柳詩(shī)怡，張玉泉

(南通大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇 南通 226001)

干細(xì)胞具有自我復(fù)制，多向分化及免疫調(diào)節(jié)潛能，能趨化至損傷部位，主要利用其細(xì)胞分化和旁分泌作用修復(fù)受損的組織和器官[1-2]。干細(xì)胞為傳統(tǒng)的疾病治療提供了新的技術(shù)手段，目前臨床上已經(jīng)將干細(xì)胞技術(shù)應(yīng)用于各種疾病的治療，如骨折愈合、心肌修復(fù)、血管生成、周?chē)窠?jīng)再生和抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展等[3-5]，并取得良好的治療效果，成為再生醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn)，其應(yīng)用也正逐漸被大眾認(rèn)可。同時(shí)，伴隨干細(xì)胞治療技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)安全性問(wèn)題日漸引起人們的重視。目前對(duì)于干細(xì)胞的研究局限于干細(xì)胞應(yīng)用引發(fā)的安全性問(wèn)題，對(duì)于影響干細(xì)胞安全性因素的研究甚少，或僅局限于其中一種因素的分析?，F(xiàn)就干細(xì)胞應(yīng)用安全性及其影響因素的研究進(jìn)行綜述，以綜合分析各影響因素及其之間的相互作用、評(píng)估干細(xì)胞治療技術(shù)的效果，并有望在未來(lái)拓寬干細(xì)胞應(yīng)用的領(lǐng)域，提高其臨床治療的安全性，為疾病治療提供更有效的治療手段。

1 干細(xì)胞臨床應(yīng)用的安全性

干細(xì)胞治療臨床應(yīng)用中存在致瘤性、移植物抗宿主病(graft versus host disease，GVHD)、血栓等安全性問(wèn)題，其中以致瘤性為主。干細(xì)胞可能具有促進(jìn)腫瘤發(fā)生的作用，一般可分化成畸胎瘤、畸胎癌和繼發(fā)性腫瘤[6]，干細(xì)胞在應(yīng)用前多經(jīng)過(guò)連續(xù)傳代擴(kuò)增，長(zhǎng)期的體外培養(yǎng)導(dǎo)致細(xì)胞端粒長(zhǎng)度變化，染色體不穩(wěn)定性增加，易引發(fā)基因突變，最終導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化[7]；除致瘤性問(wèn)題外，干細(xì)胞移植還會(huì)發(fā)生GVHD；此外，血栓問(wèn)題也偶有發(fā)生，因?yàn)楦杉?xì)胞輸入體內(nèi)后易分布在肺、脾、腎和皮膚等血供豐富的器官，當(dāng)大量干細(xì)胞在臟器內(nèi)滯留時(shí)，可導(dǎo)致局部小血管內(nèi)血栓形成[8]。除上述安全性問(wèn)題外，變態(tài)反應(yīng)、頭痛、腰痛等也有發(fā)生，但一般不會(huì)對(duì)患者產(chǎn)生嚴(yán)重影響，一段時(shí)間后癥狀可自行消失。

2 影響干細(xì)胞臨床應(yīng)用安全性的因素

2.1干細(xì)胞種類(lèi) 目前廣泛應(yīng)用于臨床的干細(xì)胞主要有間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)、胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells，ESCs)、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)等，其中以MSCs為主。干細(xì)胞臨床應(yīng)用的安全性因干細(xì)胞種類(lèi)不同而有所差異，MSCs主要引發(fā)致瘤性和血栓，造血干細(xì)胞(hematopoietic stem cells，HSCs)則主要引起GVHD，而ESCs及iPSCs主要促進(jìn)畸胎瘤的發(fā)生發(fā)展。

