郭敏，賀依依，徐虹，姜祎*，張化為，楊新杰，黃文麗，鄧翀，許洪波，王薇*，宋小妹（.陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，陜西 咸陽 7046；.陜西省中藥資源產(chǎn)業(yè)化協(xié)同創(chuàng)新中心、陜西省創(chuàng)新藥物研究中心，陜西 咸陽 7046）

脂肪肝是由多種疾病和原因引起的肝臟脂肪性變[1]，可進(jìn)一步發(fā)展為脂肪性肝炎、肝硬化、肝癌，而且脂肪肝是冠心病的易患因素之一[2]。由于其發(fā)病率不斷增加，已經(jīng)成為一種嚴(yán)重威脅人類健康的高發(fā)疾病[3-4]。

珠子參為五加科植物珠子參Panax japonicusC.A.Mey.var.major（Burk.）C.Y.Wu et K.M.Feng或羽葉三七Panax japonicusC.A.Mey.var.bipinnatifidus（Seem.）C.Y.Wu et K.M.Feng的干燥根莖[5]，主要分布在陜西、甘肅、寧夏、河南、湖南、湖北、四川、云南、西藏等地[6]。珠子參的化學(xué)成分多樣，主要包括三萜及其皂苷類、揮發(fā)油類、甾體及其皂苷類、黃酮類及微量元素等[7]，其中，珠子參的皂苷類化學(xué)成分表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗腫瘤活性[8]和抗肝損傷作用[9]。珠子參的地上部分稱為“參葉”“漢中參葉”，局部地區(qū)僅將其作為茶葉飲用，利用率低。珠子參可通過抑制c-Jun氨基末端激酶（JNK）和C/EBP同源蛋白（CHOP）的表達(dá)來抑制高脂飲食模型組大鼠的肝細(xì)胞凋亡，對高脂飲食誘發(fā)的肝損傷具有一定保護(hù)作用[10]。本研究擬對珠子參地上部分防治脂肪肝的有效成分以及相關(guān)作用機(jī)制進(jìn)行探討。

本研究遵循網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)理論與技術(shù)[11]，篩選珠子參地上部分活性成分及潛在靶點(diǎn)，通過構(gòu)建活性成分和靶標(biāo)（C-T）、靶標(biāo)和疾?。═-D）網(wǎng)絡(luò)圖，并進(jìn)行GO功能和KEGG通路的富集分析以及分子對接驗(yàn)證，通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證珠子參地上部分對環(huán)氧合酶2（PTGS2）、絲裂原激活的蛋白激酶3（MAPK3）、過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARG）的影響，以期從分子層面初步探討珠子參地上部分防治脂肪肝的可能作用機(jī)制，為后續(xù)深入研究珠子參地上部分防治脂肪肝作用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

1.1.1 數(shù)據(jù)庫及軟件 TCMSP數(shù)據(jù)庫（http：//lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）；Swiss TargetPrediction數(shù)據(jù)庫（http：//www.swisstargetprediction.ch/）；Uniprot數(shù)據(jù)庫（https：//www.uniprot.org）；Genecards數(shù)據(jù)庫（https：//genecards.weizmann.ac.il/v3/）；Cytoscape 3.2.1軟件；功能蛋白聯(lián)系網(wǎng)絡(luò)（String）數(shù)據(jù)庫（https：//string-db.org/）；R project軟件；Autodock_vina 軟件（http：//vina.scripps.edu/）；Protein Data Bank數(shù)據(jù)庫（PDB https：//www.rcsb.org/）；運(yùn)行環(huán)境 Microsoft Windows 10 Home Basic操作系統(tǒng)。

1.1.2 珠子參地上部分活性成分及其靶點(diǎn)的篩選

利用TCMSP數(shù)據(jù)庫、Swiss TargetPrediction數(shù)據(jù)庫及現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道，查找珠子參地上部分中的化學(xué)成分，在此基礎(chǔ)上以O(shè)B≥20%、DL≥0.1作為活性成分篩選條件[12]，將篩選出的活性成分逐一配對潛在作用靶點(diǎn)，再通過Uniprot數(shù)據(jù)庫進(jìn)行靶點(diǎn)蛋白和基因信息校正，預(yù)測珠子參地上部分主要活性成分的靶點(diǎn)。

