許志，許必祥*，姜德建，賀靜，劉雪輝，黃昆（.湖南天勁制藥有限責(zé)任公司，長沙 4005；.湖南省藥物安全評價(jià)研究中心，長沙 4033）

強(qiáng)骨生血口服液（簡稱QGSX）主要由骨液、黨參、黃芪、靈芝、大棗、黑木耳組成，臨床上常用于氣血不足、肝腎虧虛、面色萎黃、筋骨萎軟、缺鐵性貧血、小兒佝僂病、婦女妊娠缺鈣的治療[1-4]。目前，在全世界人口中14 歲以下的兒童約占20%～25%，同時(shí)兒童患者數(shù)量占總患病人數(shù)的比例已超過20%[5-6]。兒童具有特殊的生理特點(diǎn)，處在生長發(fā)育的階段，生理機(jī)能變化大，機(jī)體各個(gè)器官系統(tǒng)功能尚未成熟，同一藥物在兒科人群體內(nèi)的吸收、分布、代謝及排泄過程與成人不同，因此要對兒童用藥進(jìn)行適當(dāng)?shù)陌踩匝芯縖7]。本實(shí)驗(yàn)采用QGSX連續(xù)給藥14周，通過臨床表現(xiàn)、體質(zhì)量、攝食量、血液理化指標(biāo)、骨密度、激素檢查、臟器系數(shù)、組織病理學(xué)檢查，系統(tǒng)考察QGSX對幼齡大鼠的毒性反應(yīng)情況，對其進(jìn)行兒童用藥臨床前安全性評價(jià)研究，為其臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 動物

成年SPF級SD大鼠雌性（母鼠）20只；仔鼠160只（雌雄各半），鼠齡為分娩后第1日（PND1）[湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司；實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SYXK（湘）2015-0016]；飼養(yǎng)環(huán)境：在光/暗周期為12 h/12 h（光照時(shí)間7：00～19：00）、20～26℃，濕度50%～60%的條件下，飼養(yǎng)于SPF級湖南省實(shí)驗(yàn)動物中心，大鼠自購入起適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d，自由獲取食物和飲用水。

1.2 試藥與儀器

QGSX（規(guī)格：30 mL/瓶，相當(dāng)于16 g生藥/瓶，湖南天勁制藥有限責(zé)任公司，批號：1805035）、甲紫溶液（1%結(jié)晶紫溶液）（廣東恒健制藥有限公司，批號：180201）、烏來糖（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公 司，批 號：20170301、20170413）、BC-5000Vet型獸用五類血液細(xì)胞分析儀（深圳邁瑞公司）、B203LED型生物顯微鏡（重慶奧特光學(xué)儀器有限公司）、LABOSPECT003型自動生化儀（日本日立儀器有限公司）、CA-530型自動血凝分析儀（日本希森美康雨有限公司）、Spectra Max i3x型多功能酶標(biāo)儀（上海美谷分子有限公司）、PL203型電子天平[梅特勒-托利多（上海）儀器有限公司]、BX43型生物顯微鏡＋MD50型數(shù)碼成像系統(tǒng)（日本奧林巴斯公司）、小動物骨密度和身體成分分析系統(tǒng)（韓國InAlyzer）。血清試劑盒（日本和光純藥工業(yè)株式會社）。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)分組

根據(jù)《藥物重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（2014）[3]，兒科用藥非臨床安全性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（征求稿意見，2017年），采用裂窩設(shè)計(jì)法，斷乳前，于首次給藥前2日（PND6），隨機(jī)將20只母鼠及160只仔鼠分為4個(gè)臨時(shí)小組，每組5只母鼠及40只仔鼠。將母鼠放入新的大鼠籠具中；小組內(nèi)部每窩動物抽取窩內(nèi)編號為F01的雌性仔鼠和窩內(nèi)編號為M01雄性仔鼠（共8只），交由組內(nèi)母鼠編號為1的母鼠進(jìn)行撫養(yǎng)；再自每窩其余動物中抽取窩內(nèi)編號為F02的雌性仔鼠和窩內(nèi)編號為M02雄性仔鼠（共8只），交由組內(nèi)母鼠編號為2的母鼠進(jìn)行撫養(yǎng)；依此類推直至將每窩中的仔鼠均勻分布至小組中各只母鼠撫養(yǎng)，并給予相應(yīng)編號如，1-1-1～1-1-8，1-2-1～1-2-8……，其他籠依此類推。在斷乳分籠當(dāng)日，按照之前各組中不同性別動物編號的順序進(jìn)行重新編號，對應(yīng)方法為將各籠動物的籠內(nèi)編號為1的動物按籠號順延并編為新的動物號，例如：1-1-1為1F01，1-2-1為1F02，1-3-1為1F03，1-4-1為1F04，1-5-1為1F05，1-1-2為1F06……1-5-4為1F30；依此類推進(jìn)行其他動物的編號。

