胡俊東，吳惠俐，2，呂 浩-3

（1.湖南省森林植物園，湖南 長沙 410116；2.長株潭城市群森林生態(tài)系統(tǒng)國家定位觀測研究站，湖南 長沙 410116；3.中南林業(yè)科技大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，湖南 長沙 410004）

植物整個生命過程中，會遭受各種各樣的逆境脅迫影響，主要逆境環(huán)境因子如干旱、水澇、高溫、低溫、鹽堿脅迫等均限制著植物的生長、發(fā)育、生產(chǎn)力和地理分布，并降低了植物的潛在利用價值。環(huán)境脅迫或病原菌侵染會誘導(dǎo)或抑制植物中一系列具有多種功能的基因的響應(yīng)表達，從而誘導(dǎo)抗逆功能蛋白大量合成，以適應(yīng)環(huán)境或抵御病原菌侵染[1-3]。這些功能蛋白可分為2 類：功能性蛋白和調(diào)節(jié)性蛋白。轉(zhuǎn)錄因子是重要的調(diào)節(jié)蛋白，在誘導(dǎo)抗逆功能基因表達或功能蛋白合成方面發(fā)揮著非常重要的作用。AP2/ERF（APETALA2/ethylene responsive factor）轉(zhuǎn)錄因子家族是植物體中較大且較為重要的轉(zhuǎn)錄因子家族之一，其至少包含1 個由60～70 個氨基酸殘基組成的AP2 保守結(jié)構(gòu)域，這些氨基酸殘基在蛋白功能（如脅迫防御功能）決定方面具有重要作用。根據(jù)編碼蛋白的結(jié)構(gòu)域數(shù)量和基因的功能，AP2/ERF 轉(zhuǎn)錄因子家族可被分為4 個亞家族：AP2、RAV、DREB 和ERF[4-5]。AP2 亞家族轉(zhuǎn)錄因子基因編碼2 個AP2保守結(jié)構(gòu)域，在調(diào)節(jié)生長發(fā)育中具有重要功能，如葉片表皮細胞形成、花和胚珠發(fā)育、小穗分生組織形成和種子生長。RAV 亞家族轉(zhuǎn)錄因子具有1 個AP2 保守結(jié)構(gòu)域和1 個類B3 結(jié)構(gòu)域，在響應(yīng)乙烯、油菜素類固醇以及生物和非生物脅迫反應(yīng)中發(fā)揮作用，且能調(diào)節(jié)靶標(biāo)基因的表達。DREB和ERF 亞家族轉(zhuǎn)錄因子由于參與植物抗生物和非生物脅迫而受到廣泛關(guān)注。DREB 亞家族轉(zhuǎn)錄因子通過識別脫水應(yīng)答元件（dehydration-responsive element，DRE）而在植物抗非生物脅迫中發(fā)揮重要作用，DRE 的核心基序為A/GCCGAC[6]。ERF亞家族轉(zhuǎn)錄因子通過識別順式作用元件GCC box（核心基序為AGCCGCC）參與植物響應(yīng)生物脅迫過程，如病原菌侵染[7]。也有研究報道指出，ERF 亞家族轉(zhuǎn)錄因子具有抗非生物脅迫的功能[8-9]。

目前，ERF 亞家族轉(zhuǎn)錄因子的功能尚不明確，尤其是其在抗非生物脅迫方面的功能。響應(yīng)植物生物和非生物脅迫表達的ERF 轉(zhuǎn)錄因子被大量報道。比如，小麥Triticum aestiνum的TaERF3基因在高鹽和干旱脅迫時上調(diào)表達[8]；番茄Solanum pimpinellifolium的SpERFs基因響應(yīng)高鹽脅迫而表達[9]；蘋果Malus baccata的MbERF11基因超表達能提高擬南芥抗低溫和抗鹽脅迫的能力[3]；水稻Oryza satiνa的OsERF101基因可提高水稻幼苗的抗旱性，從而提高其定植率[10]；橡膠樹Heνea brasiliensis的HbERF1基因為乙烯響應(yīng)基因和耐旱性基因的正調(diào)控子，受脫落酸（ABA）、茉莉酸甲酯（MeJA）、水楊酸（SA）和乙烯（ETH）等激素誘導(dǎo)表達[11]；煙草Nicotiana tabacum的Pti4/5/6 轉(zhuǎn)錄因子能識別致病相關(guān)基因啟動子并與其結(jié)合，增強煙草的抗病性[12]；Tsi1基因在煙草中超表達能提高其抗病原菌侵染和滲透脅迫的能力[1]。轉(zhuǎn)錄因子響應(yīng)逆境脅迫的功能取決于其特殊的氨基酸序列和生物信息結(jié)構(gòu)[6-7]，因此，進行ERF 轉(zhuǎn)錄因子的氨基酸序列分析和生物信息學(xué)分析對預(yù)測其功能具有重要作用。