1.1.3 脂肪肝相關(guān)疾病靶點(diǎn)的篩選 以“fatty liver”為關(guān)鍵詞在Genecards數(shù)據(jù)庫中查找與脂肪肝相關(guān)的靶點(diǎn)。將活性成分靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)取交集繪制韋恩圖，篩選出共同靶點(diǎn)。

1.1.4 “藥物-成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建將珠子參地上部分活性成分與脂肪肝相關(guān)疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)輸入Cytoscape軟件，構(gòu)建“藥物-成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)。

1.1.5 關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將篩選出的共同靶點(diǎn)輸入String數(shù)據(jù)庫，構(gòu)建靶點(diǎn)蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)圖，在構(gòu)建的PPI網(wǎng)絡(luò)圖中，節(jié)點(diǎn)的大小和顏色深淺反映了度值（degree）大小，邊粗細(xì)反應(yīng)組合分?jǐn)?shù)（combine score）大小。計(jì)算網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)度值，度值越大代表節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中越處于核心地位，分析PPI網(wǎng)絡(luò)圖，并按度值大小進(jìn)行分類。

1.1.6 關(guān)鍵靶點(diǎn)的GO分析與KEGG通路富集分析 使用R project軟件的生物學(xué)分析功能，對珠子參地上部分防治脂肪肝的關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行GO分析和KEGG通路富集分析。在此程序語言中，定義P＜0.05，Q＜0.05，最后將分析結(jié)果以條形圖的形式展示。

1.1.7 活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)的分子對接驗(yàn)證根據(jù)上述篩選出的活性成分和核心靶點(diǎn)，從PDB 數(shù)據(jù)庫獲取相應(yīng)靶點(diǎn)的蛋白結(jié)構(gòu)，使用Autodock_vina 軟件對靶點(diǎn)與活性成分進(jìn)行分子對接驗(yàn)證。

1.2 動物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

1.2.1 試藥與儀器 珠子參地上部分（來源于道地產(chǎn)區(qū)陜西秦嶺，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源辦公室鑒定為中藥珠子參的干燥帶莖葉）；生理鹽水（100 mL，西安京西雙鶴藥業(yè)有限公司）；魚肝油（批號：20200407，青島雙鯨藥業(yè)有限公司）；總膽固醇（T-CHO）測定試劑盒（批號：20200506）、三酰甘油（TG）測定試劑盒（批號：20200508）（南京建成生物工程研究所）。山羊血清（批號：SL038，北京索萊寶科技有限公司），DAB（批號：DAB-1031，福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司），HRP-山羊抗兔IgG（批號：115-035-003，美國Jackson ImmunoResearch公司）；PTGS2（WL0232a）、MAPK3（WL01864）、PPARG（WL01800）（萬類生物科技有限公司）。

GZX-9240MBE型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司）；KQ-50E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Elx808型吸收光酶標(biāo)儀（美國伯騰儀器有限公司）；AL204型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；ACS-A型電子計(jì)重秤（上海友聲衡器有限公司）；KDC-160HR型高速冷凍離心機(jī)（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動物 昆明種小鼠40只，高脂飼料、普通飼料均由西安交通大學(xué)提供。高脂飼料：每500 g普通飼料加入蛋黃粉30 g，魚肝油2粒（含維生素A 4000單位，維生素D31400單位），白砂糖10 g、豬油10 g、食鹽3 g，混勻，制棒狀，90℃烘干[13]。

1.2.3 珠子參地上部分提取物的制備 取干燥珠子參地上部分320.00 g，加13倍量水，浸泡0.5 h，煎煮3次，每次2 h，過濾，合并濾液，濃縮，干燥，得到珠子參地上部分水提物粉末56 g。取珠子參地上部分水提物粉末適量，加水配制成0.2 g·mL－1的溶液備用。

1.2.4 肥胖模型建立 選用體質(zhì)量20～24 g雌性小鼠24只，隨機(jī)分為正常組和肥胖模型組。正常組6只，喂養(yǎng)普通飼料；肥胖模型組18只，喂養(yǎng)高脂飼料。連續(xù)喂養(yǎng)35 d，期間質(zhì)量小鼠均自由攝食、攝水。

