卞玉婷，陳芳有，黃偉明，張睿增，劉定平，雙鵬程，羅永明

江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南昌 330004

寬葉金粟蘭ChloranthushenryiHemsl.為金粟蘭科Chloranthaceae金粟蘭屬ChloranthusSwartz植物，又名四塊瓦、四大天王、大葉及己，常以全草入藥，味辛，性溫，有毒，具有祛風(fēng)除濕，活血散瘀，解毒的功效，廣泛用于治療風(fēng)濕痹痛，跌打骨折，瘡腫及毒蛇咬傷等病癥[1,2]。藥理研究表明，寬葉金粟蘭具有抗炎、抗菌、抗腫瘤、收縮子宮等活性[3]。寬葉金粟蘭作為江西民間常用中草藥之一，以其為主藥的制劑鉆山風(fēng)糖漿被《中國(guó)藥典》收載，臨床用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療[4]。但其抗炎的有效成分并不明確，影響寬葉金粟蘭的臨床應(yīng)用和產(chǎn)品的深度開發(fā)。因此，為深入研究寬葉金粟蘭的植物化學(xué)資源，尋找具有抗炎活性的化學(xué)成分，本研究對(duì)寬葉金粟蘭95%乙醇提取物的二氯甲烷部位的化學(xué)成分及其體外抗炎活性進(jìn)行了研究，以探究寬葉金粟蘭的抗炎活性物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

Bruker AVANCE III HD 600MHz型核磁共振波譜儀(Bruker，瑞士)；AB SCIEX Triple ESI 5600+ 型高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用儀(AB SCIEX，美國(guó))；Waters 2695-2998 型高效液相(waters，美國(guó))；Waters 515 制備型液相(waters，美國(guó))；YMC-Pack ODS-A 半制備色譜柱(250 mm×10 mm，5 μm，YMC，日本)；Buchi中壓制備液相色譜儀(Buchi，瑞士)；YMC ODS反相色譜填料(50 μm，YMC，日本)；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20 (Amersham PharmaciaBiotech，美國(guó))；PRP 512 A樹脂(75～100 μm，北京聚福樹脂廠)；AB-104 N型分析天平(METTLER TOLEDO，瑞士)；薄層硅膠板GF254(青島海洋化工廠)；色譜甲醇(星可，上海)；純凈水(哇哈哈，杭州)；其他試劑均為分析純(西隴科學(xué)股份有限公司)；Synergy 4 MLFPTAD型酶標(biāo)儀(BioTek，美國(guó))；AllegraX-15R型離心機(jī)(Beckman，美國(guó))；Research?plus型移液槍(Eppendorf，德國(guó))；一氧化氮(NO)檢測(cè)試劑盒(碧云天公司)。

實(shí)驗(yàn)藥材于2018年11月采自江西井岡山，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院鄧可眾副教授鑒定為金粟蘭科金粟蘭屬寬葉金粟蘭(ChloranthushenryiHemsl)的全草。憑證標(biāo)本(20181126)保存于江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥化學(xué)科研室。

1.2 提取與分離

干燥的寬葉金粟蘭全草23 kg，粉碎后采用95%乙醇提取3次，合并提取液后減壓濃縮至無(wú)醇味，得總浸膏1 100 g?？偨嘟?jīng)硅藻土柱色譜依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇洗脫，各洗脫液分別減壓濃縮后得石油醚部位156.3 g、二氯甲烷部位394.2 g、乙酸乙酯部位94.6 g、甲醇部位454.9 g。