毛竹Phyllostachys edulis是禾本科Gramineae竹亞科Bambusoideae 剛竹屬Phyllostachys多年生喜溫常綠植物。毛竹原產(chǎn)于中國，其栽培面積大、分布范圍廣、生長速度快，是中國重要的經(jīng)濟竹種[13-15]。然而，自然界中廣泛存在各種非生物脅迫因子（如干旱、低溫、高鹽、洪水、水淹等）和生物脅迫因子（如病原菌侵染等），不利于毛竹的生長發(fā)育，影響了出筍率、竹材材質(zhì)等，還限制了毛竹的分布范圍，嚴(yán)重影響了毛竹的經(jīng)濟和生態(tài)價值。然而，關(guān)于毛竹AP2/ERF 轉(zhuǎn)錄因子家族成員的遺傳結(jié)構(gòu)和功能研究多針對DREB 亞家族轉(zhuǎn)錄因子[16-17]，對于ERF 亞家族轉(zhuǎn)錄因子的研究鮮見報道。本研究中從毛竹幼苗葉片中克隆ERF 轉(zhuǎn)錄因子基因PheERF5并開展生物信息學(xué)分析，旨在為深入研究毛竹ERF 亞家族轉(zhuǎn)錄因子成員的抗逆功能和抗逆機制提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 植物材料培養(yǎng)

毛竹種子采集地點為廣西省桂林市。將毛竹種子置于鋪有無菌濾紙的培養(yǎng)皿中暗培養(yǎng)催芽，約2 周后將毛竹實生苗轉(zhuǎn)移至直徑為15 cm 的塑料花盆中，栽培基質(zhì)為蛭石。于光照恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度為白天25 ℃、夜晚18 ℃，光周期為光16 h、暗8 h，濕度為80%，每周澆1 次Hoagland 營養(yǎng)液。

1.2 PheERF5 基因全長序列克隆

使用Trizol Reagent（Invitrogen 公司）提取毛竹實生苗葉片總RNA，使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Promega公司）合成cDNA 第一鏈，合成產(chǎn)物置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。根?jù)毛竹基因組數(shù)據(jù)庫中PheERF5基因的CDS 序列，通過引物設(shè)計軟件Primer 5 設(shè)計PCR 特異擴增引物，引物由上海生工生物工程有限公司合成?？寺∫餅镻heERF5-BamHI-F（5′TAGGATCCATGAATAGCGTGCAGG AAGAA3′）、PheERF5-HindIII-R（5′ATAAGCTT TTAAGCCTCCAGATCGGTGAA3′）。上游引物5′端加BamHI 酶切位點，下游引物5′端加HindIII酶切位點。

通過RT-PCR反應(yīng)擴增目的基因。PCR擴增反應(yīng)體系：10 μL 2×PCR 混合緩沖液（Mg2+15 μmol/L）、1 μL 正向引物（10 pmol/L）、1 μL 反向引物（10 pmol/L）、2 μL 模板cDNA、6 μL ddH2O，總體積20 μL。擴增條件：95 ℃預(yù)變性5 min，然后94 ℃ 30 s，60 ℃ 40 s，72 ℃ 1 min，共35 個循環(huán)，再72 ℃延伸10 min。反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)0.8%的瓊脂糖凝膠電泳分析后，使用膠回收試劑盒（QIAGEN公司）回收目的產(chǎn)物。將回收的目的DNA 片段連接到pMD18-T 載體上，轉(zhuǎn)化DH5α 大腸桿菌Esherichia coli，經(jīng)藍白斑篩選，獲得陽性克隆質(zhì)粒，BamHI 和HindIII 雙酶切檢測，并送上海生工生物工程有限公司測序。將正確的重組質(zhì)粒命名為pMD18T-PheERF5。

