李彥飛，馮澤騰，張小軍

(中農(nóng)立華生物科技股份有限公司，北京 100052)

苯唑草酮(topramezone)，化學(xué)名稱為[3-(4,5-二氫-1,2-噁唑-3-基)-4-甲磺?；?2-甲基苯基](5-羥基-1-甲基吡唑-4-基)甲酮，是巴斯夫開發(fā)的一種苯甲酯吡唑酮類除草劑。該劑主要抑制植物體內(nèi)對(duì)羥基苯基丙酮酸酯雙氧化酶(HPPD)活性，并對(duì)耐三嗪類、草甘膦、ALS抑制劑和ACCase抑制劑的雜草有良好的防除效果，能有效防除玉米田闊葉雜草及禾本科雜草，但對(duì)莎草科雜草效果較差[1-5]。唑啉草酯(pinoxaden)，化學(xué)名稱為8-(2,6-二乙基-4-甲基苯基)-1,2,4,5-四氫-7-氧-7H-吡唑[1,2-d][1,4,5]氧二氮-9-基-2,2-二甲基丙酸酯，是先正達(dá)開發(fā)的一種苯基吡唑啉類除草劑。其可抑制乙酰輔酶A羧化酶的活性，阻礙脂肪酸的生物合成和細(xì)胞膜形成，導(dǎo)致雜草生長停止并最終死亡。唑啉草酯為內(nèi)吸傳導(dǎo)型、選擇性禾本科雜草除草劑，廣譜，高效，被莖葉吸收[6-9]。

當(dāng)前國內(nèi)有關(guān)苯唑草酮和唑啉草酯的復(fù)配及混劑分析方法尚無報(bào)道?；诖?，本文研究了用高效液相色譜法同時(shí)檢測6%苯唑草酮·唑啉草酯顆粒劑中的苯唑草酮和唑啉草酯的方法，旨在為該混配制劑生產(chǎn)的質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)制定提供技術(shù)支撐。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

1220型高效液相色譜儀配紫外檢測器和色譜工作站(美國Agilent)；TU-1901型紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；AL204型電子分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司，精度為0.000 1 g)。

乙腈(色譜純，Thermofisher)；冰乙酸(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；新蒸二次蒸餾水；苯唑草酮標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99%，北京勤誠亦信科技開發(fā)有限公司提供)；唑啉草酯標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99%，北京勤誠亦信科技開發(fā)有限公司提供)；6%苯唑草酮·唑啉草酯顆粒劑，自制。

1.2 色譜條件

液相色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18不銹鋼柱(250 mm×4.6 mm，內(nèi)裝5 μm C18填充物)；流動(dòng)相：乙腈-1%冰乙酸水溶液(體積比55∶45)；流量：0.8 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：254 nm；進(jìn)樣體積：5.0 μL。在上述色譜操作條件下，唑啉草酯和苯唑草酮的保留時(shí)間分別約為3.5、15.7 min。標(biāo)樣及樣品的高效液相色譜圖分別見圖1、2。

圖1 唑啉草酯(進(jìn)樣濃度700 mg/L)及苯唑草酮(進(jìn)樣濃度300 mg/L)標(biāo)樣的高效液相色譜圖

圖2 6%苯唑草酮·唑啉草酯顆粒劑的高效液相色譜圖

1.3 溶液的配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取0.03 g苯唑草酮標(biāo)樣(精確至0.000 02 g)，0.06 g唑啉草酯標(biāo)樣(精確至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，搖勻，脫氣后備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取1.5 g 6%苯唑草酮·唑啉草酯顆粒劑(預(yù)先將顆粒劑粉碎成末，精確至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，搖勻，脫氣后備用。

1.4 測定

待儀器基線穩(wěn)定后，按照以上色譜條件連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直到相鄰2針標(biāo)樣響應(yīng)值的相對(duì)變化小于1.5%后，方可按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的次序進(jìn)行測定。