2.1.1MSCs MSCs是成體、成纖維細(xì)胞樣的多能細(xì)胞，來(lái)源廣泛、易于分離和擴(kuò)增、免疫原性低，具有旁分泌和廣泛的免疫調(diào)節(jié)能力[9]，可從多種成人和胎兒組織(如骨髓、脂肪、臍帶血、胎兒肺、胎盤(pán)、羊水)中分化而來(lái)[10]，在疾病治療和組織工程等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。其中，以骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(umbilical cord mesenchymal stem cells，UC-MSCs)及脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose mesenchymal stem cells，ADMSCs)的臨床應(yīng)用最為廣泛。然而，有研究顯示，干細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞具有很多的相似特性，如能夠持續(xù)增殖(具有自我復(fù)制能力)、抗凋亡、壽命長(zhǎng)、生長(zhǎng)調(diào)控機(jī)制相似[11]，且腫瘤是干細(xì)胞的觀(guān)點(diǎn)正在被人們逐漸接受[12]，由此可見(jiàn)，MSCs并只是促進(jìn)愈合。研究發(fā)現(xiàn)，MSCs和癌細(xì)胞之間存在相互作用，MSCs可促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖分化，癌細(xì)胞也可引發(fā)正常MSCs向癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化[13]。除致瘤性外，應(yīng)用后MSCs也偶有血栓發(fā)生。

MSCs應(yīng)用的短期安全性已證實(shí)[14]，但對(duì)其長(zhǎng)期安全性的認(rèn)識(shí)尚不一致。近年研究提示，MSCs可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生[15-16]。BMSCs可促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞株的增殖[17]；乳腺癌細(xì)胞與BMSCs相互作用后也可增加腫瘤細(xì)胞的干性、遷移能力、血管生成和耐藥性[18]。Melzer等[19]將人UC-MSCs與MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，與單獨(dú)培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞相比，共培組乳腺癌細(xì)胞數(shù)量隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加，增殖逐漸活躍，且共培組轉(zhuǎn)移能力相關(guān)乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物增加；此外，共培組小鼠體內(nèi)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯增加，且乳腺癌細(xì)胞的多器官轉(zhuǎn)移速度加快。Chen等[20]將MCF-7乳腺癌細(xì)胞與ADMSCs共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，MCF-7乳腺癌細(xì)胞促腫瘤球形成的能力顯著提高；與單獨(dú)注射MCF-7乳腺癌細(xì)胞相比，MCF-7乳腺癌細(xì)胞和ADMSCs聯(lián)合注射誘導(dǎo)動(dòng)物體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)速度加快的作用明顯增強(qiáng)。

除致瘤性外，MSCs還可引發(fā)血栓微血管病，并促進(jìn)血栓發(fā)生。王楠等[21]經(jīng)鼠尾靜脈注射BMSCs后發(fā)現(xiàn)，BMSCs主要集中在肺部，而肺部血流量豐富，肺部血栓的發(fā)生率也隨之增加。蘇仲奕等[22]經(jīng)尾靜脈注射UC-MSCs后，發(fā)現(xiàn)UC-MSCs在大鼠肺部積聚。Jung等[23]報(bào)道，1例41歲男性胸痛患者的CT顯示右肺多發(fā)肺動(dòng)脈栓塞和梗死，患者自述因患有頸椎間盤(pán)突出癥曾接受3次人ADMSCs靜脈注射治療；且其父母也接受了5次人ADMSCs靜脈注射治療，CT也顯示多重肺栓塞表現(xiàn)，在排除所有可能的誘發(fā)因素后，臨床認(rèn)為其肺動(dòng)脈栓塞和梗死可能與人ADMSCs治療有關(guān)。在培養(yǎng)過(guò)程中，MSCs體積有所改變，而MSCs體積增大后，不易通過(guò)一些細(xì)小血管，繼而聚集成細(xì)胞團(tuán)塊而阻塞血管影響血流，從而引發(fā)血栓微血管病。

2.1.2HSCs HSCs具有自我更新能力以及多能性[24]，根據(jù)其來(lái)源分為自體造血干細(xì)胞和異體造血干細(xì)胞。目前對(duì)HSCs移植治療疾病的認(rèn)識(shí)和應(yīng)用已取得很大進(jìn)展，但這種療法依然存在一些嚴(yán)重的并發(fā)癥。由于HSCs大部分處于靜息狀態(tài)，受損DNA傾向于采用非同源末端連接的方式進(jìn)行DNA修復(fù)，此方式存在錯(cuò)配可能，從而無(wú)法有效進(jìn)行DNA同源重組，因此，老化的HSCs更易發(fā)生突變，以致基因組不穩(wěn)定，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。除致瘤性外，HSCs移植還可能引發(fā)急慢性GVHD。異體造血干細(xì)胞移植發(fā)生GVHD的概率很高，其中急慢性GVHD的發(fā)生率分別為20%～60%及50%左右,致死性GVHD發(fā)生率為5%～20%[25]。將HSCs用于19例兒童重型再生障礙性貧血的臨床治療，結(jié)果顯示，Ⅰ度急性GVHD 9例，Ⅱ度以上急性GVHD 10例，其中1例發(fā)生Ⅲ度急性GVHD并于移植后6個(gè)月發(fā)生廣泛型慢性GVHD[26]。雖然自體造血干細(xì)胞不會(huì)發(fā)生GVHD，但會(huì)減少移植物抗白血病發(fā)生，且惡性腫瘤患者骨髓或外周血中殘存的癌細(xì)胞可能誘導(dǎo)自體HSCs突變，導(dǎo)致惡性疾病復(fù)發(fā)[27]。

