黃海，宋佳璇，張迪，高睿，徐萬魁*（.遼寧省檢驗(yàn)檢測認(rèn)證中心 遼寧省藥品檢驗(yàn)檢測院，沈陽 0035；.中國人民解放軍北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院，沈陽 006）

苯佐卡因（benzocaine）為局麻藥，臨床上用于創(chuàng)面麻醉、潰瘍面麻醉、黏膜表面麻醉和痔瘡麻醉。苯佐卡因也是重要的醫(yī)藥中間體，可作為奧索仿、奧索卡因、普魯卡因等前體原料[1]。國內(nèi)上市的含有苯佐卡因的制劑有軟膏劑、凝膠劑和含片劑3種劑型。合成過程中，使用鈀碳作為加氫催化劑，因此成品中有鈀殘留的可能，美國藥典通則USP＜233＞和ICH Q3D元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則中都將鈀分級(jí)為2B，規(guī)定口服制劑原料藥中鈀的限度為10 μg·g－1；砷（As）、鎘（Cd）、汞（Hg）、鉛（Pb）分級(jí)為1類，釩（V）、鈷（Co）、鎳（Ni）分級(jí)為2A，也是在生產(chǎn)過程中容易引入的金屬雜質(zhì)，有潛在毒性，并誘導(dǎo)藥物降解，其含量在美國藥典通則和ICH Q3D中也有嚴(yán)格的規(guī)定，其限度分別為1.5、0.5、3、0.5、5、10、20 μg·g－1[2-3]，因此有必要對以上金屬雜質(zhì)的含量進(jìn)行控制。近年來，使用ICP-MS法測定原料藥與藥品制劑中金屬雜質(zhì)含量的研究也屢有報(bào)道[4-11]，ICP-MS具有靈敏度高、線性動(dòng)態(tài)范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，可以同時(shí)快速測定多個(gè)元素，因此，本文擬建立ICP-MS法對苯佐卡因原料藥中這8種金屬元素的含量進(jìn)行考察。

1 儀器與試藥

NexION 350X電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（micromist霧化器，石英旋流霧室）（PerkinElmer公司）；CEM MARS 240/50 微波消解儀（CEM公司）；XP205電子分析天平（梅特勒-托利多公司）。

單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液：鈷（Co，批號(hào)：191059-2）、鎳（Ni，批號(hào)：18C029-3）、釩（V，批號(hào)：18C019-2）、砷（As，批號(hào)：191010-2）、鈀（Pd，批號(hào)：19C015）、鎘（Cd，批號(hào)：191037-2）、鉛（Pb，批號(hào)：191001）、汞（Hg，批號(hào)：18C033-2）、銦（In，批號(hào)：18B016）、鉍（Bi，批號(hào)：18B020-2）（國家有色金屬及電子材料分析測試中心，質(zhì)量濃度：1000 μg·mL－1）；硝酸（TraceMetal Grade，F(xiàn)isher化學(xué)）；娃哈哈純凈水。苯佐卡因原料藥（錦州九泰藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：200201、200202、200203）。

2 方法與結(jié)果

2.1 工作條件

射頻功率：1895 W；載氣：氬氣；等離子氣流量：18 L·min－1；霧化器流量：0.92 L·min－1；泵速40 r·min－1；進(jìn)樣延遲時(shí)間：65 s；測量模式為標(biāo)準(zhǔn)模式，目標(biāo)元素檢測分子量，積分時(shí)間和內(nèi)標(biāo)選擇見表1。

表1 采集參數(shù)Tab 1 Acquisition parameter

2.2 內(nèi)標(biāo)溶液的制備

精密量取In、Bi單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用5%硝酸稀釋制成質(zhì)量濃度為10 μg·L－1的溶液。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備

精密量取V、Co、Ni、As、Pd、Cd、Pb、Hg單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液各適量，置于同一100 mL量瓶中，用5%硝酸稀釋制得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，其中Ni質(zhì)量濃度為10 μg·mL－1，其他元素質(zhì)量濃度為1 μg·mL－1；精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，用5%硝酸定量稀釋制成含V、Co、As、Pd、Cd、Pb、Hg分別為0.01、0.1、0.5、5.0、10.0、20.0 μg·L－1，含Ni分別為0.1、1、5、50、100、200 μg·L－1的溶液，即得。

2.4 供試品溶液的制備

精密稱取樣品約0.1 g，置于微波消解管中，加硝酸5 mL，照微波消解程序（見表2）消解；消解后的溶液放置至室溫，用水轉(zhuǎn)移定容至100 mL量瓶中，即得。

