樊培，陸云陽(yáng)，劉楊，劉文章，胡晉銘，田韻遠(yuǎn)，李天怡，赫雪鋒，2，湯海峰*（.空軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系中藥與天然藥物學(xué)教研室，西安 70032；2.解放軍第九六八醫(yī)院，北京 22000）

重樓屬植物屬于百合科（Liliaceae，亦有將其歸為延齡草科Trilliaceae），共有26種14余變種和若干變型，我國(guó)約有20種10余變種[1-2]。2020年版《中國(guó)藥典》收載的藥用重樓為七葉一枝花和云南重樓，主產(chǎn)于四川、云南、陜西等地，具有清熱解毒、消腫止痛和涼肝定驚的功效，用于治療疔瘡癰腫、咽喉腫痛、蟲蛇咬傷、跌撲傷痛等疾病[3]。

巴山重樓（Paris bashanensis）作為重樓屬的一種，主要分布在湖北和四川[4]，土家族通常用于頭痛、高血壓、蛇咬傷和痢疾的治療[5]。經(jīng)作者實(shí)地考察，發(fā)現(xiàn)在陜南（大巴山北側(cè)腹地，東經(jīng)109°11'～109°38'、北 緯31°42'～32°13'）也有分布。甾體皂苷是重樓的主要有效成分，但目前關(guān)于巴山重樓化學(xué)成分的研究報(bào)道有限，僅從中分離得到1個(gè)β-蛻皮激素、1個(gè)偏諾甾酮和3個(gè)偏諾皂苷[6]；此外，亦有關(guān)于其皂苷含量測(cè)定的報(bào)道，但不同報(bào)道的結(jié)果存在矛盾[7-8]，所以，對(duì)其化學(xué)成分的研究有待進(jìn)一步完善。本文對(duì)巴山重樓根莖70%乙醇提取物的正丁醇萃取部位進(jìn)行了化學(xué)研究，首次從中分離鑒定了7個(gè)甾體皂苷（見圖1）。

圖1 化合物1～7的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig 1 Structures of compound 1－7

1 材料

Bruker AVANCE 800型核磁共振波譜儀（Bruker公司）；Quatrro質(zhì)譜儀（Waters公司）；戴安P680高效液相色譜儀（P680系列單泵、UVVIS檢測(cè)器、CHROMELON工作站）、YMC-ActusTriart C18半制備色譜柱（20 mm×250 mm，5 μm）、ODS C18柱（Pharmacia公司）；Grace Reveleris X2 Flash 中低壓制備色譜儀、Sephadex LH-20凝膠（GE公司）；薄層色譜用硅膠G、柱層析色譜硅膠（100～200目、200～300目，青島海洋化工廠）；電子天平（精度：0.0001 g，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；低溫冷卻循環(huán)泵（DLSB-40型，陜西愛信儀器有限公司）；隔膜真空泵（V-100 型，瑞士BUCHI公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（N-1100型）、電熱恒溫水浴鍋（OSB-2100型，上海愛朗儀器有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（DHG-924OA型，上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；色譜純甲醇、乙腈（天津科密歐公司）；氘代試劑（Merck 公司）；顯色劑（10%硫酸/乙醇）；其他試劑均為分析醇。

藥材于2018年9月采自陜西省安康市鎮(zhèn)坪縣，經(jīng)空軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系中藥與天然藥物學(xué)教研室湯海峰教授鑒定為巴山重樓（Paris bashanensisWang et Tang）的根莖，藥材標(biāo)本（編號(hào)：20189013）保存在空軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系中藥與天然藥物學(xué)教研室標(biāo)本室。