1.3 PheERF5 蛋白生物信息學(xué)分析

使用SMART：Main page 軟件在線分析PheERF5蛋白氨基酸序列的保守結(jié)構(gòu)域及其位置，使用Prot-Param 軟件在線分析該蛋白的理化性質(zhì)，使用ProtScale 軟件在線分析蛋白的親疏水性，使用NetPhos 3.1 軟件在線分析蛋白磷酸化位點，使用TMHMM Server v.2.0 軟件在線分析蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域，使用SignalP-5.0 Server 軟件在線分析蛋白信號肽，使用wolf-psort、Cell PLoc 2.0 和Softberry（ProtComp 9.0）軟件在線分析蛋白亞細胞定位。分別使用SOPMA 和Swiss Model 軟件分析PheERF5 蛋白的二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)。使用DNAMAN7.0 軟件進行PheERF5 蛋白及其他物種同源蛋白多序列比對，使用MEGA 6.0 軟件的鄰接法（neighbor-joining，NJ）構(gòu)建PheERF5 蛋白和水稻AP2/ERF 家族成員蛋白的系統(tǒng)發(fā)育進化樹。其他物種同源蛋白和水稻AP2/ERF 家族蛋白均從NCBI 數(shù)據(jù)庫下載。

2 結(jié)果與分析

2.1 PheERF5 基因的克隆

使用PheERF5-BamHI-F 和PheERF5-HindIII-R引物，通過RT-PCR 反應(yīng)擴增目的基因，PCR 反應(yīng)產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果如圖1所示。由圖1可以看出，EB 顯色后，在約1 000 bp 處有1 條清晰的亮帶，與目的基因片段大小相符。切膠回收，將回收產(chǎn)物與pMD18-T easy 載體連接，提取陽性克隆質(zhì)粒，經(jīng)BamHI 和HindIII 雙酶切后得到的片段大小與PCR 產(chǎn)物大小相吻合。

圖1 PheERF5 基因PCR 擴增電泳圖Fig.1 PCR amplification electrophoresis products of PheERF5 gene

PheERF5基因CDS 區(qū)堿基序列及其編碼的氨基酸序列如圖2所示。由圖2可以看出，獲得的cDNA 片段長度為1 017 bp，共編碼339 個氨基酸，與毛竹基因組數(shù)據(jù)庫中目的基因的長度及氨基酸序列完全符合。

圖2 PheERF5 基因CDS 區(qū)堿基序列及其編碼的氨基酸序列Fig.2 The base sequence and deduced amino acid sequence of PheERF5 CDS region

氨基酸序列分析結(jié)果表明，PheERF5 蛋白保守結(jié)構(gòu)域存在1 個AP2 結(jié)構(gòu)域和4 個Low complexity，如圖3所示。由圖3可以看出，根據(jù)位置先后排序各保守結(jié)構(gòu)域分別位于第29～35 位、第60～74 位、第119～182 位、第200～220 位和第239～256 位氨基酸殘基處。由于該氨基酸序列具有1 個AP2 保守結(jié)構(gòu)域，由64 個氨基酸殘基組成，結(jié)構(gòu)域第14 位和第19 位氨基酸殘基分別為丙氨酸（A）和天冬酰胺（N），推測其屬于AP2/ERF 轉(zhuǎn)錄因子家族的ERF 亞家族，故將其命名為PheERF5基因（PH01001057G0620）。

圖3 PheERF5 蛋白保守結(jié)構(gòu)域Fig.3 The conserved domain prediction of PheERF5 protein

2.2 PheERF5 蛋白理化性質(zhì)

PheERF5 蛋白理化性質(zhì)分析結(jié)果顯示，其相對分子質(zhì)量為35 958.87 Da，分子結(jié)構(gòu)式為C1568H2453N435O517S9，總原子數(shù)為4 982，理論等電點為4.58，該蛋白為不穩(wěn)定蛋白，其不穩(wěn)定系數(shù)為58.58，脂肪族氨基酸指數(shù)69.59。帶正電荷殘基（Arg+Lys）共31 個，帶負電荷殘基（Asp+Glu）共55 個，表明該蛋白在中性條件下帶負電荷。