二氯甲烷部位經(jīng)PRP 512A樹脂分離(洗脫梯度為，30%、50%、70%、95%乙醇-水溶液)得到組分Fr.A～Fr.D。Fr.B組分(100 g)經(jīng)硅膠柱色譜分離，以石油醚：乙酸乙酯(30∶1→0∶1)為洗脫劑分得到5個(gè)組分Fr.B1-Fr.B5，其中Fr.B2(15.3 g)經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷：甲醇，50∶1→0∶1)、凝膠色譜、制備液相色譜(甲醇-水)分離純化得化合物5(11.4 mg)、16(3.6 mg)、17(4.9 mg)，B3(7.2 g)經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷：甲醇，70∶1→0∶1)、凝膠色譜和制備液相色譜(甲醇-水)分離純化得化合物3(13.4 mg)、12(7.6 mg)、Fr.B4(6.9 g) 經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷：甲醇，50∶1→0∶1)、ODS柱色譜和制備液相色譜 (甲醇-水)分離純化得化合物18(5.4 mg)、19(3.9 mg)。C組分(104 g)經(jīng)硅膠柱色譜分離，以石油醚：乙酸乙酯(30∶1→0∶1)為洗脫劑梯度洗脫分得6個(gè)組分Fr.C1-Fr.C6)，F(xiàn)r.C2(3.6 g)組分經(jīng)中壓制備液相(甲醇-水)、制備液相色譜(甲醇-水)分得化合物1(14.3 mg)、4(10.6 mg)、7(12.4 mg)、14(5.4 mg)、15(3.4 mg)；C3(5.7 g)經(jīng)制備液相色譜(甲醇-水)分得化合物6(18.4 mg)、8(11.6 mg)、9(9.7 mg)、10(6.4 mg)。C4(11.5 g) 組分經(jīng)ODS柱色譜、凝膠柱色譜分離，制備液相色譜(甲醇-水)分得化合物2(20.7 mg)、11(15.7 mg)、13(9.4 mg)。

1.3 抗炎活性篩選方法

本實(shí)驗(yàn)采用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞RAW 264.7釋放一氧化氮(NO)免疫炎癥細(xì)胞模型，Griess法測(cè)定NO的含量[5]，對(duì)寬葉金粟蘭中分離的量較大的化合物1～9、12和13進(jìn)行體外抗炎活性初步篩選。具體如下：RAW 264.7細(xì)胞用含10% FBS的DMEM培養(yǎng)液于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。在實(shí)驗(yàn)時(shí)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的RAW 264.7細(xì)胞經(jīng)胰蛋白酶消化后重懸得到1×106個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，鋪板于48孔板中，每孔200 μL，在培養(yǎng)箱培養(yǎng)12 h，細(xì)胞完全貼壁。再用將配好的10 μmol/L單體化合物的溶液預(yù)處理1 h，再加入1 μg/mL LPS(終濃度)進(jìn)行刺激，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組(培養(yǎng)液)、非樣品組(LPS + 培養(yǎng)液)、陽(yáng)性對(duì)照組(氨基胍+LPS+培養(yǎng)液)，繼續(xù)培養(yǎng)持續(xù)刺激18 h。取100 μL細(xì)胞培養(yǎng)液，加入等量Griess試劑，經(jīng)搖床避光充分混勻15 min后，使用酶標(biāo)儀在570 nm處測(cè)OD值，計(jì)算化合物NO的抑制率[6]。

圖1 化合物1～19的結(jié)構(gòu)Fig.1 The chemical structures of compounds 1-19

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色針晶(CHCl3)；mp.200～203 ℃；HR-ESI-MS：m/z271.130 1 [M+Na]+，分子式為C15H20O3。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.59(1H，m，H-1α)，1.24(1H，m，H-1β)，1.65(2H，m，H-2)，2.36(1H，m，H-3α)，1.96(1H，m，H-3β)，1.85(1H，m，H-5)，2.64(1H，m，H-6α)，2.43(1H，m，H-6β)，2.25(1H，d，J= 13.8 Hz，H-9α)，1.58(1H，d，J= 13.8 Hz，H-9β)，1.83(3H，s，H-13)，4.87(1H，t，J= 1.5 Hz，H-14α)，4.60(1H，t，J= 1.5 Hz，H-14β)，1.03(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：41.5(C-1)，22.5(C-2)，36.2(C-3)，148.6(C-4)，51.8(C-5)，24.7(C-6)，160.7(C-7)，103.4(C-8)，51.5(C-9)，36.9(C-10)，122.5(C-11)，171.0(C-12)，8.4(C-13)，107.0(C-14)，16.8(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為atractylenolid III。