2.1.3ESCs 第一批人類(lèi)ESCs細(xì)胞系由湯姆森實(shí)驗(yàn)室于1998年研制成功，這為許多嚴(yán)重疾病和損傷的治療開(kāi)辟了嶄新時(shí)代[28]。與其他類(lèi)型干細(xì)胞相比，ESCs具有更高的轉(zhuǎn)化潛能、多能性及可塑性。但ESCs是一種未分化的全能細(xì)胞，具有分化成各種類(lèi)型細(xì)胞的能力，同時(shí)具有更高的致瘤性，可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、免疫排斥和GVHD。有研究發(fā)現(xiàn)，體外連續(xù)培養(yǎng)的ESCs易發(fā)生染色體異常[29]，可能在早期傳代時(shí)就已經(jīng)發(fā)生染色體畸變，曾有研究在培養(yǎng)的早期傳代人ESCs中觀(guān)察到三倍體的第17號(hào)染色體[30]。此外，分化不完全的ESCs也存在形成畸胎瘤的風(fēng)險(xiǎn)。將未分化ESCs注射到帕金森小鼠紋狀體的研究顯示，ESCs分化出多巴胺能神經(jīng)元，且20%的小鼠體內(nèi)出現(xiàn)畸胎瘤[31]。需要注意的是，ESCs的可塑性使其能夠分化為數(shù)百種不同的細(xì)胞類(lèi)型，體內(nèi)移植后更加難以控制[32]，這限制了ESCs的臨床應(yīng)用。

2.1.4iPSCs 致瘤性已成為iPSCs與ESCs的一個(gè)共同特性。有研究發(fā)現(xiàn)，人類(lèi)iPSCs的多能性與ESCs相似[33]，其多能性使其具有明顯的畸胎瘤形成趨勢(shì)[34]。人iPSCs是人類(lèi)細(xì)胞治療產(chǎn)品的重要原料，含有殘留未分化的人iPSCs的人類(lèi)細(xì)胞治療產(chǎn)品可導(dǎo)致移植后的腫瘤形成[35]。Ito等[36]使用人iPSCs中提取的心肌細(xì)胞治療心力衰竭時(shí)發(fā)現(xiàn)，基于iPSCs的治療，殘余的未分化iPSCs可誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生。對(duì)大量人類(lèi)iPSCs克隆的綜合分析顯示，大量iPSCs細(xì)胞存在染色體畸變，有的來(lái)源于親本細(xì)胞，有的在早期傳代過(guò)程中獲得，有的在長(zhǎng)期培養(yǎng)后才出現(xiàn)[37]。事實(shí)上，iPSCs可能繼承源自其親本體細(xì)胞的染色體畸變，或在早期傳代中表現(xiàn)出染色體畸變，導(dǎo)致腫瘤的形成風(fēng)險(xiǎn)升高，這可能由重組應(yīng)激引起，而重組應(yīng)激由癌基因激活、病毒整合或因已發(fā)生遺傳突變的成熟體細(xì)胞遺傳而引起[38]，導(dǎo)致iPSCs的高致瘤性。