1.2.5 實(shí)驗(yàn)方法 將肥胖模型組小鼠隨機(jī)分為3組，分別為模型組、高劑量組和低劑量組，每組6只。模型組按0.2 mL/只灌胃生理鹽水，高劑量組按0.2 mL/只灌胃0.2 g·mL－1的珠子參地上部分提取物，低劑量組按0.1 mL/只灌胃0.2 g·mL－1的珠子參地上部分提取物，每日一次，連續(xù)灌胃一周。給藥結(jié)束最后1 d，禁食12 h，內(nèi)眥取血，1000×g離心10 min分離血清，測定各組血清中 TG、TC水平。

取小鼠肝臟組織，將肝臟組織用4%多聚甲醛固定液充分固定后分為兩份進(jìn)行組織學(xué)制片，一份樣品用30%蔗糖溶液脫水后用OCT包埋制作冰凍切片，冰凍切片制備完成后進(jìn)行油紅O染色；另一份樣品用于免疫組化實(shí)驗(yàn)，固定好的組織經(jīng)包埋切片后，將切片脫蠟至水，抗原修復(fù)后使用3%過氧化氫室溫孵育25 mim，PBS清洗5 min（3次）；滴加10%正常山羊血清均勻覆蓋組織室溫封閉30 min；甩掉血清，加入按比例稀釋好的一抗均勻覆蓋組織，4℃過夜后從冰箱拿出切片復(fù)溫30 min，PBS洗5 min（3次），加入按比例稀釋好的二抗室溫孵育50 min，PBS洗5 min（3次）；用現(xiàn)配的DAB顯色，純水沖洗終止顯色；蘇木精復(fù)染，脫水、透明、封固。

2 結(jié)果

2.1 珠子參地上部分活性成分及其靶點(diǎn)篩選

經(jīng)過篩選，共有5個主要活性成分與課題研究相關(guān)，如表1所示。對這5個成分進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測以及靶點(diǎn)蛋白和基因信息校正，篩選重復(fù)值后得到175個靶點(diǎn)。

表1 珠子參地上部分中的主要活性成分Tab 1 Main active ingredients in APRPM

2.2 脂肪肝相關(guān)疾病靶點(diǎn)的篩選

Genecards數(shù)據(jù)庫中共查找到與脂肪肝相關(guān)的靶點(diǎn)1481個，然后將上述的預(yù)測靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)取交集繪制韋恩圖，篩選出共同靶點(diǎn)86個，如圖1所示，將其定義為珠子參地上部分防治脂肪肝的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

圖1 脂肪肝相關(guān)靶點(diǎn)與珠子參地上部分作用靶點(diǎn)交集Fig 1 Intersection of related targets of fatty liver with in APRPM targets

2.3 “藥物-成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建和分析

將珠子參地上部分活性成分與脂肪肝相關(guān)疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)輸入Cytoscape軟件，構(gòu)建“藥物-成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，如圖2所示（其中藍(lán)色菱形代表藥物，粉色多邊形代表藥物中所含的活性成分，黃色六邊形代表疾病，藍(lán)色圓形代表藥物活性成分所作用的靶點(diǎn)映射到疾病的靶點(diǎn)；網(wǎng)絡(luò)圖中的節(jié)點(diǎn)代表珠子參地上部分及其有效活性成分、疾病、靶點(diǎn)等；邊代表珠子參地上部分與其活性成分、活性成分與成分作用靶點(diǎn)、疾病與作用靶點(diǎn)等之間的相互關(guān)系）。

圖2 珠子參地上部分防治脂肪肝的“藥物-成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)Fig 2 “Drug-component-disease-target” network for the prevention and treatment of fatty liver in APRPM

2.4 關(guān)鍵靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將篩選出的關(guān)鍵靶點(diǎn)輸入到String數(shù)據(jù)庫，構(gòu)建珠子參地上部分防治脂肪肝靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖，如圖3所示。在構(gòu)建的PPI網(wǎng)絡(luò)中共包含節(jié)點(diǎn)84個，邊513條。其中該網(wǎng)絡(luò)圖中靶點(diǎn)對應(yīng)的平均度值為12.21，按照度值大于平均值篩選出的關(guān)鍵靶點(diǎn)有29個，如表2所示。靶點(diǎn)的度值越高，活性成分作用于該靶點(diǎn)發(fā)揮治療作用的概率越大。