化合物2無(wú)色透明方晶(CHCl3)；mp.193～195 ℃；HR-ESI-MS：m/z285.146 2 [M+Na]+，分子式為C15H18O4。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：4.94(1H，m，H-1)，2.38(1H，m，H-3)，2.06(1H，m，H-2)，6.30(1H，s，H-5)，2.77(1H，d，J= 12.9 Hz，H-9α)，2.42(1H，d，J= 12.9 Hz，H-9β)，1.95(3H，s，H-13)，1.88(3H，m，H-14)，1.63(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：129.5(C-1)，26.9(C-2)，30.8(C-3)，150.2(C-4)，130.2(C-5)，192.9(C-6)，156.6(C-7)，110.9(C-8)，49.7(C-9)，136.9(C-10)，136.9(C-11)，172.4(C-12)，10.2(C-13)，25.1(C-14)，18.2(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為(1E,4Z)-8-hydroxy-6-oxogermacra-1 (10),4,7(11)-trieno-12,8-lactone。

化合物3白色粉末；HR-ESI-MS：m/z281.134 9 [M+H]+，分子式為C15H20O5。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：2.93(1H，dd，J= 10.8，2.1 Hz，H-1)，2.22(1H，m，H-2α)，1.56(1H，m，H-2β)，2.41(1H，m，H-3α)，1.52(1H，m，H-3β)，3.78(1H，s，H-5)，2.82(1H，d，J= 16.8 Hz，H-9α)，3.69(1H，d，J= 16.8 Hz，H-9β)，7.10(1H，s，H-12)，2.18(3H，s，H-13)，1.15(3H，s，H-14)，1.33(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：69.2(C-1)，23.9(C-2)，36.2(C-3)，63.8(C-4)，63.4(C-5)，190.0(C-6)，122.7(C-7)，156.3(C-8)，39.7(C-9)，58.1(C-10)，123.6(C-11)，138.6(C-12)，10.7(C-13)，15.5(C-14)，17.0(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為curcuzederone。

化合物4黃色粉末；HR-ESI-MS：m/z265.145 9 [M+H]+，分子式為C15H20O4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：3.67(1H，m，H-1)，1.78(2H，m，H-2)，1.60(2H，m，H-3)，2.55(1H，s，H-5)，3.08(1H，d，J= 16.9 Hz，H-9α)，2.71(1H，d，J= 16.9 Hz，H-9β)，7.07(1H，m，H-12)，2.18(3H，s，H-13)，1.47(3H，s，H-14)，1.01(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：78.2(C-1)，28.4(C-2)，38.2(C-3)，71.3(C-4)，62.0(C-5)，197.3(C-6)，119.4(C-7)，166.4(C-8)，40.0(C-9)，44.7(C-10)，119.1(C-11)，139.7(C-12)，9.1(C-13)，14.7(C-14)，24.6(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為curcolonol。

化合物5黃色油狀物；HR-ESI-MS：m/z311.167 3 [M+Na]+，分子式為C17H20O4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.32(2H，td，J= 7.8，3.6 Hz，H-1)，0.95(1H，m，H-2α)，0.85(1H，m，H-2β)，2.08(1H，m，H-3)，2.64(1H，dd，J= 14.1，3.3 Hz，H-5)，2.76(1H，m，H-6α)，2.12(1H，m，H-6β)，5.07(1H，m，H-8)，2.88(1H，dd，J=12.0，6.6 Hz，H-9α)，1.43(1H，dd，J= 12.0，6.6 Hz，H-9β)，1.84(3H，s，H-13)，4.08(1H，d，J= 12.0 Hz，H-14α)，3.58(1H，d，J= 12.0 Hz，H-14β)，5.04(1H，s，H-15α)，4.79(1H，s，H-15β)，2.15(2H，s，H-2′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：23.8(C-1)，16.7(C-2)，24.0(C-3)，149.0(C-4)，62.9(C-5)，24.1(C-6)，160.4(C-7)，78.9 (C-8)，39.5(C-9)，42.4(C-10)，122.4(C-11)，174.4(C-12)，8.7(C-13)，61.7 (C-14)，107.0(C-15)，171.5(C-1′)，21.1(C-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為(1R,3S,5S,8S,10R)-14-acetylshizukanolide。