2 提取與分離

干燥的巴山重樓根莖0.8 kg，用70%乙醇浸泡過(guò)夜，回流提取5次，每次2 h，減壓回收溶劑得醇提浸膏210 g。將浸膏加適量水分散，用等體積石油醚萃取5次，再用等體積水飽和正丁醇萃取6次，回收正丁醇層得到總皂苷160 g?？傇碥战?jīng)硅膠柱色譜，用V二氯甲烷∶V甲醇∶V水（80∶1∶0～65∶35∶10）梯度洗脫，得到25個(gè)組分（Fr.1～Fr.25）。其中 Fr.18（17.6 g）經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜除去水溶性雜質(zhì)后，再經(jīng)反相硅膠柱色譜，V甲醇∶V水（80∶20～40∶60，v/v）梯度洗脫，得到Fr.18-1～Fr.18-3。Fr.18-1通過(guò)半制備高效液相色譜分離純化，80%甲醇洗脫得到化合物1（35.0 mg）和化合物2（9.6 mg）；Fr.18-2通過(guò)半制備高效液相色譜分離純化，65%甲醇洗脫得到化合物3（56.0 mg）、化合物4（7.0 mg）和化合物5（11.0 mg）。Fr.17（10.0 g）經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜除去水溶性雜質(zhì)后，經(jīng)ODS反相柱色譜，V甲醇∶V水（80∶20～40∶60）梯度洗脫得到Fr.17-1～Fr.17-2。Fr.17-1通過(guò)半制備高效液相色譜分離純化，70%乙腈洗脫得到化合物6（4.5 mg）和化合物7（5.3 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定[9-18]

化合物1：白色無(wú)定形粉末，Lieberman-Burchard和Molish鑒定反應(yīng)呈陽(yáng)性，表明該化合物可能是皂苷類化合物。電噴霧質(zhì)譜（ESI-MS）顯示其準(zhǔn)分子離子峰為m/z1101 [M＋Na]＋（陽(yáng)離子模式）和1077 [M-H]－（陰離子模式），結(jié)合化合物的13C-NMR譜（200 MHz，CD3OD）數(shù)據(jù)推斷其分子式為C52H86O23。

分析化合物的13C-NMR和DEPT譜數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)其共有52個(gè)碳信號(hào)，其中27個(gè)碳信號(hào)歸屬于苷元部分。在1H-NMR譜（800 MHz，CD3OD）高場(chǎng)區(qū)顯示5個(gè)甲基氫信號(hào)δH1.05（s）、0.85（s）、0.93（d，J＝7.0 Hz）、0.96（d，J＝6.8 Hz）和3.18（s），在HSQC譜中分別與δC19.8、17.6、9.8、17.2和47.5信號(hào)相關(guān)。NMR分析表明：化合物1的結(jié)構(gòu)中還存在1個(gè)連氧亞甲基[δH3.39（m），3.74（t，J＝9.4 Hz）；δC75.9]、1個(gè)連氧次甲基（δH3.97；δC90.7）、1個(gè)三取代雙鍵（δH5.38；δC122.6，δC141.8）、3個(gè)季碳（δC37.9、46.1和91.6）和1個(gè)半縮醛季碳（δC114.6）。通過(guò)HSQC、1H-1H COSY、HMBC、TOCSY分析，對(duì)苷元的碳?xì)湫盘?hào)進(jìn)行了歸屬，結(jié)果見表1。在HMBC譜中，H-6（δH5.38）與C-5（δC141.8）之間的遠(yuǎn)程相關(guān)信號(hào)，表明存在雙鍵Δ5（6），甲氧基氫δH3.18信號(hào)與C-22（δC114.6）信號(hào)的遠(yuǎn)程相關(guān)峰表明OCH3連接于C-22位。在NOESY譜中，H-5/H-9和H-5/H-3的NOE相關(guān)峰表明H-3是α構(gòu)型，H-18/H-20和H-21/OCH3的NOE相關(guān)峰表明21-CH3和22-OCH3為α構(gòu)型，H-14/H-16和H-16/OCH3的NOE相關(guān)峰推斷H-14為α構(gòu)型。通過(guò)H2-26化學(xué)位移值（δH3.78和3.43）的差異（ΔδH＝0.35＜0.48），可確定25R構(gòu)型[18]。綜合以上分析，確定1的苷元為22α-甲氧基-（25R）-呋甾-5-烯-3β，17α，26-三醇。

表1 化合物1～7的13C-NMR數(shù)據(jù)(200 MHz，1 in CD3OD，2～7 in C5D5N)Tab 1 13C-NMR data of compounds 1～7 (200 MHz，1 in CD3OD，2～7 in C5D5N)