表2 微波消解程序Tab 2 Program of microwave digestion

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察 取“2.3”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液按“2.1”項(xiàng)下條件測定，以各元素強(qiáng)度與對應(yīng)的內(nèi)標(biāo)強(qiáng)度比值（Y）為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表3，各元素均在各自線性范圍內(nèi)與Y值呈良好線性關(guān)系。

2.5.2 檢測限與定量限 取硝酸5 mL，照“2.4”項(xiàng)下方法制備空白溶液，進(jìn)樣測定11次，計(jì)算11次測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差σ，以3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差與標(biāo)曲斜率的比值作為檢測限，10倍標(biāo)準(zhǔn)偏差與標(biāo)曲斜率的比值為定量限，結(jié)果見表3。

表3 8種元素線性關(guān)系、檢測限(LOD)以及定量限(LOQ)結(jié)果Tab 3 Standard curves，LOD and LOQ of 8 elements

2.5.3 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 取樣品（批號(hào)：200203）0.1 g，精密稱定，分別加入標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.4 mL，照“2.4”項(xiàng)下方法操作，制備低，中，高3個(gè)質(zhì)量濃度的供試品溶液，每個(gè)濃度平行制備3份，按“2.1”項(xiàng)下條件測定，考察回收率。結(jié)果表明，各元素平均加樣回收率均在94.7%～102.9%，RSD在1.1%～2.6%（n＝3），準(zhǔn)確度符合USP＜233＞規(guī)定的70%～150%的驗(yàn)證要求。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品（批號(hào)：200203）6份，精密稱定，照“2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下條件測定，分別計(jì)算各元素的RSD，結(jié) 果V為1.8%，Co為2.1%，Ni為2.5%，As為2.5%，Pd為1.1%，Cd為1.3%，Hg為2.7%，Pb為2.6%，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好，符合USP＜233＞重復(fù)性RSD≤20%的驗(yàn)證要求。

2.5.5 中間精密度試驗(yàn) 在不同日，由另一試驗(yàn)者進(jìn)行試驗(yàn)操作，結(jié)果V、Co、Ni、As、Pd、Cd、Hg、Pb 含量測定平均值分別為1.05、1.03、10.43、0.95、1.16、0.99、1.06、1.09 μg·L－1，RSD分 別為2.7%、1.9%、3.1%、3.4%、1.7%、3.1%、3.2%、1.9%（n＝12），表明本方法的中間精密度良好。

2.6 樣品測定結(jié)果

取3批苯佐卡因樣品（批號(hào)：200201、200202、200203），按“2.1”項(xiàng)條件下測定，各元素均有檢出，結(jié)果見表4，均未超出USP＜233＞規(guī)定限度。

表4 樣品測定結(jié)果Tab 4 Sample determination

3 討論

ICP-MS靈敏度高、線性動(dòng)態(tài)范圍寬，可以同時(shí)快速測定多個(gè)元素，但也存在諸如信號(hào)波動(dòng)和基體效應(yīng)，氧化物、雙電荷離子、多原子離子、同量異位素和物理效應(yīng)等干擾[12]，因此，需要考慮如何消除這些影響，找到合適的樣品處理和測試方法。

ICP-MS用于痕量金屬含量測定，直接溶解樣品測定更簡便易行，苯佐卡因雖微溶于水，但可溶于5%硝酸，使用5%硝酸溶解直接測定，樣品處理相對簡單，但由于基質(zhì)或者其他一些因素的影響，Pd元素平均回收率僅為62.9%，As元素平均回收率為113.0%。內(nèi)標(biāo)法可以有效降低儀器漂移和基體效應(yīng)，通過對鈧（Sc）、鍺（Ge）、In、Bi 4種內(nèi)標(biāo)進(jìn)行考察，選擇了最優(yōu)的內(nèi)標(biāo)，但是無法解決基質(zhì)對于Pd的影響；采用微波消解處理后的樣品回收率有極大改善，基本上去除了基質(zhì)的影響，各元素的回收率均在94.7%～102.9%。

通過對連續(xù)生產(chǎn)的3批樣品進(jìn)行測定，各元素含量均在規(guī)定限度范圍內(nèi)，說明生產(chǎn)過程中引入的金屬雜質(zhì)V、Co、Ni、As、Pd、Cd、Hg、Pb均在可控范圍內(nèi)，不會(huì)為其制劑的生產(chǎn)帶來風(fēng)險(xiǎn)。本方法具有較高的靈敏度，較好的重復(fù)性和準(zhǔn)確度，適用于苯佐卡因中金屬雜質(zhì)含量的測定。