化合物6白色粉末；HR-ESI-MS：m/z307.214 9 [M+H]+，分子式為C19H30O3。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.03(1H，m，H-1α)，1.71(1H，m，H-1β)，1.53(2H，m，H-2)，1.25(2H，m，H-3)，1.33(1H，m，H-5)，1.42(1H，m，H-6α)，1.36(1H，m，H-6β)，2.28(1H，m，H-7α)，2.09(1H，m，H-7β)，1.80(1H，m，H-9)，1.66(2H，m，H-11)，1.79(1H，m，H-12α)，1.67(H，m，H-12β)，5.55(1H，s，H-14)，1.28(3H，s，H-17)，3.41(1H，d，J= 10.8 Hz，H-18α)，3.12(1H，d，J= 10.8 Hz，H-18β)，0.80(3H，s，H-19)，0.82(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：38.9(C-1)，18.5(C-2)，35.5(C-3)，37.9(C-4)，47.7(C-5)，22.4(C-6)，35.7(C-7)，139.3 (C-8)，50.3(C-9)，38.3(C-10)，18.4(C-11)，31.5(C-12)，42.7(C-13)，124.2 (C-14)，181.3(C-15)，24.8(C-17)，72.3(C-18)，18.1(C-19)，15.7(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為ent-8(9)-pimarene-20-hydroxy-16-nor-15-oic acid。

化合物7無(wú)色油狀物；HR-ESI-MS：m/z333.205 9 [M+H]+，分子式為C20H28O4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.19(1H，m，H-1α)，1.63(1H，m，H-1β)，1.51(1H，dd，J= 14.1，3.6 Hz，H-2α)，1.82(1H，dd，J= 14.1，3.6 Hz，H-2β)，1.06(1H，m，H-3α)，2.14(1H，m，H-3β)，1.42(1H，m，H-5)，2.09(1H，m，H-6α)，1.92(1H，m，H-6β)，2.44(1H，dd，J= 12.0，4.2 Hz，H-7α)，2.00(1H，dd，J= 12.0，4.2 Hz，H-7β)，2.21 (1H，d，J= 11.7 Hz，H-9)，1.44(1H，m，H-11α)，1.93(1H，m，H-11β)，4.86(1H，d，J= 10.8 Hz，H-12)，5.77(1H，m，H-14)，2.09(3H，s，H-16)，4.93(1H，s，H-17α)，4.43(1H，s，H-17β)，1.25(3H，s，H-18)，0.60(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：38.8(C-1)，19.8(C-2)，37.9(C-3)，44.3(C-4)，56.0(C-5)，26.0(C-6)，38.6(C-7)，148.1(C-8)，183.8(C-9)，40.3(C-10)，28.1(C-11)，83.6(C-12)，169.5(C-13)，73.4(C-15)，14.1(C-16)，106.4(C-17)，29.1(C-18)，51.8(C-19)，13.0(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為labda-8(17),13-dien-15,12R-olid-19-oic acid。