PheERF5 蛋白親疏水性預(yù)測結(jié)果如圖4所示。由圖4可以看出，PheERF5 蛋白在第140 位氨基酸殘基處親水性最強，親水系數(shù)為-2.756；在第50 位氨基酸殘基處疏水性最強，親水系數(shù)為1.733。PheERF5 蛋白序列中疏水性氨基酸殘基（分值大于0）占23.89%，親水性氨基酸殘基（分值小于0）占76.11%，總平均親水性系數(shù)-0.533，由此推測PheERF5 蛋白為親水性蛋白。

圖4 PheERF5 蛋白親疏水性預(yù)測結(jié)果Fig.4 Hydrophilicity and hydrophobicity prediction of PheERF5 protein

2.3 PheERF5 蛋白磷酸化位點

PheERF5 蛋白磷酸化位點預(yù)測結(jié)果如圖5所示。由圖5可以看出，PheERF5 蛋白鏈中可能磷酸化且發(fā)生分值大于0.5 的氨基酸殘基位點有48個，其中蘇氨酸磷酸化位點12 個，絲氨酸磷酸化位點322 個，酪氨酸磷酸化位點4 個。PheERF5蛋白鏈主要磷酸化位點為絲氨酸殘基位點，由此推測其生物功能是以通過絲氨酸磷酸化修飾調(diào)控為主，以通過蘇氨酸磷酸化修飾調(diào)控為輔。

圖5 PheERF5 蛋白磷酸化位點預(yù)測結(jié)果Fig.5 Phosphorylation site prediction of PheERF5 protein

2.4 PheERF5 蛋白跨膜結(jié)構(gòu)與亞細胞定位

PheERF5 蛋白跨膜結(jié)構(gòu)分析結(jié)果顯示，該蛋白無跨膜結(jié)構(gòu)，屬于非跨膜蛋白。PheERF5 蛋白的信號肽預(yù)測如圖6所示。由圖6可以看出，該蛋白存在信號肽的概率僅有0.22%，由此推導(dǎo)出PheERF5 蛋白是非分泌蛋白。Wolf-psort 軟件的預(yù)測結(jié)果表明，PheERF5 蛋白質(zhì)位于細胞核的得分最高，為13，位于葉綠體和線粒體的得分分別為1 和0 分；CellPLoc 2.0 軟件的預(yù)測結(jié)果表明，PheERF5 蛋白質(zhì)位于細胞核或細胞質(zhì)；Softberry軟件的預(yù)測結(jié)果表明，該蛋白位于細胞核。因此，可推測PheERF5 蛋白的亞細胞定位為細胞核。

圖6 PheERF5 蛋白信號肽預(yù)測結(jié)果Fig.6 Prediction of signal peptide of PheERF5 protein

2.5 PheERF5 蛋白二、三級結(jié)構(gòu)

PheERF5 蛋白的二級結(jié)構(gòu)分析結(jié)果如圖7所示。由圖7可以看出，PheERF5 蛋白肽鏈中含有99 個α-螺旋（29.29%），36 個延伸鏈（10.65%），15個β-轉(zhuǎn)角（4.44%），188個無規(guī)則卷曲（55.62%），據(jù)此推測該蛋白的二級結(jié)構(gòu)主要為無規(guī)則卷曲。

PheERF5 蛋白的三級結(jié)構(gòu)分析結(jié)果如圖8所示。由圖8可以看出，PheERF5 蛋白質(zhì)的存在形式為單體蛋白，含有1 個α-螺旋，3 個β-折疊，組分間以β-轉(zhuǎn)角相連。

圖8 PheERF5 蛋白三級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果Fig.8 The tertiary structure of PheERF5 protein

2.6 PheERF5 基因同源性比對及系統(tǒng)進化分析

利用NCBI 數(shù)據(jù)庫進行PheERF5基因序列同源性的Blast 比對分析，結(jié)果如圖9所示。由圖9可以看出，PheERF5基因編碼的蛋白序列與小米Setaria italica、水稻Oryza satiνa、二穗短柄草Brachypodium distachyon、狗尾草Setaria νiridis、節(jié)節(jié)麥Aegilops tauschii、大麥Hordeum νulgare、疣粒野生稻Oryza meyeriana、小麥、Dichanthelium oligosanthes、玉米Zea mays高粱Sorghum bicolor的同源性高達84%以上，分別為85%、84%、85%、85%、85%、85%、84%、99%、85%、85%、98%，其氨基酸序列與這些物種的氨基酸序列的一致性達到64.29%。這些氨基酸序列的AP2 保守結(jié)構(gòu)域的同源性較高，共有37個保守氨基酸，分別是2F、4G、5V、6R、8R、9P、11G、13Y、14A、15A、16E、17I、18R、20P、23R、25R、27W、28L、29G、30T、31F、32D、33T、34A、35E、36E、37A、38A、41Y、42D、45A、46I、48L、50G、53A、56N、57F。