2.2 實(shí)驗(yàn)劑量及給藥方式

實(shí)驗(yàn)組分為空白對照組和QGSX低、中、高劑量組（6.0、12.0、24.0 g生藥·kg－1），兒童臨床最高擬用劑量約為0.53 g生藥·kg－1（按照1歲兒童體質(zhì)量10 kg，每日用藥5.3 g生藥計(jì)），各組劑量分別為臨床劑量按公斤折算的11倍、23倍、45倍。灌胃給藥，首次給藥為大鼠出生后第8日（PND8），每日給藥1次，連續(xù)給藥14周，同時(shí)設(shè)空白對照組（純水），給藥體積均為15 mL·kg－1[8]。

2.3 臨床表現(xiàn)

對實(shí)驗(yàn)期動物進(jìn)行一般籠旁癥候觀察，并及時(shí)記錄，觀察頻率為每日一次。觀察指標(biāo)包括：動物外觀、行為活動、呼吸、分泌物、排泄物、飲食情況、死亡情況（死亡時(shí)間、瀕死前反應(yīng)）等。如出現(xiàn)臨床癥狀，需增加觀察次數(shù)，以便詳細(xì)觀察動物中毒反應(yīng)的癥狀及其起始時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間、是否可逆。如發(fā)現(xiàn)動物死亡或?yàn)l死應(yīng)及時(shí)對動物進(jìn)行解剖觀察并進(jìn)行詳細(xì)病理學(xué)檢查。

2.4 體質(zhì)量及攝食量測定

對動物體質(zhì)量進(jìn)行稱量，哺乳期內(nèi)仔鼠每日稱重一次，哺乳期內(nèi)母鼠及斷乳后仔鼠每周稱量二次，如果實(shí)驗(yàn)期間動物體質(zhì)量變化明顯，可增加稱量次數(shù)。對動物攝食量進(jìn)行測定，每籠每日添加一定量的飼料并做好相應(yīng)記錄，每周稱量記錄一次剩余飼料量，每周計(jì)算一次攝食量。攝食量計(jì)算公式如下：

攝食量（g·d－1×只）＝[加料總量（g）－剩余量（g）]/[存活動物數(shù)×測量間隔的天數(shù)＋死亡動物數(shù)×死亡動物存活天數(shù)]

2.5 血液理化指標(biāo)

給藥第14周后，對幼齡大鼠進(jìn)行采血，用血液細(xì)胞分析儀測定白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量等檢測；分離的血清分別用試劑盒測定天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST），丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）、白蛋白（ALB）、總蛋白（TP）、總膽固醇（CHOL）、葡萄糖（GLU）及三酰甘油（TG）等血液生化指標(biāo)。

2.6 骨密度檢測

給藥第14周后，取幼齡大鼠脛骨，采用小動物骨密度和身體成分分析系統(tǒng)進(jìn)行脛骨骨密度檢測，測定幼齡大鼠的骨密度（BMD）值。

2.7 臟器系數(shù)

給藥第14周后對摘除眼球取血后的大鼠進(jìn)行剖檢，稱量腦、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、腎上腺、胸腺、睪丸/卵巢、附睪/子宮的質(zhì)量，計(jì)算各臟器指數(shù)。稱量前用濾紙吸干表面水分。臟器指數(shù)＝臟器濕質(zhì)量（g）/體質(zhì)量（g）×100。

2.8 激素檢查

給藥第14周后對大鼠血清中生長激素（GH）、甲狀腺激素T3（T3）、甲狀腺激素T4（T4）、促皮質(zhì)激素（ACTH）、雌激素（E）、孕激素（PROG）、雄激素（androgen）進(jìn)行檢測。