化合物8無(wú)色油狀物；HR-ESI-MS：m/z277.215 9 [M+H]+，分子式為C18H28O2。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.42(1H，d，J= 4.2 Hz，H-1α)，1.08(1H，d，J= 4.2 Hz，H-1β)，1.45 (2H，m，H-2)，1.01(1H，m，H-3α)，0.85(1H，m，H-3β)，1.28(1H，d，J= 2.7 Hz，H-5)，1.84(1H，m，H-6α)，1.41(1H，m，H-6β)，2.46(1H，m，H-7α)，2.05(1H，m，H-7β)，2.48(1H，d，J= 8.7 Hz，H-9)，6.84(1H，dd，J= 16.0，10.2 Hz，H-11)，6.08(1H，d，J= 17.1 Hz，H-12)，2.26(3H，m，H-14)，4.78(1H，s，H-17α)，4.41(1H，s，H-17β)，0.99(3H，m，H-18)，3.77(1H，d，J= 10.8 Hz，H-19α)，3.44 (1H，d，J= 10.8 Hz，H-19β)，0.87(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：40.9(C-1)，18.8(C-2)，35.6(C-3)，39.0(C-4)，55.4(C-5)，23.4(C-6)，37.0(C-7)，148.2(C-8)，60.9(C-9)，39.3(C-10)，146.4(C-11)，133.8(C-12)，198.3 (C-13)，27.4(C-14)，109.0(C-17)，27.1(C-18)，65.2(C-19)，16.1(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為(11E)-(4S,5R,9S,10S)-15,16-bisnor-13-oxo-8(17),11-labdadien-19-ol。

化合物9無(wú)色油狀物；HR-ESI-MS：m/z291.195 3 [M+H]+，分子式為C18H26O3。1H NMR (600 MHz，CDCl3)δ：1.45(1H，d，J= 4.2 Hz，H-1α)，1.10(1H，d，J= 4.2 Hz，H-1β)，1.83(2H，m，H-2)，2.45(1H，m，H-3α)，2.04(1H，m，H-3β)，1.34(1H，dd，J= 12.3，3.0 Hz，H-5)，1.97(1H，m，H-6)，2.17(1H，m，H-7α)，1.07(1H，m，H-7β)，2.48(1H，d，J= 2.7 Hz，H-9)，6.85(1H，dd，J=15.9，10.2 Hz，H-11)，6.08(1H，d，J= 15.9 Hz，H-12)，2.27(3H，s，H-16)，4.81(1H，d，J= 1.8 Hz，H-17α)，4.42(1H，d，J= 1.8 Hz，H-17β)，1.26(3H，s，H-18)，0.80(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：41.0(C-1)，19.7(C-2)，37.2(C-3)，44.2(C-4)，55.5(C-5)，24.9(C-6)，38.0(C-7)，148.1(C-8)，60.1(C-9)，40.1(C-10)，146.2(C-11)，133.9(C-12)，198.3(C-13)，27.4(C-16)，108.9(C-17)，29.0(C-18)，183.7(C-19)，13.8(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為14(15)-bisnor-13-oxolabd-8(17),11(E)-dien-19-oic acid。

化合物10黃色油狀物；HR-ESI-MS：m/z28 5.109 4 [M+Na]+，分子式為C15H18O4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.87(1H，m，H-1)，1.63(1H，m，H-2α)，1.75(1H，m，H-2β)，1.70(1H，m，H-3α)，1.61(1H，m，H-3β)，2.19(1H，s，H-5)，5.47(1H，m，H-6)，1.93(1H，dd，J= 16.2，10.4 Hz，H-8α)，2.17(1H，m，H-8β)，1.82(1H，m，H-9α)，1.46(1H，m，H-9β)，2.23(1H，m，H-11)，0.98(3H，t，J= 6.2 Hz，H-12)，0.97(3H，t，J= 6.2 Hz，H-13)，1.27(3H，s，H-14)，1.21(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：50.8(C-1)，21.6(C-2)，40.6(C-3)，80.4(C-4)，50.4(C-5)，121.4(C-6)，149.8(C-7)，25.2(C-8)，42.7(C-9)，75.5(C-10)，37.4(C-11)，21.6(C-12)，21.5(C-13)，21.3(C-14)，22.7(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為guaianediol。