2.2干細(xì)胞輸注劑量 除干細(xì)胞種類(lèi)外，靜脈給藥劑量也是影響干細(xì)胞治療安全性的重要因素之一，干細(xì)胞的輸注數(shù)量以及人體能否耐受大劑量的干細(xì)胞移植均是臨床干細(xì)胞治療需要考慮的問(wèn)題。評(píng)價(jià)人UC-MSCs對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷的療效及其毒性、致瘤性和生物分布的研究發(fā)現(xiàn)，免疫缺陷小鼠靜脈注射高劑量細(xì)胞(1×108個(gè)/kg)后，其體內(nèi)未發(fā)現(xiàn)與人UC-MSCs移植相關(guān)的腫瘤[39]。但也有研究認(rèn)為，輸注過(guò)多干細(xì)胞會(huì)引發(fā)血栓及毒性反應(yīng)，小鼠靜脈注射人UC-MSCs的最大耐受量約為2.0×107個(gè)/kg，食蟹猴單次靜脈滴注人UC-MSCs的近似致死劑量約為1×108個(gè)/kg，推測(cè)其致死原因可能是由于過(guò)多數(shù)量干細(xì)胞在血流豐富臟器滯留導(dǎo)致血栓形成所致[40]。海泉等[41]的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，靜脈注射1.25×108個(gè)/kg及以下干細(xì)胞小鼠均未發(fā)生中毒或死亡；而注射劑量達(dá)到1.40×108個(gè)/kg后，出現(xiàn)中毒癥狀；在急性毒性實(shí)驗(yàn)中，隨著干細(xì)胞注射劑量的增大，中毒的發(fā)生時(shí)間和持續(xù)時(shí)間與干細(xì)胞注射劑量成正比。

2.3干細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)間 體外培養(yǎng)干細(xì)胞的時(shí)間對(duì)腫瘤的發(fā)生也存在影響。有研究報(bào)道，體外培養(yǎng)的MSCs具有生物安全性，培養(yǎng)時(shí)并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)細(xì)胞自發(fā)轉(zhuǎn)化等現(xiàn)象[42]。但有研究卻認(rèn)為，長(zhǎng)期培養(yǎng)的MSCs容易發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)變，且這種自發(fā)轉(zhuǎn)變使MSCs的形態(tài)和表型發(fā)生改變，具有高度致瘤性[43]，并認(rèn)為體外培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng)，MSCs的致瘤潛能越高[44]。有報(bào)道稱(chēng)，長(zhǎng)期體外培養(yǎng)MSCs出現(xiàn)了細(xì)胞自發(fā)性惡性轉(zhuǎn)化，表現(xiàn)為細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)化為圓形上皮樣細(xì)胞，核質(zhì)比增加，端粒酶活性增加，細(xì)胞增殖率升高；將轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞植入重癥聯(lián)合免疫缺陷小鼠模型中，發(fā)現(xiàn)有腫瘤生長(zhǎng)[45]。此外，體外長(zhǎng)期培養(yǎng)BMSCs后，可見(jiàn)c-Myc表達(dá)增加，端粒酶活性上調(diào)[46]；ADMSCs在體外培養(yǎng)8～10周后，端粒酶活性上調(diào)及細(xì)胞周期相關(guān)基因異常，誘導(dǎo)染色體畸變的發(fā)生[47]。因此，找到干細(xì)胞體外培養(yǎng)的最佳時(shí)間，確定不同疾病最適宜的干細(xì)胞代數(shù)，尚需要進(jìn)一步深入研究。

2.4干細(xì)胞體外培養(yǎng)條件 體外培養(yǎng)條件(如培養(yǎng)基的血清成分、氧氣濃度)物理化學(xué)因素也會(huì)影響干細(xì)胞的安全性。首先，擴(kuò)增和培養(yǎng)干細(xì)胞的傳統(tǒng)模式是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加一定比例的動(dòng)物血清，從而實(shí)現(xiàn)干細(xì)胞的快速有效擴(kuò)增。然而動(dòng)物血清成分復(fù)雜，胎牛血清可能存在被支原體、朊病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)[48]；其次，異種屬血清在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)可能存在的免疫排斥、動(dòng)物源性疾病給臨床使用帶來(lái)安全隱患[49]，將在PA6供體層細(xì)胞上培養(yǎng)的ESCs導(dǎo)入動(dòng)物體內(nèi)后，再將分化的細(xì)胞植入體內(nèi)，5周后動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)畸胎瘤[50]。另有研究發(fā)現(xiàn)，在低氧環(huán)境下干細(xì)胞的生物學(xué)特性也會(huì)發(fā)生改變，經(jīng)低氧處理的人ADMSCs具有輕度DNA損傷、遺傳不穩(wěn)定性或染色體畸變風(fēng)險(xiǎn)，且經(jīng)低氧處理的人ADMSCs的腫瘤抑制基因(如p53、p16及p21)表達(dá)較低，人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶缺失，提示缺氧條件下培養(yǎng)的MSCs具有低腫瘤形成風(fēng)險(xiǎn)[51-52]。