取化合物11.5 mg加入2 mL三氟乙酸（2 mol·L－1），于120℃下加熱2 h，蒸干溶劑，向反應(yīng)物中加入CH2Cl2和H2O進(jìn)行萃取。蒸干水層，向殘留物中加入1 mL無(wú)水吡啶和2 mLL-半膀胱氨酸甲酯鹽酸鹽的無(wú)水吡啶溶液（0.1 mol·L－1），60℃加熱2 h，氮?dú)獯蹈?；加? mL吡啶和0.5 mLN-（三甲基硅基）咪唑，60℃加熱1 h；蒸干溶液，用正己烷和水萃取，正己烷層進(jìn)行GC分析。標(biāo)準(zhǔn)糖用同樣方法制備單糖衍生物作為對(duì)照。經(jīng)分析，確定化合物1的單糖組成為D-葡萄糖和L-鼠李糖（1∶1）。在13C-NMR譜中顯示4個(gè)糖的端基碳信號(hào)δC100.3、102.2、102.8和104.5，與1H-NMR譜中的端基氫信號(hào)δH4.51（d，J＝8.9 Hz）、5.21（d，J＝1.6 Hz）、4.87（d，J＝1.3 Hz）和4.25（d，J＝8.5 Hz）分別對(duì)應(yīng)。由GlcⅠ和GlcⅡ的端基氫耦合常數(shù)可知2個(gè)葡萄糖形成的苷鍵均為β構(gòu)型；RhaⅠ和RhaⅡ的C-5化學(xué)位移分別為δC69.7和69.5，可知2個(gè)鼠李糖形成的苷鍵均為α構(gòu)型[9-10]。通過(guò)HMBC分析發(fā)現(xiàn)H-3（δH3.70）與GlcⅠC-1（δC104.5）存在遠(yuǎn)程相關(guān)，說(shuō)明GlcⅠ連接于苷元C-3位；RhaⅠH-1（δH5.21）與GlcⅠC-2（δC79.3）的遠(yuǎn)程相關(guān)，以及RhaⅡH-1（δH4.87）與GlcⅠC-4（δC79.7）的遠(yuǎn)程相關(guān)，表明RhaⅠ和RhaⅡ分別連接于GlcⅠ的2位和4位；H-26（δH3.78）與GlcⅡC-1（δC100.3）的遠(yuǎn)程相關(guān)信號(hào)，表明GlcⅡ連接于C-26位。與文獻(xiàn)[11]報(bào)道的化合物lycianthoside A的波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)照，基本一致，從而確定化合物1為lycianthoside A。

化合物2：白色無(wú)定形粉末，Lieberman-Burchard和Molish鑒定反應(yīng)呈陽(yáng)性，初步判斷該化合物是皂苷類化合物。ESI-MS顯示其準(zhǔn)分子離子峰m/z1085[M＋Na]＋（陽(yáng)離子模式）和1061[M-H]－（陰離子模式）。結(jié)合13C-NMR（200 MHz，C5D5N）推斷其分子式為C52H86O22。在1H-NMR（800 MHz，C5D5N）高場(chǎng)區(qū)中存在5個(gè)甲基氫信號(hào)δH1.05（s）、0.85（s）、0.93（d，J＝7.04 Hz）、0.96（d，J＝6.8 Hz）和3.18（s），分別與13C-NMR中的δC16.6、19.8、16.7、17.5和47.6信號(hào)對(duì)應(yīng)。NMR分析表明，化合物2的結(jié)構(gòu)中還存在1個(gè)連氧亞甲基[δH3.39（m），3.74（m）；δC75.6]、1個(gè)連氧次甲基（δH3.97；δC81.7）、1個(gè)三取代雙鍵（δH5.38；δC141.2，δC123.2）和1個(gè)半縮醛季碳（δC113.0）。在HMBC譜中H-7（δH5.42）與C-6（δC141.2）的遠(yuǎn)程相關(guān)信號(hào)表明存在雙鍵Δ5（6）。通過(guò)2D-NMR分析歸屬了化合物2的碳?xì)湫盘?hào)，與化合物1基本一致，區(qū)別在于化合物2的C-17為不連氧的叔碳，這表明其17位無(wú)羥基取代；結(jié)合分子式進(jìn)一步確定了這一推斷。將化合物2按照化合物1相同的方法酸水解后制備成單糖衍生物，通過(guò)GC分析表明化合物2的單糖組成同樣為D-葡萄糖和L-鼠李糖（1∶1）；NMR分析表明糖基部分的碳?xì)湫盘?hào)與化合物1一致。因此，確定了化合物2的化學(xué)結(jié)構(gòu)，即已知化合物methylprotodioscin，波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[12]。