化合物11白色粉末；HR-ESI-MS：m/z268.134 3 [M+H]+，分子式為C17H17NO2。1H NMR (600 MHz，CDCl3)δ：7.49(2H，m，H-2，6)，6.80(2H，m，H-3，5)，2.82(2H，t，J= 6.9 Hz，H-7)，3.62(2H，d，J= 6.6 Hz，H-8)，7.09(2H，d，J= 8.4 Hz，H-2′，6′)，7.35(3H，m，H-3′，4′，5′)，7.62(1H，d，J= 15.6 Hz，H-7′)，6.31(1H，d，J= 15.6 Hz，H-8′)，5.58(1H，br s，N-H)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：130.1(C-1)，131.0(C-2，6)，115.7(C-3，5)，154.4(C-4)，34.9(C-7)，41.1(C-8)，134.9(C-1′)，127.9(C-2′，6′)，129.0(C-3′，5′)，129.8(C-4′)，141.3(C-7′)，120.6(C-8′)，166.0(C-9′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為N-trans-cinnamoyltyramine。

化合物12白色粉末；HR-ESI-MS：m/z507.229 5 [M+H]+，分子式為C32H30N2O4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：4.03(1H，dd，J= 11.4，4.2 Hz，H-1α)，4.54(1H，dd，J= 11.4，3.4 Hz，H-1β)，4.62(1H，dd，J= 12.0，3.8 Hz，H-2)，2.89(1H，dd，J= 13.8，8.4 Hz，H-3α)，3.00(1H，dd，J= 13.8，6.6 Hz，H-3β)，7.66(2H，m，H-12，16)，7.50(1H，dd，J= 7.5，1.2 Hz，H-14)，7.39(2H，td，J= 7.5，1.2 Hz，H-13，15)，7.29～7.20(10H，m)，4.92(1H，q，J= 6.6 Hz，H-2′)，3.21(1H，dd，J= 13.8，6.9 Hz，H-3′α)，3.29(1H，dd，J= 13.8，6.9 Hz，H-3′β)，7.70(2H，m，H-12′，16′)，7.43(1H，dd，J= 7.5，1.2 Hz，H-14′)，7.31(2H，td，J= 7.5，1.2 Hz，H-13′，15′)，6.57(1H，d，J= 6.6 Hz，N-Hα)，6.67(1H，d，J= 8.4 Hz，N-Hβ)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：65.5(C-1)，50.4(C-2)，37.7(C-3)，137.3(C-4)，126.9(C-7)，129.4(C-5，9)，128.8(C-6，8)，167.6(C-10;C=O)，134.3(C-11)，127.2(C-12，16)，129.0(C-13，15)，132.2 (C-14)，172.0(C-1′;C=O)，54.6(C-2′)，37.4(C-3′)，135.9(C-4′)，127.5(C-7′)，129.3(C-5′，9′)，128.8(C-6′，8′)，167.3(C-10′;C=O)，133.4(C-11′)，127.3(C-12′，16′)，128.6(C-13′，15′)，131.5(C-14′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為N-benzoyl-L-phenylalaninyl-N-benzoyl-L-phenylalaninate。

化合物13白色粉末；HR-ESI-MS：m/z507.228 7 [M+H]+，分子式為C32H30N2O4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.20～7.50(5H，m，H-2，3，4，5，6)，3.00(1H，dd，J= 13.8，6.6 Hz，H-7α)，2.89(1H，dd，J= 13.8，8.4 Hz，H-7β)，4.61(1H，m，H-8)，4.54(1H，dd，J= 11.4，3.3 Hz，H-9α)，4.03(1H，dd，J= 11.4，4.2 Hz，H-9β)，7.20～7.50(5H，m，H-2′，3′，4′，5′，6′)，3.29(1H，dd，J= 13.8，6.6 Hz，H-7′α)，3.21(1H，dd，J= 13.8，6.6 Hz，H-7′β)，4.91(1H，q，J= 6.6 Hz，H-8′)，7.63～7.71(4H，m，H-2′′，6′′，2′′′，6′′′)，7.20～7.50(4H，m，H-3′′，5′′，3′′′，5′′′)，7.20～7.50(2H，m，H-4′′，4′′′)，6.66 (1H，d，J= 8.4 Hz，NH-8)，6.55(1H，d，J= 6.6 Hz，NH-8′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：129.4(C-2，6)，128.8(C-3，5)，127.0(C-4)，37.4(C-7)，50.4(C-8)，65.5(C-9)，129.3(C-2′，6′)，128.8(C-3′，5′)，127.3(C-4′)，37.7(C-7′)，54.6(C-8′)，127.2(C-2′′，6′′)，128.6(C-3′′，5′′)，131.5(C-4′′)，129.0(C-2′′′，6′′′)，128.2(C-3′′′，5′′′)，132.2(C-4′′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為N(N′-benzoyl-S-phenylalaninyl)-S-phenylalaninol benzoate。

