文/陳海生

本文介紹了雜交種“云龍石斑魚(yú)”工廠化育苗技術(shù)，包括生物餌料培育、投喂管理、水質(zhì)管理和仔、稚、幼魚(yú)階段發(fā)育形態(tài)觀察等。在水溫24.2℃～25.7℃、鹽度30.7～31.5、pH值7.4～8.2、溶氧量＞5.8mg/L條件下，本試驗(yàn)投放1kg受精卵，經(jīng)過(guò)60d培養(yǎng)，得到全長(zhǎng)（4.3±0.7）cm、體重（1.3±0.4）g的幼魚(yú)約6.24×104尾。

云龍石斑魚(yú)是由云紋石斑魚(yú)（Epinehelus moara）（♀）與鞍帶石斑魚(yú)（Epinehelus lanceolatus）（♂）雜交而成的新品種。云龍石斑魚(yú)不僅遺傳了母本云紋石斑魚(yú)耐低溫、肉質(zhì)鮮美的特點(diǎn)，還具有父本鞍帶石斑魚(yú)生長(zhǎng)速度快、抗病能力強(qiáng)的優(yōu)良性狀，是深受養(yǎng)殖戶(hù)追捧、市場(chǎng)認(rèn)可的優(yōu)質(zhì)雜交新品種。

目前，云龍石斑魚(yú)規(guī)?；B(yǎng)殖推廣主要集中在海南、福建、廣東、山東等地，其工廠化育苗技術(shù)尚未成熟、出苗量少，究其原因主要有以下幾個(gè)方面：①雜交缺陷問(wèn)題。種間存在生殖隔離、雜交遺傳缺陷、自然條件下親本性成熟不同步、配子不成熟等因素，導(dǎo)致受精率低、孵化率低、畸形率高。②營(yíng)養(yǎng)問(wèn)題。在內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)為外源性營(yíng)養(yǎng)的仔魚(yú)開(kāi)口期沒(méi)有適宜餌料，輪蟲(chóng)、大鹵蟲(chóng)生物餌料DHA、EPA含量低，直接投喂不能保障魚(yú)苗生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)需求。③病害問(wèn)題。除了常見(jiàn)的致病菌和寄生蟲(chóng)外，此品種易感染高致死率的神經(jīng)壞死癥病毒、虹彩病毒。病害來(lái)源除了水源、生物餌料的水平傳播外，還容易由受精卵攜帶，親本垂直傳播。此外，稚、幼魚(yú)期的互相殘殺也是導(dǎo)致育苗成活率低的重要原因之一。目前，關(guān)于云龍石斑魚(yú)工廠化育苗技術(shù)的研究還鮮有報(bào)道，本試驗(yàn)在斜帶石斑魚(yú)、珍珠龍膽石斑魚(yú)等品種工廠化育苗積累經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步優(yōu)化育苗技術(shù)和工藝，經(jīng)多批次試驗(yàn)摸索，初步掌握了云龍石斑魚(yú)工廠化育苗過(guò)程中幾大關(guān)鍵控制點(diǎn)，對(duì)相關(guān)人員開(kāi)展實(shí)踐生產(chǎn)具有一定指導(dǎo)意義。

一、材料與方法

（一）育苗設(shè)施及材料

1.環(huán)境概況

育苗試驗(yàn)在漳州市東山縣進(jìn)行，育苗用水經(jīng)砂濾處理。

2.育苗設(shè)施

育苗水泥池為長(zhǎng)方形，規(guī)格為6m×3m×1.2m；全池布10只氣石及調(diào)氣閥；育苗池頂搭透光薄膜材料，設(shè)有遮光網(wǎng)，可調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度。

3.受精卵來(lái)源

受精卵取自當(dāng)?shù)匾凰a(chǎn)養(yǎng)殖有限公司。

4.其他材料

EM菌、芽孢桿菌、聚維酮碘、裂壺藻、啤酒酵母、高級(jí)蝦片、開(kāi)口飼料。

（二）生物餌料培育及管理

1.牡蠣受精卵制備

挑選性腺飽滿(mǎn)的牡蠣個(gè)體，洗凈，擠出雌體卵液，再擠入少量雄體精液充分混勻，經(jīng)250目網(wǎng)絹過(guò)濾除雜后加入用5μL/L的10%聚維酮碘，并沉淀約40min，倒去上層液，收集底層受精卵，稀釋后均勻潑灑投喂。