化合物3：白色無(wú)定形粉末，Lieberman-Burchard和Molish鑒定反應(yīng)呈陽(yáng)性，表明該化合物可能是皂苷類化合物。ESI-MS顯示其準(zhǔn)分子離子峰m/z907 [M＋Na]＋（陽(yáng)離子模式）和883[M-H]－（陰離子模式），結(jié)合13C-NMR（200 MHz，C5D5N）譜推斷其分子式為C45H72O17。13C-NMR和DEPT譜分析表明，該化合物45個(gè)碳信號(hào)中有27個(gè)碳信號(hào)歸屬于苷元部分。在1H-NMR（800 MHz，C5D5N）譜高場(chǎng)區(qū)中存在4個(gè)甲基氫信號(hào)δH1.09（s）、0.69（s）、1.24（d，J＝7.1 Hz）和0.96（d，J＝5.8 Hz），分別與13C-NMR中δC20.0、17.6、10.3和17.8信號(hào)對(duì)應(yīng)?；衔?的NMR譜中還存2個(gè)季碳信號(hào)（δC37.6，45.6）和1組三取代烯烴信號(hào)（δH5.30；141.2和δC122.3）。HMBC中H-6（δH5.31）與C-5（δC141.2）顯示遠(yuǎn)程相關(guān)，表明存在雙鍵Δ5（6）；CH3（δH1.24）與C-20（δC45.3）的遠(yuǎn)程相關(guān)峰則表明21-CH3連接于C-20位?；衔?的A環(huán)～D環(huán)NMR數(shù)據(jù)與化合物1基本一致，但δC67.2（C-26）和110.3（C-22）等關(guān)鍵信號(hào)表明化合物3存在F環(huán)的閉環(huán)。經(jīng)文獻(xiàn)對(duì)照，確定化合物3的苷元是常見的偏諾皂苷元[13]。

將化合物3按照化合物1相同的方法酸水解后制備成單糖衍生物，通過(guò)GC分析確定其單糖組成為D-葡萄糖和L-鼠李糖（1∶2）。13C-NMR譜顯示3個(gè)糖的端基碳信號(hào)δC100.7、102.5和103.4，與1H-NMR譜中3個(gè)端基氫信號(hào)δH4.94（d，J＝9.7 Hz）、5.96（d，J＝2.3 Hz）和5.47（d，J＝1.7 Hz）分別對(duì)應(yīng)。通過(guò)HMBC譜分析確定了糖的連接方式，H-3（δH3.86）與GlcⅠC-1（δC100.7）的遠(yuǎn)程相關(guān)信號(hào)表明GlcⅠ連接于苷元C-3位，RhaⅠH-1（δH5.96）與GlcⅠC-2（δC78.4）的遠(yuǎn)程相關(guān)，以及RhaⅡH-1（δH5.47）與GlcⅠC-4（δC79.0）的遠(yuǎn)程相關(guān)表明RhaⅠ和RhaⅡ分別連接于GlcⅠ的2位和4位。化合物3在糖基部分的NMR數(shù)據(jù)與化合物1的3位糖鏈一致。通過(guò)與文獻(xiàn)[13]中報(bào)道的化合物5的波譜數(shù)據(jù)對(duì)比，確認(rèn)化合物3的化學(xué)結(jié)構(gòu)為偏諾皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→4）-[α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）]-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物4：白色無(wú)定形粉末，Lieberman-Burchard和Molish鑒定反應(yīng)呈陽(yáng)性，表明該化合物可能是皂苷類化合物。ESI-MS顯示其準(zhǔn)分子離子峰m/z891 [M＋Na]＋（陽(yáng)離子模式）和867 [M-H]－（陰離子模式），結(jié)合13C-NMR（200 MHz，C5D5N）推斷其分子式為C45H72O16。

