李曉蓮， 虞 江，李 渺， 李亞楠，宋新麗，楊林凱，譚福宗， 雷錢楊， 萬林松， 魏 嫻， 盧永仲， 柏 松， 呂夢嵐

(1.貴州理工學(xué)院化學(xué)工程學(xué)院，貴州 貴陽 550003；2.貴陽虞氏蜂業(yè)有限公司，貴州 貴陽 550200)

0 引言

植物細菌性病害常年造成我國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟損失，與植物真菌類病害相比，細菌的門類較小，但它帶來的危害卻不可小覷，當(dāng)前，全球性細菌性病害有500多種，我國的細菌性病害就有200多種，主要的類型有青枯病，細菌病，潰瘍病、軟腐病等，幾乎主要的栽培作物都會被一種或多種細菌感染，獼猴桃潰瘍病是作用在獼猴桃作物上的典型的細菌性病害，該細菌病害是由丁香假單細胞桿菌獼猴桃致病變種引起的一種毀滅性獼猴桃病害，一旦感染獼猴桃潰瘍病菌的植株，發(fā)病率高，癥狀嚴重，傳播快速、且難以發(fā)現(xiàn)，當(dāng)植物感染獼猴桃潰瘍病菌后，會在植物有菌膿流出時才被發(fā)現(xiàn)，此時，植株已被嚴重感染，病菌已經(jīng)擴展蔓延，嚴重時甚至毀園絕收，給獼猴桃種植戶造成巨大損失[1-7]，因此，尋找防治獼猴桃潰瘍病的方法對獼猴桃產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。化學(xué)農(nóng)藥的使用，有效地抑制了獼猴桃潰瘍病的發(fā)展，一定的提高了農(nóng)業(yè)經(jīng)濟，但隨著化學(xué)農(nóng)藥的大量使用，不僅對環(huán)境造成污染，也使細菌的抗藥性增加，隨著人們環(huán)保意識的增強，尋找對環(huán)境友好的新型防治劑，已經(jīng)成為人們的共同愿望，植物是生物活性化合物的重要來源之一，在其次生代謝產(chǎn)物中，大多數(shù)次生代謝產(chǎn)物都含有能有效抑菌的成分，將天然提取物作為新型的防治劑，符合當(dāng)前綠色農(nóng)藥的發(fā)展方向，受到植物保護研究人員的廣泛關(guān)注[8-11]。

1 材料與方法

1.1 材料

表1 供試植物名錄

試供植物樣品：所有試供植物均購買自貴陽中藥材批發(fā)市場。

試供培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)。

病原菌種：獼猴桃潰瘍病菌，由貴州理工學(xué)院化學(xué)與工程學(xué)院實驗室提供。

1.2 方法

1.2.1 試供植物的預(yù)處理

首先將得到的植物材料放置于60℃的恒溫箱內(nèi)，干燥植物材料中的水分，等到植物材料完全被干燥后，再用研缽將植物材料粉碎成粉末狀物體，用40目篩篩剛剛粉碎好的粉末固體，然后將過完篩的粉末放入密封袋內(nèi)備用，取樣品粉末20.0 g，分三次加入100、70、30 mL的無水甲醇分三次用超聲波提取，超聲頻率為1200 Hz，工作間歇0.2 s，溫度40 ℃，每次的提取時間為30 min，每次提取后，抽濾收集濾液，濾渣繼續(xù)重復(fù)上述提取步驟一遍，然后丟掉，最后合并全部的提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑濃縮，用冷凍干燥器低溫干燥得到的固體樣品，然后將樣品保存在4 ℃下備用。

1.2.2 待測物的抑菌活性測試方法

按照植物提取物：葉枯唑為1∶1的比例配制待測藥液，采用試管倍比稀釋法測定5種混合液對獼猴桃潰瘍病菌的MBC(最小殺菌濃度)[12-13]。準(zhǔn)備9支試管，編號1-9，用移液槍在9支試管中分別加入1 mL的滅菌營養(yǎng)肉湯，然后用移液槍在編號1的試管中加入1 mL的待測藥液，重復(fù)打壓幾次移液槍使液體均勻混合，混勻后吸走1 mL的混合液打到編號2的試管中，重復(fù)打壓幾次移液槍使液體均勻混合，混勻后吸走1 mL的混合液打到編號3的試管中，重復(fù)以上步驟，直到第編號7的試管中的液體均勻混合后，吸走1 mL的混合液棄去，在7支試管中用移液槍分別加入1 mL106cfu/mL的獼猴桃潰瘍病菌菌液，在編號8的試管中用移液槍加入1 mL的滅菌營養(yǎng)肉湯和1 mL相同濃度的獼猴桃潰瘍病菌菌液作為陽性對照，在編號9的試管中用移液槍加入2 mL的滅菌營養(yǎng)肉湯作為陰性對照。然后將9個試管分別接種到培養(yǎng)基上，編號1a-9a，用肉眼觀察1a-9a的培養(yǎng)皿上是否有細菌生長，以沒有細菌生長的平板對應(yīng)的編號試管內(nèi)藥物濃度為藥液對獼猴桃潰瘍病菌的最低殺菌濃度(MBC)。

2 結(jié)果分析

5種混合藥液對獼猴桃潰瘍病菌的抑制效果如表2所示。

表2 5種混合藥液對獼猴桃潰瘍病菌的抑制效果

注：“-”和“+”表示培養(yǎng)皿中是否長有菌落；“-”表示無菌落生成，“+”表示有少量菌落生成；“++”表示菌落數(shù)較多。

研究結(jié)果表明，五種植物提取物與葉枯唑復(fù)配的混合藥液對獼猴桃潰瘍病菌具有一定的抑制作用，其中砂藍刺頭提取物與葉枯唑復(fù)配對獼猴桃潰瘍病菌的MBC為31.25 mg/mL，鵝絨藤提取物與葉枯唑復(fù)配對獼猴桃潰瘍病菌的MBC為62.50 mg/mL，沙打旺提取物與葉枯唑復(fù)配對獼猴桃潰瘍病菌的MBC為31.25 mg/mL，日本菟絲子提取物與葉枯唑復(fù)配對獼猴桃潰瘍病菌的MBC為62.50 mg/mL，苦馬豆提取物與葉枯唑復(fù)配對獼猴桃潰瘍病菌的MBC為31.25 mg/mL，其中，砂藍刺頭提取物、沙打旺提取物、苦馬豆提取物與葉枯唑復(fù)配后的抑菌活性優(yōu)于對照藥劑葉枯唑(MBC值為62.50 mg/mL)，鵝絨藤提取物、日本菟絲子提取物與葉枯唑復(fù)配后，活性與之相當(dāng)。

3 結(jié)語

由活性測試結(jié)果表明，五種天然植物提取物與葉枯唑的復(fù)配后對獼猴桃潰瘍病菌具有一定的抑制作用，大多數(shù)植物提取物與葉枯唑進行1∶1復(fù)配后，其對于獼猴桃潰瘍病菌的抑制活性都優(yōu)于葉枯唑(MBC值為62.50 mg/mL)的活性，例如砂藍刺頭提取物、沙打旺提取物、苦馬豆提取物與葉枯唑復(fù)配后的抑菌活性(MBC值分為：31.25 mg/mL、31.25 mg/mL、31.25 mg/mL)，研究表明：具有抗獼猴桃潰瘍病菌的藥物，與另一活性的物質(zhì)復(fù)配后的藥物的抗獼猴桃潰瘍病菌的活性增強，本研究為開發(fā)植物源農(nóng)藥和研究復(fù)配型農(nóng)藥的增效提供了一定的理論基礎(chǔ)。