2.小球藻培育

露天連續(xù)充氣培養(yǎng)，選擇生長(zhǎng)旺盛的藻類(lèi)作為藻種進(jìn)一步擴(kuò)培。補(bǔ)充的海水需經(jīng)棉袋過(guò)濾，加入海水后，用0.5g/t漂白粉全池消毒，再用復(fù)合肥追肥（30g/t新補(bǔ)海水），補(bǔ)充少量檸檬酸鐵。消毒、追肥1d后方可使用。

3.輪蟲(chóng)培育

在新池?cái)U(kuò)培前，準(zhǔn)備20cm高的海水（需經(jīng)棉袋過(guò)濾），抽入等量小球藻水，輪蟲(chóng)接種量50ind/mL以上，每天投喂的藻水量不宜過(guò)多，以隔天呈淡藻色為宜。若投喂的藻水濃度偏低，可以適量添加EM菌和啤酒酵母。輪蟲(chóng)投喂魚(yú)苗前用小球藻水加裂壺藻強(qiáng)化12h以上，再用5μL/L的10%聚維酮碘消毒30min，洗凈后投喂。

4.豐年蟲(chóng)幼體孵化

根據(jù)說(shuō)明書(shū)調(diào)節(jié)孵化水質(zhì)，常溫曝氣孵化，孵化20h～24h后可開(kāi)始分批收集。收集前停氣遮光20min，用80目和150目網(wǎng)兜互套收集幼體，清洗，去除殼等雜質(zhì)。

5.橈足類(lèi)管理

后期用量較大時(shí)購(gòu)入2次，上午、下午各1次，分多批投喂。在暫養(yǎng)桶內(nèi)放入冰袋降溫，保持水溫26℃以下，投喂前用5μL/L的10%聚維酮碘消毒40min，洗凈后投喂。

6.大鹵蟲(chóng)管理

放暫養(yǎng)池中，用3μL/L的10%聚維酮碘消毒，長(zhǎng)期浸泡，分批捕撈，洗凈后投喂。

（三）育苗管理

1.育苗水體預(yù)處理

水位加至70cm，放卵前一天每池潑灑5μL/L EM菌液、芽孢桿菌與少量蝦片混合發(fā)酵液。

2.受精卵預(yù)處理

受精卵置于桶內(nèi)沉淀，虹吸法吸除死卵，微氣，加入5μL/L的10%聚維酮碘消毒20min后投入育苗池，每口池約投放100g受精卵。

3.餌料投喂管理

仔魚(yú)在第四天開(kāi)口攝食，投喂牡蠣受精卵，每天投喂2次，上午、下午各喂1次，連續(xù)投喂6d。輪蟲(chóng)連續(xù)投喂16d，每天投喂2次～3次，傍晚少量補(bǔ)充，餌料過(guò)渡期間酌情減量。豐年蟲(chóng)幼體連續(xù)投喂7d，每天投喂2次。橈足類(lèi)2h～3h投喂1次，傍晚前停止投喂。至42日齡，可過(guò)渡投喂少量大鹵蟲(chóng)。至45日齡，可在池角落處定點(diǎn)馴食，用大鹵蟲(chóng)與少量浮性開(kāi)口配合飼料混合并添加少許鰻魚(yú)粉增強(qiáng)粘性，魚(yú)苗集群攝食后可直接投喂浮性開(kāi)口配合飼料，馴食期間也需每天全池投喂一定量的橈足類(lèi)、大鹵蟲(chóng)。各種餌料投喂根據(jù)魚(yú)苗口徑大小、生長(zhǎng)差異適時(shí)過(guò)渡，投喂量視密度和攝食情況酌情增減，投喂餌料種類(lèi)及時(shí)間如圖1。

圖1 投喂餌料種類(lèi)及時(shí)間

4.水質(zhì)管理

仔魚(yú)開(kāi)口前約半天向育苗池添加適量小球藻，后期視水色酌情添加，投喂橈足類(lèi)前結(jié)束，期間水體保持呈微綠即可。每隔3d潑灑5μL/L EM菌液，根據(jù)情況補(bǔ)充芽孢桿菌與少量蝦片的混合發(fā)酵液。育苗第二周可開(kāi)始每天向池中補(bǔ)充3cm～5cm海水，后續(xù)酌情逐漸增加。水位加至100cm開(kāi)始排水，后續(xù)酌情逐漸增加換水量。視池底情況，一般在橈足類(lèi)投喂期開(kāi)始吸污。