化合物14白色粉末；HR-ESI-MS：m/z252.138 7 [M+H]+，分子式為C17H17NO。1H NMR (600 MHz，CDCl3)δ：7.36(5H，m，H-2，3，4，5，6)，2.92(1H，t，J= 6.9 Hz，H-7)，3.69(2H，q，J= 6.6 Hz，H-8)，7.51(2H，d，J= 6.9 Hz，H-2′，6′)，7.27(3H，m，H-3′，4′，5′)，7.64(1H，d，J= 15.6 Hz，H-7′)，6.34(1H，d，J= 15.6 Hz，H-8′)，5.66 (1H，brs，N-H)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：166.0(C-1)，120.7(C-2)，139.0 (C-3)，134.9(C-4)，128.8(C-5)，128.9(C-6，8)，129.8(C-7)，35.8(C-1′)，40.9(C-2′)，141.2(C-3′)，127.9(C-4′，8′)，128.8(C-5′，7′)，126.7(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為N-2-phenylethylcinnamamide。

化合物15白色粉末；HR-ESI-MS：m/z284.128 2 [M+H]+，分子式為C17H17NO3。1H NMR (600 MHz，CD3OD)δ：7.02(2H，dd，J= 8.2 Hz，H-2，6)，6.71(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3，5)，2.74(2H，t，J= 7.5 Hz，H-7)，3.44(2H，t，J= 7.5 Hz，H-8)，7.37(2H，dd，J= 8.4 Hz，H-2′，6′)，6.77(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3′，5′)，7.43(1H，d，J= 15.6 Hz，H-7′)，6.37(1H，d，J= 15.6 Hz，H-8′)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：132.3(C-1)，130.7(C-2)，115.9(C-3)，156.9(C-4)，115.9(C-5)，131.3(C-6)，35.8(C-7)，42.6(C-8)，127.7(C-1′)，130.7(C-2′)，116.2(C-3′)，160.5(C-4′)，116.7(C-5′)，130.5(C-6′)，141.8(C-7′)，118.4(C-8′)，169.2(C-9′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為N-trans-cumaroiltiramina。

化合物16無(wú)色針晶(MeOH)；mp.124-126 ℃；HR-ESI-MS：m/z337.126 4 [M+Na]+，分子式為C18H18O5。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：5.38(1H，dd，J= 12.9，3.0 Hz，H-2)，3.03(1H，dd，J= 16.7，12.9 Hz，H-3α)，2.69(1H，dd，J= 16.7，3.0 Hz，H-3β)，6.19 (2H，s，H-6，8)，7.40 (2H，m，H-2′，6′)，6.95(2H，m，H-3′，5′)，3.80(3H，s，7-OMe)，3.83(3H，s，4′-OMe)，3.84(3H，s，5′-OMe)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：80.2(C-2)，46.3(C-3)，192.2(C-4)，163.8(C-5)，93.8(C-6)，168.3(C-7)，95.0(C-8)，166.8(C-9)，106.6(C-10)，132.4(C-1′)，128.9(C-2′，6′)，115.0(C-3′，5′)，161.4(C-4′)，55.7(7-OMe)，56.3(4′，5′-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為5,7,4′-trimethoxyflavanone。