1.5 計(jì)算

試樣中苯唑草酮(或唑啉草酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)按下式計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中苯唑草酮(或唑啉草酯)平均峰面積值；A2為試樣溶液中苯唑草酮(或唑啉草酯)平均峰面積值；m1為苯唑草酮(或唑啉草酯)標(biāo)樣的質(zhì)量(g)；m2為試樣的質(zhì)量(g)；P為標(biāo)樣中苯唑草酮(或唑啉草酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相的選擇

以不同體系及同一體系中不同比例的2個(gè)物質(zhì)作為流動(dòng)相時(shí)，苯唑草酮和唑啉草酯的出峰時(shí)間及峰形均有較大變化。當(dāng)采用乙腈-水作為流動(dòng)相時(shí)，峰型明顯優(yōu)于甲醇-水作為流動(dòng)相，且加入1%乙酸后峰型和分離度變得更好。當(dāng)流動(dòng)相中乙腈比例太高時(shí)，唑啉草酯出峰時(shí)間過早，經(jīng)過反復(fù)測試，在流速0.8 mL/min，乙腈-1%乙酸水溶液的體積比為55∶45時(shí)，苯唑草酮和唑啉草酯的出峰時(shí)間相對(duì)適中，且峰型尖銳對(duì)稱無拖尾，分離效果好。

2.2 檢測波長的選擇

利用TU-1901型普析通用紫外可見分光光度計(jì)對(duì)苯唑草酮和唑啉草酯標(biāo)樣溶液進(jìn)行全波長紫外掃描，得到苯唑草酮或唑啉草酯的最大吸收波長與相關(guān)濃度響應(yīng)值的紫外吸收光譜圖(圖3)。經(jīng)驗(yàn)證，苯唑草酮和唑啉草酯在波長254 nm均有較大紫外吸收，且能夠得到較好的峰型同時(shí)避免雜質(zhì)的干擾。因此，最后選定本分析方法的檢測波長為254 nm。

圖3 苯唑草酮和唑啉草酯的紫外吸收譜圖

2.3 分析方法的線性相關(guān)性

分別稱取5個(gè)不同質(zhì)量的苯唑草酮和唑啉草酯標(biāo)樣于5個(gè)100 mL的容量瓶中，配制成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照本方法所確定的液譜條件進(jìn)行進(jìn)樣測定，結(jié)果見表1。以苯唑草酮(或唑啉草酯)的進(jìn)樣質(zhì)量(x)為橫坐標(biāo)，以苯唑草酮(或唑啉草酯)的峰面積(Y)為縱坐標(biāo)做圖，得苯唑草酮(或唑啉草酯)的線性相關(guān)曲線。其線性方程分別為y苯唑草酮=6 078.9x-48.218，y唑啉草酯=1 022.1x-3.031，相關(guān)系數(shù)分別為r2苯唑草酮=0.999 8，r2唑啉草酯=0.999 6，說明該方法在測定范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

表1 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn)結(jié)果

2.4 方法的精密度

從同一批6%的苯唑草酮·唑啉草酯顆粒劑樣品中準(zhǔn)確連續(xù)稱取5個(gè)試樣，在上述操作條件下進(jìn)行分析，試驗(yàn)結(jié)果見表2。苯唑草酮和唑啉草酯標(biāo)準(zhǔn)偏差均為0.012，變異系數(shù)分別為0.59%、0.29%。由此可見，該方法的精密度能很好地滿足工業(yè)分析的定量要求。

表2 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.5 方法的準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確稱取5個(gè)6%苯唑草酮·唑啉草酯顆粒劑試樣，加入一定量的苯唑草酮和唑啉草酯標(biāo)樣，按1.2節(jié)的液相色譜條件進(jìn)行測定，并計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。苯唑草酮(99.3%)和唑啉草酯(99.1%)的平均回收率均較高，符合分析標(biāo)準(zhǔn)。

表3 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié) 論

本文建立了用高效液相色譜法同時(shí)測定苯唑草酮和唑啉草酯混配制劑中的有效成分的定量分析方法。該方法分離效果良好，準(zhǔn)確度和精密度均較高，且簡單高效易操作，可用于苯唑草酮和唑啉草酯復(fù)配制劑的質(zhì)量控制，具有很強(qiáng)的可行性和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。