圖3 珠子參地上部分防治脂肪肝靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖Fig 3 Protein-protein interaction network of APRPM prevention and treatment of fatty liver targets

表2 部分關(guān)鍵靶點(diǎn)的度值參數(shù)Tab 2 Degree parameters of some key targets

2.5 GO分析和KEGG通路富集分析

利用軟件R projiect分析86個關(guān)鍵靶點(diǎn)主要富集的細(xì)胞學(xué)組分、分子功能與生物學(xué)過程。其中所涉及的生物學(xué)功能與過程有類固醇代謝過程、脂肪酸代謝過程、不飽和脂肪酸代謝過程、脂肪酸衍生物代謝過程等。前20位GO分析結(jié)果見圖4。

圖4 關(guān)鍵靶點(diǎn)的GO富集分析Fig 4 Gene ontology pathway enrichment analyses

對珠子參地上部分防治脂肪肝的86個關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行 KEGG 富集分析，涉及的通路包括PPAR信號通路（PPAR signaling pathway）、非酒精性脂肪肝通路（non-alcoholic fatty liver disease）、細(xì)胞色素P450對外源生物的代謝通路（metabolism of xenobiotics by cytochrome P450）、脂肪消化吸收通路（fat digestion and absorption）。通過通路富集分析發(fā)現(xiàn)這些信號通路對疾病的形成以及發(fā)展存在影響。前10位KEGG通路富集分析結(jié)果見圖5。

圖5 關(guān)鍵靶點(diǎn)的KEGG富集分析Fig 5 KEGG pathway enrichment analyses

表3 珠子參地上部分防治脂肪肝相關(guān)信號通路Tab 3 Signal pathways related to the prevention and treatment of fatty liver by APRPM

2.6 分子對接驗(yàn)證

使用分子對接模擬軟件Autodock_vina，將PPI網(wǎng)絡(luò)中度值排名靠前的靶點(diǎn)蛋白PTGS2、MAPK3、PPARG分別與珠子參地上部分活性成分進(jìn)行分子對接驗(yàn)證，計(jì)算活性成分與受體蛋白間的最低結(jié)合能。從PDB數(shù)據(jù)庫篩選的PTGS2受體蛋白PDBID為5F1A；MAPK3受體蛋白PDB-ID為4QTB；PPARG受體蛋白PDB-ID 為6MS7。若結(jié)合能＜0，表明配體分子均能和受體蛋白能自發(fā)地結(jié)合，且結(jié)合能＜－5.0 kcal·mol－1，表明其結(jié)合良好，結(jié)合能越小，結(jié)合性越好。分子對接最低結(jié)合能計(jì)算結(jié)果見表4，活性成分與受體蛋白對接的最低結(jié)合能對應(yīng)的可視化結(jié)果見圖6。表4的結(jié)果表明大部分活性成分與受體蛋白的最低結(jié)合能均遠(yuǎn)小于－5.0 kcal·mol－1，結(jié)合圖6的分子對接可視化結(jié)果，說明PTGS2、MAPK3、PPARG 3個靶點(diǎn)能夠與活性成分自發(fā)結(jié)合并借助氫鍵等分子間作用力形成較為穩(wěn)定的構(gòu)象。

圖6 活性成分與3種受體蛋白的分子可視化結(jié)果Fig 6 Visualization of molecular docking of active ingredients and 3 receptor proteins

表4 活性成分與受體蛋白的最低結(jié)合能Tab 4 Minimum binding energy of active ingredients and receptor proteins

2.7 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

2.7.1 珠子參地上部分提取物對受試小鼠體質(zhì)量的影響 給藥4～5 d后，受試小鼠體質(zhì)量逐漸下降，給藥7 d后，與模型組相比較，高劑量組和低劑組小鼠體質(zhì)量均明顯下降（P＜0.01）。7 d后高劑量組與低劑量組肥胖指數(shù)均低于正常組，見表5。

