王雅雯，努爾麥麥提·麥麥提敏，李仕林，姜水兵，郭良帥，王新新，焦海宏

（塔里木大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，新疆阿拉爾843300）

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒引起的急性、熱性、高接觸性動物傳染病，主要侵害牛、綿羊、山羊、豬等偶蹄動物[1]。口蹄疫對畜牧養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的威脅，曾在多個國家流行[2]?？谔阋吖灿? 種血清型，我國常見的有A 型、O型、亞洲Ⅰ型[3-4]。口蹄疫臨床上表現(xiàn)為口腔黏膜、蹄部、乳房、乳頭、鼻端、鼻孔出現(xiàn)水皰和潰瘍，食欲下降，出現(xiàn)跛行，嚴(yán)重時可出現(xiàn)蹄殼脫落[5]。

小反芻獸疫（PPR）是由小反芻獸疫病毒（PPRV）引起的一種快速急性、高熱性、高度接觸性的動物傳染病。該病的感染率高達(dá)100%，致死率高達(dá)90%[6]。PPRV 易感山羊，其次是綿羊。幼齡羊感染后臨床癥狀更明顯，死亡率較高[7-8]。小反芻獸疫發(fā)病初期，病羊鼻腔中帶有清澈的鼻液，隨著病情的加重轉(zhuǎn)變?yōu)槟撔钥ㄋ员且?、呼吸困難、患病羊口腔中呼出惡臭氣體、眼部分泌物增多、出現(xiàn)結(jié)膜炎[9]；發(fā)病后期，病羊出現(xiàn)較為嚴(yán)重的腹瀉、個別病羊排出血水、身體迅速消瘦并脫水、懷孕母羊出現(xiàn)流產(chǎn)[10]。

口蹄疫和小反芻獸疫是OIE法定報告動物疫病[11]，也是全球計劃根除的動物疫病，我國將其列為一類疫病[12]，且被列為強(qiáng)制免疫病種[13]。目前，羊場需要強(qiáng)制免疫的疫苗有口蹄疫和小反芻獸疫，因病設(shè)防的疫苗有羊三聯(lián)四防[14]、山羊支原體肺炎、羊痘、羊口瘡、布魯氏桿菌病。如果單獨(dú)接種疫苗，每種疫苗間隔7 d免疫注射，免疫工作跨度時間長，增加基層防疫工作人員的工作量和工作強(qiáng)度。為簡化免疫過程，實(shí)際工作中進(jìn)行一些不同疫苗聯(lián)合免疫的探索[15-16]。近幾年，新疆也鼓勵開展羊疫苗的聯(lián)合免疫。本試驗(yàn)對小尾寒羊進(jìn)行口蹄疫（A、O 型）和小反芻獸疫聯(lián)合免疫，檢測免疫抗體，進(jìn)一步驗(yàn)證口蹄疫滅活苗和小反芻獸疫活疫苗聯(lián)合免疫的可行性。

1 材料與方法

1.1 疫苗

口蹄疫（O型、A型二價）滅活疫苗（批號：2015017），保存于4 ℃，；小反芻獸疫活疫苗（Clone9 株，批號：2016025），保存于-20 ℃，均由新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)。

1.2 試劑

口蹄疫病毒A型抗體檢測試劑盒（批號：92031）、口蹄疫病毒O型抗體檢測試劑盒（批號：92051）、小反芻獸疫病毒抗體檢測試劑盒（批號：93021）保存于4 ℃，均由北京納百生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計

試驗(yàn)選用由烏什某規(guī)?；驁鎏峁┑奈丛谝呙绫Ｗo(hù)期內(nèi)的健康小尾寒羊共60只。其中，成年母羊、青年羊、斷奶羊各20 只。試驗(yàn)羊臨床癥狀檢查健康，無臨床疾病表現(xiàn)。按年齡分成3組，進(jìn)行口蹄疫疫苗和小反獸疫疫苗的聯(lián)合免疫試驗(yàn)?？谔阋撸∣ 型、A 型二價）滅活疫苗和小反芻獸疫活疫苗在頸部兩側(cè)同時分點(diǎn)注射，免疫劑量為0.5 mL/頭。免疫7 d內(nèi)觀察試驗(yàn)羊的精神、食欲、體溫及有無運(yùn)動障礙、有無局部或全身反應(yīng)或死亡等情況。免疫28 d后，進(jìn)行采血，分離血清，檢測抗體水平。

1.4 血清抗體水平檢測

口蹄疫A型使用口蹄疫A型抗體檢測試劑盒檢測，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行，判定標(biāo)準(zhǔn)：陰性對照的平均OD 值減去陽性對照的平均OD 值≥0.3，試驗(yàn)結(jié)果才有效。阻斷率[IN%]≥30判定陽性，阻斷率[IN%]<30判定為陰性。