（四）育苗水體理化條件和弧菌數(shù)測(cè)定

水體理化條件測(cè)定從受精卵投放當(dāng)天開(kāi)始，每?jī)商鞙y(cè)定1次，至幼魚(yú)期結(jié)束。測(cè)定時(shí)間15:00，測(cè)定的水體理化條件包括水溫、鹽度、溶解氧、pH值、氨氮、亞硝酸氮。

二、結(jié)果與分析

（一）育苗水體理化條件的變化

1.溫度和鹽度的變化

由圖2可以看出，育苗水體溫度和鹽度分別保持在24.2℃～25.7℃、30.7～31.5。由于育苗期間無(wú)氣溫驟變、雨水量較少，育苗期間不斷補(bǔ)充海水，因此氣溫、鹽度總體相對(duì)穩(wěn)定。

圖2 育苗水體中溫度和鹽度的變化

2.溶氧量和pH值的變化

由圖3可以看出，育苗水體溶氧量保持在5.8mg/L以上，主要通過(guò)氣管上裝調(diào)氣閥調(diào)節(jié)通氣量。育苗水體pH值控制在7.4～8.2，育苗前期由于換水量少、微生物制劑代謝、小球藻光合作用等原因使水體pH值稍有波動(dòng)，后期通過(guò)吸污及加大換水量，水體pH值趨于穩(wěn)定。

圖3 育苗水體中溶氧量和pH值的變化

（二）仔稚幼魚(yú)形態(tài)觀察

1.前期仔魚(yú)期

前期仔魚(yú)期指從孵化出膜至卵黃囊、油球即將完全消失階段。本試驗(yàn)初孵仔魚(yú)通體透明，卵黃囊和油球逐漸消耗縮小消失（圖4-1、圖4-2）。3日齡仔魚(yú)（圖4-3）眼球、消化管上方、尾椎骨下方出現(xiàn)黑色素沉積；仔魚(yú)口裂明顯，消化管彎曲、褶皺明顯，可區(qū)分出直腸，肛門(mén)開(kāi)口通向體外，仔魚(yú)游泳能力較之前明顯增強(qiáng)。

2.后期仔魚(yú)期

后期仔魚(yú)期指從卵囊完全消失至第二背鰭棘和腹鰭棘達(dá)到仔稚魚(yú)最大值的階段。4日齡仔魚(yú)（圖4-4）消化系統(tǒng)發(fā)育得更加完善，消化道黑色素加深明顯，可觀察到仔魚(yú)頭部有兩個(gè)黑點(diǎn)，腹部、尾部各一個(gè)黑點(diǎn)，仔魚(yú)頭朝下浮于水中，開(kāi)始攝食。8日齡仔魚(yú)（圖4-5）背鰭棘和腹鰭棘原基發(fā)育形成，游泳和攝食能力增強(qiáng)，仔魚(yú)具有集群和趨光行為。11日齡仔魚(yú)（圖4-6）第二背鰭棘和1對(duì)腹鰭棘已明顯形成，呈“小三叉”狀。12日齡仔魚(yú)至20日齡仔魚(yú)（圖4-7）第二背鰭棘增長(zhǎng)速度超過(guò)腹鰭棘，且第二背鰭棘長(zhǎng)度逐漸超過(guò)腹鰭棘長(zhǎng)度，背鰭棘和腹鰭棘末端黑色素增多，魚(yú)體頭部、尾柄部等部位色斑增多并逐漸集中，形態(tài)呈“大三叉”狀，個(gè)體大小差異逐漸明顯。21日齡仔魚(yú)至27日齡仔魚(yú)（圖4-8）口裂顯著增大，背鰭棘和腹鰭棘繼續(xù)增長(zhǎng)，第二背鰭棘和腹鰭棘達(dá)到仔稚魚(yú)階段的最大值。

圖4 云紋石斑魚(yú)（♀）×鞍帶石斑魚(yú)（♂）雜交F1仔、稚、幼魚(yú)發(fā)育形態(tài)

3.稚魚(yú)期

稚魚(yú)期指從第二背鰭棘和腹鰭棘開(kāi)始收縮至鱗片開(kāi)始出現(xiàn)階段。37日齡稚魚(yú)（圖4-9）第二背鰭棘和腹鰭棘長(zhǎng)度開(kāi)始逐漸縮小，稚魚(yú)逐漸趨向池子中下層分布，魚(yú)群環(huán)游現(xiàn)象明顯。46日齡稚魚(yú)（圖4-10）第二背鰭棘和腹鰭棘收縮明顯，體表、眼睛、后緣、尾椎骨出現(xiàn)明顯黑色素，在背鰭基部的兩側(cè)以及身體的背面開(kāi)始出現(xiàn)鱗片，魚(yú)體表?xiàng)l紋逐漸形成，個(gè)體大小差異明顯，存在相互殘食現(xiàn)象。