圖9 PheERF5 蛋白與其他物種同源蛋白AP2 結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的多重比對Fig.9 Multiple amino acid sequence alignment of the AP2 domains of PheERF5 protein with homologous proteins of other pecies

將PheERF5 蛋白的氨基酸序列與水稻已知的124 個AP2/ERF 家族轉(zhuǎn)錄因子的氨基酸序列構(gòu)建進化樹，結(jié)果如圖10所示。由圖10可以看出，PheERF5基因與水稻基因ERF 亞族B-5 組基因（Os12g41030、Os05g25260、Os03g60120、Os06g06540、Os01g12440和Os01g46870）聚為一支，且與Os12g41030進化關(guān)系最近。

圖10 PheERF5 蛋白與水稻中124 個AP2/ERF 家族成員蛋白聚類Fig.10 Cluster analysis of PheERF5 protein from Phyllostachys edulis and 124 AP2/ERF family proteins from Oryza sativa

3 結(jié)論與討論

本研究中從毛竹幼苗葉片中克隆獲得了PheERF5基因的cDNA 片段，其序列全長為1 017 bp，編碼339 個氨基酸。PheERF5基因編碼蛋白為具有1 個AP2 保守結(jié)構(gòu)域、無跨膜結(jié)構(gòu)、無信號肽、定位于細胞核且?guī)ж撾姾傻牟环€(wěn)定的親水性蛋白。通過NCBI 數(shù)據(jù)庫進行Blast 比對分析，結(jié)果表明PheERF5基因編碼氨基酸序列與禾本科植物（如小米、水稻、二穗短柄草等）ERF 蛋白氨基酸序列親緣關(guān)系近，其同源性均達到84%以上。通過構(gòu)建PheERF5 與124 個水稻AP2/ERF 家族成員氨基酸序列系統(tǒng)進化樹，分析結(jié)果顯示，PheERF5與Os12g41030 親緣關(guān)系最近，且與水稻ERF 亞家族B-5 子組成員聚類為一支，這說明PheERF5是典型的ERF 亞家族轉(zhuǎn)錄因子。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示，PheERF5 轉(zhuǎn)錄因子可能在毛竹抗生物和非生物脅迫過程中發(fā)揮著重要的作用。

植物體中ERF 亞家族轉(zhuǎn)錄因子是AP2/ERF 家族轉(zhuǎn)錄因子較豐富的亞家族，水稻基因組中含有77 個ERF 亞家族成員[7]，玉米基因組中含有153個ERF 亞家族成員[18]，小麥基因組中含有47 個ERF 亞家族成員[19]，毛竹基因組中含有53 個ERF亞家族成員[17]，擬南芥基因組中含有65 個ERF亞家族成員[5]。ERF 亞家族參與調(diào)控植物生長發(fā)育過程，響應(yīng)生物和非生物環(huán)境脅迫[3,20]。比如，水稻OsEBP-89基因在胚乳和維管束韌皮部表達，尤其在莖節(jié)和居間分生組織鄰近部位高水平表達，表明ERF 轉(zhuǎn)錄因子可能參與胚乳細胞和頸部組織淀粉的積累；轉(zhuǎn)基因擬南芥和轉(zhuǎn)基因煙草中超表達ERF 類基因，提高了病原相關(guān)蛋白基因的表達量，顯著增強了植物對腐生營養(yǎng)型真菌、細菌性葉斑病、煙草花葉病毒等的抗性；在反義品系中，水稻OsERF3負調(diào)控降低了褐飛虱雌成蟲的采食量、產(chǎn)卵量及初孵若蟲的成活率，在過量品系中與之相反，表明OsERF3超表達可調(diào)節(jié)水稻通過防御昆蟲取食而提高對昆蟲的抵抗力；在番茄植株體內(nèi)煙草TERF2基因過量表達，可提高番茄對低溫脅迫的耐受性[21-22]。ERF 轉(zhuǎn)錄因子參與植物生長發(fā)育和脅迫應(yīng)答的作用機理與其基因結(jié)構(gòu)和蛋白序列特征緊密相連，因此，研究毛竹ERF 亞家族成員的生物信息結(jié)構(gòu)和功能對揭示毛竹生長發(fā)育和抗逆機制具有重要的意義。