2.9 組織病理學(xué)檢查

給藥第14周后，將對照組、高劑量組及尸檢異常動物進(jìn)行詳細(xì)檢查，如高劑量組動物某一組織發(fā)生與毒性相關(guān)的病理改變，需要對其他劑量組動物的相同組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，受檢的臟器為：大腦、小腦、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、肺、胸腺、睪丸、卵巢。

2.10 數(shù)據(jù)處理

計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x± s）表示，系統(tǒng)解剖及組織病理學(xué)采用定性指標(biāo)判斷結(jié)果。統(tǒng)計(jì)所用軟件為SPSS 16.0，兩兩比較，采用Independent-Samples T檢驗(yàn)；多組間比較先進(jìn)行方差齊和正態(tài)性比較，方差齊且符合正態(tài)性時(shí)采用LSD-t或Dunnett-t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)性時(shí)采用Nonparametric T檢驗(yàn)，符合正態(tài)性但方差不齊時(shí)采用Dunnett’s T3或Tamhane’s T2檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)表示，采用χ2檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果以α＝0.05為檢驗(yàn)界限，其中P≤0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果與分析

3.1 臨床表現(xiàn)

與空白對照組比較，大鼠經(jīng)口灌服QGSX 14周，各給藥劑量組大鼠的行為活動、外觀體征、分泌物、糞便和動物的一般狀況檢查均未見明顯異常。

3.2 體質(zhì)量

由圖1可知，與空白對照組比較，相同時(shí)間點(diǎn)下QGSX高、中、低劑量組的大鼠體質(zhì)量無顯著差異（P＞0.05），表明以臨床擬推薦兒童劑量的23倍，連續(xù)給藥14周，對幼齡大鼠體質(zhì)量無明顯影響。

圖1 QGSX對各組大鼠體質(zhì)量的影響Fig 1 Effect of QGSX on the body weight of rats in each group

3.3 攝食量

由圖2可知，各給藥組和對照組大鼠每周食耗量基本一致，表明QGSX對大鼠攝食量無明顯影響。

圖2 QGSX對大鼠攝食量的影響Fig 2 Effect of QGSX on the food intake of rats in each group

3.4 血常規(guī)檢查

由表1可知，與空白對照組比較，QGSX高、中、低劑量組的白細(xì)胞（WBC），中性粒細(xì)胞（Neu）， 淋巴細(xì)胞（Lym），單核細(xì)胞百分比（Mon）， 嗜酸性粒細(xì)胞（Eos），嗜堿粒細(xì)胞（Bas）等指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但雌、雄性幼齡大鼠低劑量組HGB（P≤0.01）以及雌性低、中劑量組RBC（P≤0.05）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 QGSX口服液對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響(±s)Tab 1 Effect of QGSX on the blood routine indexes of rats (±s)

表1 QGSX口服液對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響(±s)Tab 1 Effect of QGSX on the blood routine indexes of rats (±s)

注：與空白對照組比較，＋P≤0.05，＋＋P≤0.01（Compared with the blank control group，＋P≤0.05，＋＋P≤0.01）。

性別 組別 WBC/（×109·L－1） Neu/% Lym/% Mon/% Eos/% Bas/% RBC/（×1012·L－1）HGB/（g·L－1）雌 空白對照組 7.90±2.27 13.9±2.7 78.1±3.4 6.3±2.2 1.4±0.6 0.5±0.2 7.66±0.57 158±10 QGSX低劑量組 6.56±2.78 12.8±4.4 80.2±5.1 5.9±0.7 1.7±0.6 0.7±0.4 8.72±0.44＋＋ 177±10＋＋QGSX中劑量組 6.06±2.81 16.6±3.6 75.0±5.0 6.1±2.0 1.6±0.4 0.7±0.3 8.24±0.34＋ 165±7 QGSX高劑量組 5.97±2.02 20.9±9.7 71.4±9.6 5.4±0.8 1.8±0.4 0.5±0.2 8.06±0.39 160±8雄 空白對照組 11.54±4.46 17.2±3.6 74.6±5.5 6.0±2.1 1.6±0.4 0.5±0.2 8.82±0.39 166±8 QGSX低劑量組 13.86±2.35 16.5±4.0 69.9±4.3 6.4±1.2 1.7±0.6 0.6±0.1 9.37±0.47 178±10＋＋QGSX中劑量組 10.98±2.32 17.5±5.7 70.3±4.6 6.7±1.6 1.4±0.3 0.5±0.2 8.92±0.22 171±7 QGSX高劑量組 14.47±5.13 18.4±3.6 71.6±4.9 7.6±1.5 1.9±0.8 0.5±0.1 8.93±0.28 169±4