口蹄疫O型使用口蹄疫O型抗體檢測試劑盒檢測，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。判定標(biāo)準(zhǔn)：陰性對照的平均OD 值減去陽性對照的平均OD 值≥0.3，試驗(yàn)結(jié)果才有效。阻斷率[IN%]≥30判定陽性，阻斷率[IN%]<30判定為陰性。

小反芻獸疫使用小反芻獸疫病毒抗體檢測試劑盒，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。判定標(biāo)準(zhǔn)：陽性對照的平均OD 值≥1.0，且陰性對照的平均OD 值小于0.3。試驗(yàn)結(jié)果有效，S/P≥0.13判定為陽性；S/P<0.13，判定為陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)羊臨床表現(xiàn)

聯(lián)合免疫后，3組試驗(yàn)羊均未出現(xiàn)精神萎靡、采食量下降體溫升高等臨床癥狀。觀察7 d，試驗(yàn)羊采食正常、精神狀態(tài)正常，未出現(xiàn)死亡情況。

2.2 免疫羊抗體水平檢測結(jié)果（見表1~表3）

由表1、表2 可知，免疫母羊、青年羊和斷奶羔羊采集血清各20份，在聯(lián)合免疫28 d內(nèi)未發(fā)現(xiàn)任何局部或全身不良反應(yīng)，且口蹄疫A型抗體陽性率結(jié)果均為95%，口蹄疫O型抗體陽性率結(jié)果為85~95%。檢測結(jié)果均達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。

表1 口蹄疫A型抗體檢測結(jié)果Tabl.1 Test results of foot-and-mouth disease type A antibody

表2 口蹄疫O型抗體檢測結(jié)果Tab,2 Test results of foot-and-mouth disease type O antibody

由表3 可知，成年母羊、青年羊和斷奶羊采集血清各20 份，在聯(lián)合免疫28 d 內(nèi)未發(fā)現(xiàn)明顯的臨床癥狀，小反芻獸疫的陽性率結(jié)果為75%~80%。檢測結(jié)果均達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部的標(biāo)準(zhǔn)。

表3 小反芻獸疫抗體檢測結(jié)果Tab.3 Test results of Peste des petits ruminants antibody

3 討論

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，口蹄疫A 型3 個年齡段試驗(yàn)羊抗體檢測結(jié)果分別為95%、95%、90%；口蹄疫O 型3 個年齡段試驗(yàn)羊抗體檢測結(jié)果分別為85%、95%、85%；小反芻獸疫3 個年齡段抗體檢測結(jié)果分別為80%、80%、75%。試驗(yàn)羊免疫抗體均達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)（70%）。其中，斷奶羊的小反芻合格率為75%。斷奶羊的平均年齡段在3~4個月之間，體內(nèi)存有部分母源抗體，母源抗體對疫苗免疫效果有干擾作用[17]。同場抽檢單獨(dú)注射口蹄疫和小反芻獸疫疫苗的抗體合格率分別為80%、85%。同場抽檢結(jié)果達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的最低標(biāo)準(zhǔn)。

許偉等[18]進(jìn)行口蹄疫、小反芻獸疫、山羊支原體肺炎、羊痘4種疫苗2種或3種進(jìn)行不同組同時分點(diǎn)注射進(jìn)行免疫效果檢測，口蹄疫和小反芻獸疫分點(diǎn)注射，未出現(xiàn)試驗(yàn)羊死亡和過敏現(xiàn)象，口蹄疫A 型免疫抗體檢測結(jié)果為80%，口蹄疫O型免疫抗體檢測結(jié)果為96.7%，小反芻獸疫免疫抗體檢測結(jié)果為100%。馮春紅等[19]進(jìn)行山羊口蹄疫O 型和小反芻獸疫2 種疫苗分點(diǎn)注射的免疫效果，結(jié)果顯示，口蹄疫O 型免疫抗體合格率為85%，小反芻獸疫免疫合格率為90%。兩組試驗(yàn)數(shù)據(jù)均達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，與本試驗(yàn)結(jié)果相近。上述結(jié)果說明，口蹄疫疫苗和小反芻獸疫疫苗可以同時分點(diǎn)對羊只進(jìn)行免疫，且具有良好的促進(jìn)作用和較好的安全性，分點(diǎn)注射2種不同疫苗對動物進(jìn)行免疫接種的方法可以應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐[20]。

4 結(jié)論

兩種疫苗聯(lián)合免疫，抗體的合格率均達(dá)到2020年國家動物疫病強(qiáng)制免疫計劃規(guī)定的70%以上，能夠明顯提高口蹄疫疫苗的免疫效果且無毒副反應(yīng)，說明口蹄疫滅活苗和小反芻獸疫活疫苗這兩種疫苗可以同時分點(diǎn)對羊進(jìn)行免疫。