表5 給藥前后珠子參地上部分提取物對受試小鼠體質(zhì)量的影響(±s)Tab 5 Effect of extracts from APRPM on the body mass of tested mice before and after the administration (±s)

表5 給藥前后珠子參地上部分提取物對受試小鼠體質(zhì)量的影響(±s)Tab 5 Effect of extracts from APRPM on the body mass of tested mice before and after the administration (±s)

注：與模型組相比較，*P＜0.01（Compared with the model group，*P＜0.01）。

7 d后肥胖指數(shù)正常組 27.25±0.88 29.58±1.69 10.33±0.23 289.24±2.57模型組 31.92±2.18 34.58±2.69 11.03±0.23 295.13±4.19高劑量組 29.8±1.29 29.17±2.07* 10.85±0.11 282.69±5.49低劑量組 28.5±2.92 28.00±3.48* 10.88±0.17 280.21±7.78組別 初始體質(zhì)量/g 7 d后體質(zhì)量/g 7 d后體長/cm

2.7.2 珠子參地上部分提取物對受試小鼠血清TG、TC的影響 結(jié)果顯示，與對照組相比，高劑量組和低劑量組小鼠的TG和TC均有所降低，說明珠子參地上部分提取物能夠有效降低肥胖小鼠的TG和TC（見表6）。

表6 給藥后的TG、TC水平 (±s)Tab 6 Level of TG and TC after the administration (±s)

表6 給藥后的TG、TC水平 (±s)Tab 6 Level of TG and TC after the administration (±s)

注：與模型組相比較，*P＜0.01（Compared with the model group，*P＜0.01）。

組別 TG/（mmol·L－1） TC/（mmol·L－1）正常組 2.58±0.24 1.71±0.27模型組 2.74±0.31 1.67±0.35高劑量組 2.04±0.56* 1.51±0.39*低劑量組 2.13±0.40* 1.49±0.32*

2.7.3 珠子參地上部分提取物對肝臟組織的影響

正常組的肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，脂肪滴極少，顏色淺；模型組脂肪滴數(shù)量明顯增多，顏色深，細(xì)胞界限較模糊；高劑量和低劑量組脂肪滴數(shù)量明顯少于模型組，高劑量組顏色與正常組接近，低劑量組顏色略高于正常組，結(jié)果見圖7。

圖7 油紅O染色觀察各組小鼠肝臟病理變化（200×）Fig 7 Hepatic pathological change of mice by oil red O staining in each group（200×）

2.7.4 珠子參地上部分提取物對肝臟組織中PTGS2、MAPK3、PPARG蛋白的影響 小鼠肝臟的免疫組化切片及光密度測定結(jié)果見圖8和圖9。結(jié)果顯示，與模型組比較，珠子參地上部分水提物顯著降低了小鼠的肝臟組織中PTGS2的表達(dá)，升高了MAPK3、PPARG蛋白的表達(dá)（P＜0.05，P＜0.01）。

圖8 各組小鼠肝臟組織中PTGS2、MAPK3、PPARG的蛋白表達(dá)（200×）Fig 8 Expression of PTGS2，MAPK3 and PPARG in the liver of mice in each group（200×）

圖9 珠子參地上部分對小鼠肝臟組織中PTGS2、MAPK3、PPARG蛋白表達(dá)的影響（n＝6）Fig 9 Effect of APRPM on protein expression of PTGS2，MAPK3 and PPARG in liver tissue of mice（n＝6）

3 討論

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法結(jié)合分子對接，最終篩選出珠子參地上部分的活性成分5個，靶點(diǎn)175個；脂肪肝相關(guān)的疾病靶點(diǎn)1481個；構(gòu)建的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)，其中包含節(jié)點(diǎn)84個，邊513條；分子對接結(jié)果顯示PTGS2、MAPK3、PPARG 3個核心靶點(diǎn)能夠與活性成分結(jié)合并借助氫鍵等分子間作用力形成較為穩(wěn)定的構(gòu)象。

在GO 功能和KEGG 通路富集分析結(jié)果中，珠子參地上部分防治脂肪肝的作用機(jī)制與類固醇代謝過程、脂肪酸代謝過程、不飽和脂肪酸代謝過程、脂肪酸衍生物代謝過程等生物學(xué)功能與過程有關(guān)以及和PPAR信號通路、非酒精性脂肪肝通路、細(xì)胞色素P450對外源生物的代謝通路、脂肪消化吸收通路等相關(guān)。