PheERF5 蛋白的AP2 結(jié)構(gòu)域由63 個氨基酸殘基組成，其結(jié)構(gòu)域第14 位氨基酸為丙氨酸（A），這與ERF 亞家族轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域第14 位特征氨基酸一致，但是，PheERF5 蛋白結(jié)構(gòu)域第19 位氨基酸為天冬酰胺（N），與ERF 亞家族轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域第19 位特征氨基酸（天冬氨酸D）不一致。這可能與ERF 轉(zhuǎn)錄因子AP2 結(jié)構(gòu)域第14 位氨基酸為極度保守氨基酸，而第19 位氨基酸的保守性較低有關(guān)[23]。PheERF5基因編碼氨基酸磷酸化位點預(yù)測結(jié)果顯示，其存在48 個可能發(fā)生磷酸化的氨基酸殘基位點。轉(zhuǎn)錄因子通過磷酸化調(diào)控來誘導(dǎo)或抑制抗逆功能基因的表達，特定氨基酸殘基磷酸化可能影響轉(zhuǎn)錄因子的核定位、轉(zhuǎn)錄活性或與之互作的其他蛋白[12]。所以，PheERF5 轉(zhuǎn)錄因子可能通過氨基酸殘基磷酸化來響應(yīng)逆境脅迫，提高毛竹的耐逆性。

ERF 亞家族B-5 子組轉(zhuǎn)錄因子也被命名為細胞分裂素反應(yīng)因子（cytokinin response factors，CRFs），已被證實參與植物抗生物和非生物脅迫過程[24]。比如，Kwon[24]報道，過表達AtCRF2的擬南芥轉(zhuǎn)基因植物顯示出加速的葉片衰老表型，極端的AtCRF2過表達在生長早期具有致命性，植物葉片呈現(xiàn)出病態(tài)表型。此外，受相容性半營養(yǎng)細菌病原體丁香假單胞菌變種（番茄DC3000）的侵染后，轉(zhuǎn)基因植株比野生型植株受到的危害更大。經(jīng)進一步研究發(fā)現(xiàn)，AtCRF2的表達與病原相關(guān)基因有較強的相關(guān)性，然而過表達AtCRF2的轉(zhuǎn)基因植株的表型完全受細菌水楊酸羥化酶NahG 表達的抑制[24]。這些研究結(jié)果表明，AtCRF2可能增強水楊酸（SA）的生物合成，導(dǎo)致自身免疫反應(yīng)和葉片衰老。Zhou 等[12]通過酵母雙雜試驗，鑒定了3 個B-5 子組基因Pti4、Pti5、Pti6，其所編碼的蛋白能與致病相關(guān)蛋白結(jié)合，上調(diào)抗細菌性斑點病基因的表達。Park 等[1]從煙草中克隆了Tsi1基因，發(fā)現(xiàn)其不僅能被鹽脅迫處理誘導(dǎo)表達，還能被乙烯利和水楊酸處理誘導(dǎo)表達。Park 等[1]還發(fā)現(xiàn)，Tsi1基因在植物體內(nèi)超表達，能誘導(dǎo)一系列致病相關(guān)基因在正常生長條件下表達，從而提高植株的耐鹽性和抗病能力。Hasan 等[25]分析了干旱脅迫過程中3 個棉花品種相關(guān)響應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄表達水平，研究結(jié)果表明3 個棉花品種的CRF1基因均響應(yīng)干旱脅迫轉(zhuǎn)錄表達，但表達水平不一致。由此可推斷，PheERF5基因參與毛竹抗生物和非生物逆境過程，尤其是抗病原菌過程。

本研究中雖然獲得了PheERF5基因的cDNA片段且對其進行了生物信息學(xué)分析，但尚未對PheERF5基因功能進行驗證，應(yīng)通過進一步的研究（如酵母自激活、亞細胞定位、遺傳轉(zhuǎn)化等）驗證其功能。