2.5干細(xì)胞凍存劑種類(lèi) 許多物質(zhì)可用于干細(xì)胞的凍存保護(hù)，如二甲基亞砜(dimethylsulfoxide，DMSO)、蔗糖、海藻糖、羥乙基淀粉等，其中DMSO應(yīng)用最廣泛。目前，DMSO是多數(shù)冷凍溶液中不可或缺的組成部分。有臨床研究表明，DMSO作為細(xì)胞凍存保護(hù)劑，在臨床使用中存在一定的毒副作用，可能會(huì)改變細(xì)胞的多能性和表觀(guān)遺傳學(xué)特征，移植后的細(xì)胞可能會(huì)發(fā)生不良反應(yīng)[53-56]。鑒于DMSO的不足，新的細(xì)胞保存方案也在不斷地研發(fā)中，Rodrigues等[57]評(píng)估了海藻糖和蔗糖作為凍存保護(hù)劑的凍存安全性，發(fā)現(xiàn)這兩種糖均能降低臍血造血干細(xì)胞輸液產(chǎn)品中DMSO的濃度，加入60 mmol/L蔗糖的5% DMSO具有與10% DMSO相似的克隆形成特性，但克隆形成能力優(yōu)于對(duì)照溶液，且冷凍過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)部冰晶形成減少，從而穩(wěn)定了細(xì)胞膜和蛋白質(zhì)。另外，Richards等[58]也描述了一種安全的異種動(dòng)物ESCs冷凍保存方案，包括在封閉的吸管中玻璃化冷凍，使用人血清白蛋白而不是胎牛血清作為冷凍保護(hù)劑的主要蛋白質(zhì)來(lái)源，并長(zhǎng)期保存。解凍后，人ESCs表現(xiàn)出高解凍存活率和低分化率，能夠保持人ESCs的多能性，并在延長(zhǎng)傳代過(guò)程中保持正常的二倍體核型。

3 提高干細(xì)胞安全性的措施

基于干細(xì)胞安全性的影響因素，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)如何進(jìn)一步提高干細(xì)胞治療的安全性、降低臨床應(yīng)用風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了大量體內(nèi)外研究。

3.1使用高安全性干細(xì)胞 MSCs在人體內(nèi)廣泛存在，可作為以干細(xì)胞為基礎(chǔ)的疾病治療的候選細(xì)胞。近年來(lái)，MSCs的治療潛力及免疫調(diào)節(jié)功能已被揭示。在臨床應(yīng)用上，應(yīng)盡量綜合分析，根據(jù)個(gè)體特征選擇使用安全評(píng)估高的干細(xì)胞。ADMSCs具有易獲取且侵襲性小的優(yōu)勢(shì)，在未來(lái)臨床應(yīng)用中具有廣闊的應(yīng)用空間[59]；BMSCs可以分化成多種類(lèi)型的譜系，如軟骨形成、成骨和脂肪形成[60]。目前認(rèn)為，分化的MSCs更加穩(wěn)定、治療效果更好、安全性更高。人類(lèi)MSCs是異體移植的有利細(xì)胞類(lèi)型，具有較低水平的人類(lèi)白細(xì)胞抗原Ⅰ以及不表達(dá)人類(lèi)白細(xì)胞抗原Ⅱ的免疫優(yōu)勢(shì)，從而降低異體移植排斥反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，預(yù)防GVHD[61]。此外，人類(lèi)MSCs可能表現(xiàn)為多能性標(biāo)志物的高表達(dá)，但目前尚無(wú)其形成畸胎瘤的報(bào)道[62]，故認(rèn)為其畸胎瘤的形成風(fēng)險(xiǎn)較低。其他種類(lèi)干細(xì)胞(如HSCs、ESCs、iPSCs)均會(huì)促使免疫排斥反應(yīng)或畸胎瘤的發(fā)生。

