試驗(yàn)中，發(fā)酵豆粕提高了斷奶仔豬盲腸食糜中丁酸含量，這一結(jié)果和Xie等[19]的研究結(jié)果是一致的。Meimandipour等[20]認(rèn)為，乳酸桿菌分泌的乳酸能夠促進(jìn)腸道中產(chǎn)生丁酸的細(xì)菌的增殖，從而提高食糜中丁酸的含量。

胰蛋白酶抑制劑能夠抑制胰蛋白酶的活性，本試驗(yàn)中豆粕通過發(fā)酵后，胰蛋白酶抑制劑被完全降解，結(jié)果顯示斷奶仔豬十二指腸和空腸黏膜中胰蛋白酶活性提高，這符合試驗(yàn)預(yù)期。

腸道絨毛高度、隱窩深度和絨腺比是重要的形態(tài)學(xué)指標(biāo)，可以一定程度上反映腸道的屏障功能和吸收功能[18]。而豆粕中的抗原蛋白會(huì)通過損壞腸道正常形態(tài)影響機(jī)體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵豆粕可以改善斷奶仔豬十二指腸和空腸的形態(tài)，說明發(fā)酵豆粕能夠在一定程度上促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。

促炎細(xì)胞因子(IL-1β、TNF-α和IFN-γ)在介導(dǎo)炎癥反應(yīng)中至關(guān)重要，而斷奶應(yīng)激會(huì)促進(jìn)仔豬腸道內(nèi)炎性因子的表達(dá)[22]。本試驗(yàn)中發(fā)酵豆粕減少了空腸黏膜中TNF-α的含量，說明發(fā)酵豆粕能夠在一定程度上調(diào)節(jié)斷奶仔豬腸道黏膜的炎癥反應(yīng)。

發(fā)酵豆粕與未發(fā)酵豆粕相比，除營養(yǎng)成分含量存在差異外，一些性狀及功能性物質(zhì)含量也會(huì)有變化。如Amadou等[23]研究發(fā)現(xiàn)，使用植物乳桿菌發(fā)酵大豆蛋白粉，其功能性狀發(fā)生了很大變化，如體外蛋白質(zhì)消化率、可溶性氮含量及乳化活性等。并且，大豆蛋白粉在微生物發(fā)酵和蛋白酶酶解共同作用下，顯示出了更高的變性溫度(103.77 ℃)，而未經(jīng)處理的大豆蛋白粉變性溫度為61.67℃。另外，Moktan等[24]對Kinema(一種類似豆豉的大豆發(fā)酵食物)進(jìn)行的研究顯示，與未發(fā)酵大豆相比，其總酚含量提高了1.44倍，抗氧化活性也有顯著提高。目前，關(guān)于發(fā)酵豆粕功能性物質(zhì)含量及性狀變化還缺少相關(guān)資料，期待未來更進(jìn)一步深入研究。

4 結(jié) 論

① 豆粕經(jīng)納豆芽孢桿菌和嗜酸乳酸桿菌兩步發(fā)酵后營養(yǎng)品質(zhì)得到提升。

② 在本試驗(yàn)條件下，斷奶仔豬飼糧中添加本試驗(yàn)所制備的兩步法發(fā)酵豆粕可提高28～56日齡斷奶仔豬的生長性能、營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率并降低腹瀉率，同時(shí)還可提高腸黏膜消化酶活性，改善腸道形態(tài)，其中添加9.74%和14.61%的發(fā)酵豆粕在改善仔豬生長性能等方面的效果要優(yōu)于添加4.87%的發(fā)酵豆粕。綜合考慮成本因素，推薦仔豬飼糧中以9.74%的發(fā)酵豆粕替代12%的豆粕使用。