將化合物4按照化合物1相同的方法酸水解后制備成單糖衍生物，通過(guò)GC分析確定化合物4的單糖組成為D-葡萄糖和L-鼠李糖（1∶2）。將化合物4與化合物3的NMR數(shù)據(jù)對(duì)比，發(fā)現(xiàn)兩者在糖鏈部分的數(shù)據(jù)一致；苷元部分的信號(hào)也基本一致，如4個(gè)甲基信號(hào)[δH1.07（s），0.85（s），1.15（d，J＝6.9 Hz），0.71（d，J＝5.7 Hz）；δC16.9，20.0，16.0，17.9）、2個(gè)季碳信號(hào)（δC37.7，41.0）、1個(gè)半縮醛碳的特征信號(hào)（δC109.8）和1組三取代烯烴信號(hào)[δH5.34（br d，J＝3.0 Hz）；δC141.3，122.3]等。但是，化合物4的C-17由δC90.6向高場(chǎng)位移至73.4，以及相鄰的C-13、C-16、C-20的化學(xué)位移，表明化合物4的C-17位無(wú)羥基取代，結(jié)合分子式得到驗(yàn)證。經(jīng)與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對(duì)照[14]，基本一致，從而確定化合物4為已知化合物borassoside E。

化合物5：白色無(wú)定形粉末，Lieberman-Burchard和Molish鑒定反應(yīng)呈陽(yáng)性，表明該化合物可能是皂苷類化合物。ESI-MS顯示其準(zhǔn)分子離子峰m/z941 [M＋Na]＋（陽(yáng)離子模式）和917 [MH]－（陰離子模式），結(jié)合據(jù)13C-NMR譜推斷其分子式為C45H74O19。1H-NMR譜（800 MHz，C5D5N）顯示有5個(gè)甲基氫信號(hào)δH0.86（s）、0.80（s）、0.95（d，J＝6.2 Hz）、0.98（d，J＝5.4 Hz）和3.17（s），與13C-NMR譜（200 MHz，C5D5N）中的δC15.5、13.2、14.9、15.8和47.7信號(hào)分別對(duì)應(yīng)。在HMBC譜中，δH3.17信號(hào)與C-22（δC112.9）信號(hào)的遠(yuǎn)程相關(guān)峰表明OCH3連接于C-22位，δH0.95信號(hào)與C-20（δC40.8）信號(hào)的遠(yuǎn)程相關(guān)峰表明21-CH3連接于C-20位。上述數(shù)據(jù)與化合物1的苷元基本一致，區(qū)別在于化合物5的13C-NMR譜中無(wú)Δ5（6）信號(hào)，但多處羰基碳信號(hào)（δC213.3）。在HMBC譜中觀察到H-7（δH2.16）與該羰基碳的遠(yuǎn)程相關(guān)信號(hào)，結(jié)合C-6周圍碳的化學(xué)位移變化分析，推斷羰基位于C-6位，從而確定了化合物5的苷元結(jié)構(gòu)。