3.2使用分化成熟的干細(xì)胞 Sugai等[63]發(fā)現(xiàn)，無(wú)整合及分化成熟的iPSCs移植可以降低畸胎瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。若行iPSCs移植，應(yīng)控制好干細(xì)胞的培養(yǎng)條件及時(shí)間，并密切觀(guān)察移植后移植分化成熟干細(xì)胞的反應(yīng)，降低臨床應(yīng)用風(fēng)險(xiǎn)?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)多種可以提高iPSCs安全性的措施，如①避免使用c-Myc基因。c-Myc基因是公認(rèn)的癌基因，避免使用c-Myc基因可以提高移植的安全系數(shù)[64]；②以其他介導(dǎo)方式代替反轉(zhuǎn)錄病毒，如腺病毒載體介導(dǎo)[65]、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、RNA轉(zhuǎn)染等；③使用安全性較高的供體等。

3.3使用替代DMSO的低溫凍存保護(hù)劑 DMSO引起的不良反應(yīng)是影響干細(xì)胞移植的重要因素之一[66]，將DMSO濃度降低至10%、5%或更低水平是減輕移植術(shù)后DMSO相關(guān)并發(fā)癥的策略之一，這可以通過(guò)聯(lián)合不同種類(lèi)、不同作用模式的低溫保護(hù)劑來(lái)實(shí)現(xiàn)[67-68]。有研究者建議用糖類(lèi)代替DMSO，如海藻糖和蔗糖、糖醇(甘露醇和山梨醇)等天然、無(wú)毒的低溫保護(hù)劑均對(duì)細(xì)胞具有良好的保護(hù)作用[69]。越來(lái)越多的研究證實(shí)，糖可在低溫保存溶液中替代DMSO，使用蔗糖或海藻糖替代DMSO后，解凍的細(xì)胞在傳代過(guò)程中仍保持正常核型，同時(shí)DMSO濃度的降低在一定程度上減少了不良反應(yīng)發(fā)生[57-58,70]。

3.4多因素綜合考慮 影響干細(xì)胞移植的安全性因素眾多，并不是單一因素的影響，而是各種因素的相互作用。有文獻(xiàn)報(bào)道，至少將5×104個(gè)未分化ESCs注射到小鼠心臟后才觀(guān)察到腫瘤的發(fā)生[32]。另有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，僅將400個(gè)ESCs移植到成年小鼠大腦皮質(zhì)就觀(guān)察到腫瘤[71]，可見(jiàn)僅控制干細(xì)胞的安全注射劑量并不全面，還需考慮疾病類(lèi)型與輸注部位。此外，上述現(xiàn)象也表明，干細(xì)胞治療所致血栓可能并不是其毒性作用所致，而是與干細(xì)胞的輸注濃度、輸注速度及混懸是否均勻有關(guān)[40]。大量研究還表明，MSCs具有免疫抑制能力[72-74]，干細(xì)胞的致瘤性也受到受體免疫條件或應(yīng)答的影響。雖然免疫調(diào)節(jié)和多能分化特性可能使BMSCs成為治療免疫介導(dǎo)疾病的有力候選，但其免疫抑制作用或抑制多種免疫細(xì)胞增殖的潛在機(jī)制也存在觸發(fā)腫瘤發(fā)生或促進(jìn)腫瘤發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)[75]。

4 小 結(jié)

干細(xì)胞治療技術(shù)雖然具有很大的優(yōu)勢(shì)，但其安全性問(wèn)題，尤其是致瘤性，仍然是限制其應(yīng)用的主要因素。目前關(guān)于干細(xì)胞臨床應(yīng)用安全性的研究結(jié)論多局限于治療后的短時(shí)間內(nèi)，此階段干細(xì)胞可能尚未表現(xiàn)出致瘤性的風(fēng)險(xiǎn)。干細(xì)胞種類(lèi)眾多，影響其使用安全性的因素繁雜，如干細(xì)胞的輸注方式、注射部位、治療疾病的類(lèi)型、疾病分期等，故需要擴(kuò)大樣本量、延長(zhǎng)觀(guān)察時(shí)間、綜合考慮影響干細(xì)胞安全性的因素，不斷進(jìn)行深入研究，以評(píng)估干細(xì)胞治療技術(shù)的長(zhǎng)期效果。