化合物17白色粉末；HR-ESI-MS：m/z163.136 9 [M+H]+，分子式為C10H10O2。1H NMR (600 MHz，DMSO-d6)δ：7.48(2H，d，J= 7.1 Hz，H-2，6)，7.42(1H，d，J= 15.9 Hz，H-3)，6.48(1H，d，J= 15.9 Hz，H-5)，7.23(1H，m，H-8)，3.17(1H，s，H-9)，3.36(3H，s，-OCH3)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：135.8(C-1)，127.3(C-2，6)，128.7(C-5，3)，138.9(C-7)，126.8(C-8)，172.8(C-9)，48.6(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為2-propenoic acid-3-phenyl-methyl ester。

化合物18無(wú)色棱晶(MeOH)；mp.131～161 ℃；HR-ESI-MS：m/z149.145 9 [M+H]+，分子式為C9H8O2。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.56(2H，m，H-2，6)，7.42(3H，m，H-3，4，5)，7.79(1H，d，J= 16.0 Hz，H-7)，6.46(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：134.2(C-1)，129.1(C-2，6)，128.5(C-3，5)，130.9(C-4)，117.1(C-7)，147.2(C-8)，170.9(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為trans-cinnamic acid。

化合物19白色粉末；HR-ESI-MS：m/z193.725 4 [M+H]+，分子式為C11H12O3。1H NMR (600 MHz，CDCl3)δ：7.44(2H，m，H-2，6)，6.84(2H，m，H-3，5)，7.64(1H，m，H-7)，6.30(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8)，4.25(2H，m，H-1′)，1.33(3H，t，J= 7.2 Hz，H-2′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：127.5(C-1)，130.1(C-2，6)，116.0(C-3，5)，157.7 (C-4)，144.4(C-7)，115.9(C-8)，167.6(C-9)，60.6(C-1′)，14.5(C-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為trans-p-hydroxycinnamic acid ethyl ester。

2.2 抗炎活性篩選結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)采用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥篩選模型，以氨基胍為陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)寬葉金粟蘭中分離所得含量較大的11個(gè)化合物(1～9、12和13)進(jìn)行了抗炎活性篩選(見(jiàn)表1)。

表1 化合物1～9、12和13的抗炎活性大小

結(jié)果顯示：當(dāng)濃度10 μmol/L時(shí)，化合物1～3、5、7、12和13具有一定的NO生成的抑制作用，表現(xiàn)出一定的抗炎活性，其中化合物2的抗炎活性較好。

3 結(jié)論

本文應(yīng)用現(xiàn)代色譜技術(shù)對(duì)寬葉金粟蘭95%乙醇提取物的二氯甲烷部位進(jìn)行了分離研究，從中分離得到19個(gè)化合物，包含倍半萜類6個(gè)、二萜類4個(gè)、酰胺類5個(gè)、黃酮類1個(gè)和酚酸類3個(gè)。15個(gè)化合物該植物中首次分離得到，其中6個(gè)化合物為首次從金粟蘭屬中分離得到。因NO是作為最為重要的炎癥介質(zhì)之一，參與多種炎癥性疾病的發(fā)病過(guò)程，被廣泛用于評(píng)價(jià)抗炎活性[26]，所以本文在化學(xué)成分的研究基礎(chǔ)上，對(duì)所分離的量較大的化合物1～9、12和13，以脂多糖(LPS)誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞為體外炎癥模型，通過(guò)抑制一氧化氮(NO)生成實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)化合物的抗炎活性。結(jié)果顯示，萜類化合物1、5、7和酰胺類化合物12、13具有較弱的抗炎活性，倍半萜類化合物2含量大且表現(xiàn)出較好的抗炎活性，提示化合物2可能是寬葉金粟蘭具有抗炎作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)之一。因此，本研究?jī)?nèi)容不僅豐富了寬葉金粟蘭的化學(xué)成分信息，也為拓寬民間中藥寬葉金粟蘭抗炎的藥用范圍提供了物質(zhì)基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。