將化合物5按照化合物1相同的方法酸水解后制備成單糖衍生物，通過(guò)GC分析確定化合物5的單糖組成為D-葡萄糖和L-阿拉伯糖（2∶1）。在13C-NMR譜中存在3個(gè)糖的端基碳信號(hào)δC100.9、103.8和103.1，與1H-NMR譜的3個(gè)端基氫信號(hào)δH4.42（d，J＝8.7 Hz）、4.34（d，J＝6.1 Hz）和5.47（d，J＝7.7 Hz）相對(duì)應(yīng)。通過(guò)GlcⅠ、GlcⅡ和Ara的端基氫耦合常數(shù)，確定葡萄糖形成苷鍵的相對(duì)構(gòu)型均為β構(gòu)型，阿拉伯糖為α構(gòu)型。在HMBC譜中可見H-3（δH3.40）與GlcⅠC-1（δC100.9）的遠(yuǎn)程相關(guān)信號(hào)，表明GlcⅠ連接于苷元C-3處；Ara H-1（δH4.34）與GlcⅠC-6（δC62.3）、以及H-26（δH3.72）與GlcⅡC-1（δC103.1）的遠(yuǎn)程相關(guān)信號(hào)，則表明Ara連接于GlcⅠC-6，而GlcⅡ連接于苷元C-26位。與文獻(xiàn)報(bào)道的化合物1的波譜數(shù)據(jù)[15]比較，基本一致，從而確定化合物5的化學(xué)結(jié)構(gòu)為26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3β，26-二羥基-22-甲氧基-（25R）-5α-呋甾-6-酮-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物6：白色無(wú)定形粉末，Lieberman-Burchard和Molish鑒定反應(yīng)呈陽(yáng)性，表明該化合物可能是皂苷類化合物。ESI-MS顯示其準(zhǔn)分子離子峰m/z1277 [M＋Na]＋（陽(yáng)離子模式）和 1253[M-H]－（陰離子模式），結(jié)合13C-NMR（200 MHz，C5D5N）推斷其分子式為C58H94O29。13C-NMR和DEPT譜分析表明，該化合物58個(gè)碳信號(hào)中有28個(gè)歸屬于苷元部分。在1H-NMR（800 MHz，C5D5N）譜高場(chǎng)區(qū)中存在5個(gè)甲基氫信號(hào)δH1.38（s）、1.08（m）、0.85（s）、0.83（s）和3.15（s），分別與13C-NMR譜中的δC17.2、17.3、19.1、15.1和48.5信號(hào)對(duì)應(yīng)。化合物6的NMR譜中還存在2組三取代雙鍵信號(hào)[δC140.5和121.5，δH5.38（m）；δC157.3和98.5，δH4.42（m）]。在HMBC中H-6（δH5.21）與C-5（δC140.5）顯示遠(yuǎn)程相關(guān)，表明存在雙鍵Δ5（6）；δH0.83甲基信號(hào)與C-20（δC83.2）的遠(yuǎn)程相關(guān)峰則表明21-CH3連接于C-20位。通過(guò)2D-NMR分析歸屬了化合物6的碳?xì)湫盘?hào)，苷元A～D環(huán)的數(shù)據(jù)與化合物2基本一致，但F環(huán)和側(cè)鏈部分存在差異。在HMBC譜中，H-23（δH4.31）與C-22（δC157.3）顯示遠(yuǎn)程相關(guān)，表明存在雙鍵Δ22（23），而OCH3（δH3.15）與C-20（δC83.2）的遠(yuǎn)程相關(guān)峰則表明OCH3連接于C-20位。在NOESY譜中，H-17與H-21的NOE相關(guān)峰表明C-20處的甲氧基為β構(gòu)型。綜上所述，確定了化合物6的苷元結(jié)構(gòu)。

將化合物6按照化合物1相同的方法酸水解后制備成單糖衍生物，通過(guò)GC分析確定其單糖組成為D-葡萄糖和D-半乳糖（4∶1）。13C-NMR譜顯示5個(gè)端基碳信號(hào)δC102.7、105.2、105.3、104.8和104.4，與1H-NMR譜5個(gè)端基氫信號(hào)δH5.55（d，J＝7.9 Hz）、5.21（d，J＝9.2 Hz）、5.20（d，J＝7.8 Hz）、5.10（d，J＝8.3 Hz）和4.98（d，J＝7.5Hz）分別對(duì)應(yīng)。由GlcⅠ～GlcⅣ和Gal的端基氫耦合常數(shù)可知4個(gè)葡萄糖和半乳糖所形成的苷鍵均為β構(gòu)型。通過(guò)HMBC分析發(fā)現(xiàn)，H-3（δH3.79）與Gal C-1（δC102.7）存在遠(yuǎn)程相關(guān)，說(shuō)明Gal連接于苷元C-3位；GlcⅠH-1（δH5.21）與Gal C-4（δC80.0）存在遠(yuǎn)程相關(guān)，GlcⅡH-1（δH5.20）與GlcⅠC-2（δC79.2）存 在遠(yuǎn)程相關(guān)，GlcⅢ H-1（δH5.10）與GlcⅠC-3（δC79.8）存在遠(yuǎn)程相關(guān)，從而確定GlcⅠ連接于Gal的4位，GlcⅡ和GlcⅢ分別連接于GlcⅠ的2位和3位；H-26（δH3.68）與GlcⅣ C-1（δC104.4）的遠(yuǎn)程相關(guān)信號(hào)，則表明GlcⅣ連接于C-26位。與文獻(xiàn)報(bào)道的allimacroside E的波譜數(shù)據(jù)[16]進(jìn)行對(duì)照，基本一致，從而確定了化合物6的化學(xué)結(jié)構(gòu)為allimacroside E。