3.5 血液生化檢查

QGSX各劑量組血液生化指標(biāo)與空白對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），該實(shí)驗(yàn)條件下QGSX，對幼齡大鼠的血液生化指標(biāo)無明顯影響，結(jié)果見表2。

表2 QGSX對大鼠血液生化指標(biāo)的影響(±s)Tab 2 Effect of QGSX on the blood biochemical parameters of rats (±s)

表2 QGSX對大鼠血液生化指標(biāo)的影響(±s)Tab 2 Effect of QGSX on the blood biochemical parameters of rats (±s)

生化指標(biāo)ALT/（U·L－1）TBIL/（μmol·L－1）雌 空白對照組 40±5 121±38 43.0±2.9 42±7 55±4 1±0 0.28±0.30 QGSX低劑量組 43±13 109±32 41.2±3.1 43±9 56±5 1±1 0.40±0.30 QGSX中劑量組 37±6 108±12 42.5±3.2 45±12 55±5 1±1 0.21±0.13 QGSX高劑量組 34±6 88±13 44.5±2.2 47±12 56±4 1±1 0.21±0.17雄 空白對照組 39±5 101±8 36.9±1.2 78±17 56±2 1±0 0.59±0.18 QGSX低劑量組 37±5 94±7 36.8±0.8 91±12 56±1 1±0 0.63±0.21 QGSX中劑量組 36±5 103±9 35.9±0.9 90±9 55±1 1±1 0.57±0.13 QGSX高劑量組 35±7 89±12 36.9±0.9 90±8 55±1 1±0 0.61±0.24性別 組別 BUN/（mmol·L－1）性別 組別AST/（U·L－1）ALB/（g·L－1）ALP/（U·L－1）TP/（g·L－1）GGT/（U·L－1）GLU/（mmol·L－1）CRE/（μmol·L－1）TG/（mmol·L－1）CHO/（mmol·L－1）CK/（U·L－1）雌 空白對照組 8.33±1.23 39.6±5.2 6.99±0.65 0.48±0.26 1.95±0.33 993±553 QGSX低劑量組 8.95±1.30 39.5±7.2 7.66±0.96 0.52±0.38 2.46±0.70 737±315 QGSX中劑量組 8.34±0.84 38.1±3.2 7.40±1.35 0.54±0.16 2.34±0.25 859±209 QGSX高劑量組 8.96±1.66 39.2±8.0 6.35±0.67 0.45±0.16 2.18±0.31 661±196雄 空白對照組 6.37±0.56 33.6±2.0 8.21±0.93 0.76±0.42 1.93±0.37 713±136 QGSX低劑量組 6.19±0.63 35.6±4.9 8.43±1.44 0.92±0.46 1.60±0.18 820±318 QGSX中劑量組 6.07±0.40 34.1±2.5 8.87±0.82 1.13±0.58 1.68±0.21 718±135 QGSX高劑量組 6.24±0.39 34.0±3.0 8.75±0.85 0.95±0.56 1.71±0.17 756±210

3.6 BMD檢測

由表3可知，與空白對照組比較，QGSX高、中、低劑量組大鼠的骨密度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表3 QGSX對大鼠骨密度檢測指標(biāo)的影響(±s)Tab 3 Effect of QGSX on the bone marrow density parameters of rats (±s)

表3 QGSX對大鼠骨密度檢測指標(biāo)的影響(±s)Tab 3 Effect of QGSX on the bone marrow density parameters of rats (±s)

性別 組別 骨密度/（g·cm－2）雌 空白對照組 0.307±0.014 QGSX低劑量組 0.292±0.015 QGSX中劑量組 0.293±0.014 QGSX高劑量組 0.292±0.017雄 空白對照組 0.309±0.014 QGSX低劑量組 0.306±0.011 QGSX中劑量組 0.307±0.024 QGSX高劑量組 0.314±0.030

3.7 臟器、臟腦系數(shù)

由表4結(jié)果可知，QGSX各劑量組臟器系數(shù)與同期空白對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。表明該實(shí)驗(yàn)條件下QGSX，未見對幼齡大鼠主要臟器、臟腦指數(shù)造成明顯影響。