PTGS2、MAPK3、PPARG是PPI 網(wǎng)絡(luò)中按度值排名靠前的關(guān)鍵靶蛋白。PTGS2是前列腺素（PG）合成的關(guān)鍵酶，它在多種細(xì)胞和組織的炎癥過程及增殖中發(fā)揮重要作用[14]。PTGS2及其合成產(chǎn)物可以對脂肪、糖類、蛋白質(zhì)的代謝產(chǎn)生作用，干擾肝臟正常的脂代謝，導(dǎo)致TC的蓄積[15]。脂質(zhì)代謝紊亂會引發(fā)高脂血癥，最終導(dǎo)致脂肪肝、動脈粥樣硬化等疾病。免疫組化實(shí)驗(yàn)說明珠子參地上部分能夠抑制PTGS2的表達(dá)，降低小鼠血清中TG和TC的含量，說明珠子參地上部分有一定調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用。MAPK3、MAPK8、MAPK1 均屬于MAPK（絲裂原蛋白活化激酶）家族。MAPK 可被上游激酶活化并磷酸化，從而活化下游因子，發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化及死亡的作用[16]。PPAR是調(diào)節(jié)各種生化反應(yīng)的配體激活型轉(zhuǎn)錄因子，有PPARA、PPARB、PPARG 3種亞型。研究證明，PPAR參與過氧化物酶體和脂質(zhì)生長等過程，控制并調(diào)節(jié)參與糖及脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達(dá)、體內(nèi)動態(tài)平衡以及脂肪形成等[17]。脂肪組織會分泌一些與脂肪移動有關(guān)的激素和細(xì)胞因子，而PPARG對脂肪細(xì)胞的增生和分化起著重要作用，PPARG被其配體激活后，能促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化，并能抑制這些細(xì)胞因子的表達(dá)和活性[18]。由于脂肪細(xì)胞主要存在于白色脂肪中，營養(yǎng)豐富時以TC的形式儲存能量，營養(yǎng)缺乏時以脂肪酸形式釋放能量，脂肪細(xì)胞的過度增生和分化可造成脂肪細(xì)胞生成過多，而PPARG的激活增加了脂肪酸的攝取，對脂肪細(xì)胞的分化起正向調(diào)節(jié)作用，抑制PPARG能阻斷脂肪細(xì)胞分化效應(yīng)[19]。本研究中高劑量組和低劑量組TG和TC與模型組相比較均有所降低，說明珠子參地上部分水提物能夠影響脂肪細(xì)胞分化，明顯降低脂肪組織攝取脂肪酸。同時，利用Autodock_vina 對PTGS2、MAPK3、PPARG 3個靶點(diǎn)與活性成分進(jìn)行分子對接驗(yàn)證，結(jié)果顯示上述兩個靶點(diǎn)的受體蛋白均能與核心活性成分較穩(wěn)定地自發(fā)結(jié)合。由此可以推測，珠子參地上部分可能通過活性成分作用于PTGS2、MAPK3、PPARG受體達(dá)到防治脂肪肝的效果。

免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組比較，珠子參地上部分水提物顯著降低了小鼠的肝臟組織中PTGS2的表達(dá)，升高了MAPK3、PPARG蛋白的表達(dá)，說明珠子參地上部分能夠抑制肝臟組織中PTGS2受體蛋白的表達(dá)，增強(qiáng)MAPK3、PPARG受體蛋白的表達(dá)，證實(shí)其通過對PTGS2、MAPK3、PPARG 3個核心靶點(diǎn)的基因及蛋白的直接作用，發(fā)揮藥理作用，同時也印證了分子對接結(jié)果的合理性。

綜上所述，本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、分子對接的研究方法，對珠子參地上部分防治脂肪肝的作用機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)分析和討論，并通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證為研究其機(jī)制提供了部分依據(jù)，但圍繞珠子參地上部分防治脂肪肝的靶點(diǎn)、通路的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)仍需進(jìn)一步展開。