化合物7：白色無(wú)定形粉末Lieberman-Burchard和Molish鑒定反應(yīng)呈陽(yáng)性，表明該化合物可能是皂苷類化合物。ESI-MS顯示其準(zhǔn)分子離子峰m/z893 [M＋Na]＋（陽(yáng)離子模式）和869[M-H]－（陽(yáng)離子模式），結(jié)合13C-NMR（200 MHz，C5D5N）推斷其分子式為C44H70O17。13C-NMR和DEPT譜分析表明，該化合物44個(gè)碳信號(hào)中有27個(gè)碳信號(hào)屬于苷元部分。在1H-NMR（800 MHz，C5D5N）譜高場(chǎng)區(qū)中存在4個(gè)甲基氫信號(hào)δH1.02（s）、0.83（s）、1.15（d，J＝6.9 Hz） 和 0.71（d，J＝5.7 Hz），分別與13C-NMR譜中δC16.7、19.0、15.3和 17.3信號(hào)對(duì)應(yīng)?；衔?的NMR譜中還存在2個(gè)季碳的信號(hào)（δC37.5，41.1）、1個(gè)半縮醛碳特征信號(hào)δC110.3和一組三取代烯烴信號(hào)[δH5.34（br d，J＝2.8 Hz）；δC141.5，129.1]。在HMBC中，H-6（δH5.26）與C-5（δC141.5）顯示遠(yuǎn)程相關(guān)，表明存在雙鍵Δ5（6）。通過(guò)2D-NMR分析歸屬了化合物7的碳?xì)湫盘?hào)，與化合物4的苷元基本一致，區(qū)別在于化合物7的C-7為連氧叔碳，向低場(chǎng)位移，結(jié)合分子量推斷7位連接了1個(gè)羥基。通過(guò)H-7/H-8和H-7/H-15的NOE相關(guān)峰推斷7-OH為α構(gòu)型。從而確定了化合物7的苷元結(jié)構(gòu)。

將化合物7按照化合物1相同的方法水解后制備成單糖衍生物，通過(guò)GC分析確定其單糖組成為D-葡萄糖、L-阿拉伯糖和L-鼠李糖3種單糖（1∶1∶1）。13C-NMR譜中存在3個(gè)糖的端基碳信號(hào)δC100.3、102.7和109.5，與1H-NMR譜中的3個(gè)端基氫信號(hào)δH5.20（d、J＝7.8 Hz）、6.15（J＝1.7 Hz）和5.85（s）分別對(duì)應(yīng)。通過(guò)HMBC譜確定了糖的連接方式：H-3（δC5.67）與GlcⅠC-1（δC100.3）存在遠(yuǎn)程相關(guān)信號(hào)，說(shuō)明GlcⅠ連接于苷元C-3位；RhaⅠH-1（δH6.15）與GlcⅠC-2（δC78.2）的遠(yuǎn)程相關(guān)，以及Ara H-1（δH5.85）與GlcⅠC-4（δC77.8）的遠(yuǎn)程相關(guān)表明RhaⅠ與Ara分別連接于GlcⅠ的2位和4位。通過(guò)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道的化合物1的波譜數(shù)據(jù)對(duì)比，基本一致，從而確定物7的化學(xué)結(jié)構(gòu)為（25R）-螺甾-5-烯-3β，7α-二醇-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-（1→4）-[α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）]-β-D-吡喃葡萄糖苷。

4 結(jié)果與討論

巴山重樓目前屬于近危植物[19]，一方面由于其較高的藥用價(jià)值，當(dāng)?shù)孛癖妼?duì)于其需求日益增加，另一方面，藥用重樓的需求量逐年上升，從植物形態(tài)學(xué)角度判斷，重樓屬植物種之間非常容易出現(xiàn)混種、替代以及質(zhì)量不可控等問(wèn)題，而巴山重樓可能出現(xiàn)種間替代，造成其資源急劇下降。出于保護(hù)基源物種和藥用資源可持續(xù)發(fā)展的目的，對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行了研究，本文首次從中發(fā)現(xiàn)了7個(gè)皂苷類化合物。預(yù)實(shí)驗(yàn)表明，巴山重樓含有種類豐富的皂苷成分，可能還存在一些新化合物，將進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行更深入的化學(xué)研究，以為其資源合理開發(fā)應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。