表4 QGSX口服液對大鼠主要臟器系數(shù)的影響統(tǒng)計(jì)表(±s)Tab 4 Effect of QGSX on the main organ indexes of rats (±s)

表4 QGSX口服液對大鼠主要臟器系數(shù)的影響統(tǒng)計(jì)表(±s)Tab 4 Effect of QGSX on the main organ indexes of rats (±s)

性別 組別 臟器系數(shù)/（g/100 g）腦心臟 肝臟 腎臟 腎上腺 胸腺 脾臟 卵巢/睪丸 子宮/附睪雌 空白對照組 0.641±0.0460.361±0.0342.810±0.2210.606±0.0420.023±0.0030.136±0.0280.214±0.0320.033±0.0020.283±0.072 QGSX低劑量組 0.652±0.0520.372±0.0432.635±0.1790.582±0.0320.021±0.0020.131±0.0260.211±0.0310.032±0.0050.300±0.095 QGSX中劑量組 0.636±0.0660.364±0.0322.842±0.1620.594±0.0380.021±0.0020.133±0.0270.213±0.0230.037±0.0090.330±0.100 QGSX高劑量組 0.637±0.0510.355±0.0422.769±0.1840.572±0.0250.023±0.0030.134±0.0240.209±0.0280.035±0.0070.293±0.089雄 空白對照組 0.396±0.0260.337±0.0262.783±0.2410.581±0.0410.012±0.0010.104±0.0150.181±0.0270.789±0.0910.247±0.031 QGSX低劑量組 0.380±0.0180.333±0.0352.726±0.2670.569±0.0290.012±0.0010.094±0.0240.174±0.0210.749±0.0450.252±0.029 QGSX中劑量組 0.378±0.0180.322±0.0233.017±0.2680.579±0.0400.012±0.0010.088±0.0240.161±0.0200.753±0.0450.254±0.036 QGSX高劑量組 0.382±0.0210.319±0.0142.823±0.1530.578±0.0460.012±0.0010.085±0.0150.175±0.0150.786±0.0470.235±0.024

3.8 QGSX對激素指標(biāo)的影響

由表5結(jié)果可知，QGSX各劑量組激素檢測指標(biāo)與同期空白對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明在該實(shí)驗(yàn)條件下QGSX，未見對幼齡大鼠激素指標(biāo)造成明顯影響。

表5 QGSX口服液對激素指標(biāo)的影響(±s)Tab 3 Effect of QGSX oral liquid on the hormone indexes of rats (±s)

表5 QGSX口服液對激素指標(biāo)的影響(±s)Tab 3 Effect of QGSX oral liquid on the hormone indexes of rats (±s)

激素指標(biāo)GH/（pg·mL－1）性別 組別PROG/（ng·mL－1）雌 空白對照組 127.991±19.304 73.536±6.231 4.215±0.190 8.174±0.582 61.885±11.641 33.110±0.879 18.961±1.482 QGSX低劑量組 139.503±15.023 68.088±4.267 4.034±0.364 7.738±0.819 64.462±24.840 32.501±2.032 18.108±1.547 QGSX中劑量組 139.562±15.017 67.507±4.775 4.027±0.459 8.079±1.007 54.193±13.221 33.903±1.993 18.692±1.377 QGSX高劑量組 159.458±65.470 67.512±4.761 4.237±0.277 8.427±1.114 69.216±23.366 33.867±1.815 19.623±2.264雄 空白對照組 175.738±8.562 79.145±7.442 5.639±0.361 7.843±0.758 59.482±3.480 45.036±3.134 QGSX低劑量組 170.903±13.085 90.653±22.943 5.345±0.300 7.782±0.371 54.042±0.410 44.669±1.567 QGSX中劑量組 183.003±11.538 91.634±16.848 5.536±0.382 7.482±0.615 58.347±4.902 46.020±2.727 QGSX高劑量組 184.512±10.470 94.429±5.105 5.900±0.252 7.691±0.482 58.016±5.216 46.237±1.529 E/（pg·mL－1）androgen/（ng·mL－1）ACTH/（pg·mL－1）T3/T4/（ng·mL－1）（nmol·L－1）

3.9 大鼠病理組織學(xué)檢查

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對各組大鼠進(jìn)行解剖，肉眼進(jìn)行病理學(xué)觀察，主要觀察大腦、小腦、心、肝、脾、肺、腎、胸腺、卵巢、睪丸等器官的外形、體積、色澤是否正常，有無充血、出血、腫脹和壞死等異?，F(xiàn)象。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各給藥組與空白對照組大鼠的各臟器均未見任何異常。

取高劑量組和空白對照組大鼠的大腦、小腦、心、肝、脾、肺、腎、胸腺、卵巢、睪丸等臟器以福爾馬林固定，石蠟切片，鏡檢各臟器的組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果表明，高劑量與空白對照組大鼠的各臟器組織學(xué)結(jié)構(gòu)清楚，未見明顯異常，結(jié)果表明，QGSX該實(shí)驗(yàn)條件下，未見對幼齡大鼠主要臟器外觀形態(tài)及組織結(jié)構(gòu)造成明顯影響（見圖3）。

圖3 大鼠主要臟器組織病理學(xué)（200×）Fig 3 Histopathology of main organs of rats （200×）

4 討論

兒童是特殊用藥人群，為保障其用藥安全，對QGSX開展臨床前兒童用藥安全性評價(jià)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。重復(fù)給藥毒性實(shí)驗(yàn)研究是藥物臨床前安全性評價(jià)重要內(nèi)容之一，將藥物按照臨床用藥途徑大劑量多次給藥，密切檢測動物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和中毒靶組織器官，能夠獲得毒性產(chǎn)生的量效和時(shí)效關(guān)系，預(yù)測藥物在臨床上可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng)性質(zhì)及發(fā)生率，對藥物的臨床應(yīng)用具有重要的參考意義[9-10]。在藥物安全性評價(jià)中，藥物作用常會引起動物一些器官質(zhì)量的減少，根據(jù)臟器系數(shù)來檢驗(yàn)動物的臟器是否受到藥物的不良影響[11]，根據(jù)血液學(xué)指標(biāo)判定藥物是否具有毒性[12]，根據(jù)血液生化指標(biāo)判定藥物對主要臟器是否有毒性作用[13]。

本幼齡SD大鼠重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，QGSX重復(fù)給藥14周對幼齡SD大鼠三個(gè)劑量下的臨床表現(xiàn)、體質(zhì)量、攝食量、骨密度、血液生化指標(biāo)、激素指標(biāo)、臟器系數(shù)均無明顯影響，組織病理學(xué)檢查結(jié)果亦顯示，三個(gè)劑量下未見明顯的毒性靶器官。與空白對照組比較，大鼠骨密度指標(biāo)無顯著差異，可能與機(jī)體對大劑量鈣的吸收利用度有限有關(guān)，實(shí)際臨床中采取維生素D與鈣同補(bǔ)，以提高鈣的吸收利用度。與空白對照組比較，血常規(guī)指標(biāo)中，給藥末期給藥組雌雄大鼠低劑量組HGB明顯高于同期空白對照組，雌性大鼠低、中劑量組RBC明顯高于同期空白對照組，臨床上以HGB、RBC作為缺鐵性貧血診斷指標(biāo)，結(jié)合前期藥效學(xué)研究發(fā)現(xiàn)QGSX具有上調(diào)骨髓微環(huán)境中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1（PECAM-1）蛋白表達(dá)，調(diào)節(jié)骨髓有核細(xì)胞周期，促進(jìn)骨髓細(xì)胞分裂，調(diào)節(jié)骨髓細(xì)胞中有核細(xì)胞數(shù)，直接升高HGB與RBC的藥理作用[14]，因此可認(rèn)為該變化與供試品藥理作用相關(guān)，無明顯毒理學(xué)意義。高劑量幼齡大鼠GH指標(biāo)雖無明顯差異，但極差較大，可以歸因于幼齡大鼠處于發(fā)育期，動物本身存在個(gè)別差異，特別是激素水平的變化。

綜上所述，通過本研究結(jié)果可得出QGSX幼齡大鼠重復(fù)給藥14周最大無毒反應(yīng)劑量為12 g生藥·kg－1，約相當(dāng)于兒童臨床擬用公斤劑量的23倍（1歲兒童按體質(zhì)量10 kg計(jì)算）。提示本品臨床應(yīng)用安全范圍較大，安全窗較寬。