4.幼魚(yú)期

幼魚(yú)期指魚(yú)苗全身覆蓋鱗片、各鰭棘形態(tài)與成魚(yú)相似。48日齡仔魚(yú)至52日齡仔魚(yú)（圖4-11）第二背鰭棘和腹鰭棘長(zhǎng)度已收縮到稚幼魚(yú)階段的最小值，幼魚(yú)各鰭的形態(tài)與成魚(yú)相似，鱗片已完全長(zhǎng)齊，仔魚(yú)體表?xiàng)l紋清晰可見(jiàn)，個(gè)體大小差異極為明顯，相互殘食現(xiàn)象極為明顯。

三、討論

（一）水環(huán)境對(duì)石斑魚(yú)育苗的影響

育苗水質(zhì)環(huán)境對(duì)石斑魚(yú)育苗成活率起決定性因素。張夢(mèng)淇等研究不同鹽度對(duì)云紋石斑魚(yú)（♀）×鞍帶石斑魚(yú)（♂）受精卵孵化的影響，結(jié)果表明，該受精卵孵化的最適鹽度范圍是35～37，初孵仔魚(yú)最適生存鹽度為20～30。鹽度為30時(shí)，受精卵孵化率為（21.7±2.1）%、初孵仔魚(yú)畸形率為（60.3±6.2）%；鹽度為35時(shí)，受精卵孵化率為（31.3±3.0）%、初孵仔魚(yú)畸形率為（40.0±7.4）%。王云新等認(rèn)為斜帶石斑魚(yú)最佳培養(yǎng)水溫在25℃～27℃之間，水溫低于22℃時(shí)，仔魚(yú)生產(chǎn)發(fā)育遲緩，變態(tài)時(shí)間長(zhǎng)，成活率低；水溫高于29℃時(shí)，仔魚(yú)生產(chǎn)發(fā)育快，但容易發(fā)生病害。張廷廷等研究在18℃～28℃下不同溫度對(duì)云紋石斑魚(yú)胚胎發(fā)育和仔魚(yú)活力的影響，結(jié)果表明，孵化時(shí)間y與溫度x呈y=12139x-1.869關(guān)系，R2=0.993（P＜0.01），在22℃時(shí)受精卵孵化率最高，為71.01%，該溫度下對(duì)應(yīng)最低畸形率9.70%。

陳國(guó)華等研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)水體中氨氮的質(zhì)量濃度達(dá)到1.2mg/L～1.5mg/L時(shí)，大小為1cm～2cm的點(diǎn)帶石斑魚(yú)仔魚(yú)出現(xiàn)不正常反應(yīng)。鄭樂(lè)云研究表明，在同等條件下，非離子氨對(duì)斜帶石斑魚(yú)苗種的毒性作用高于亞硝酸鹽的毒性，非離子氨、亞硝酸鹽氮對(duì)全長(zhǎng)4.4cm斜帶石斑魚(yú)苗的安全質(zhì)量濃度分別為0.011mg/L、26.7mg/L。本育苗試驗(yàn)期間，氨氮、亞硝酸氮檢測(cè)采用水質(zhì)快速測(cè)試檢測(cè)盒，水質(zhì)氨氮檢測(cè)長(zhǎng)期不超過(guò)0.3mg/L、亞硝酸氮長(zhǎng)期不超過(guò)0.4mg/L，本試驗(yàn)期間未見(jiàn)魚(yú)苗出現(xiàn)急性中毒現(xiàn)象。

本試驗(yàn)育苗前期通過(guò)添加小球藻、高級(jí)蝦片、微生物制劑的方式建立起微生態(tài)系統(tǒng)和碎屑食物鏈，對(duì)于保持水環(huán)境穩(wěn)定性起一定的調(diào)節(jié)作用。微生物制劑參加水體最基礎(chǔ)的物質(zhì)循環(huán)，通過(guò)氧化、氨化、硝化、硫化、固氮、分泌胞外酶等多種方式把排泄廢物、殘?bào)w等有機(jī)物降解為氨、硝酸鹽、磷酸鹽和二氧化碳等物質(zhì)，直接為水體中的小球藻提供營(yíng)養(yǎng)，小球藻為輪蟲(chóng)、橈足類(lèi)提供餌料，有助于延長(zhǎng)生物餌料的存活時(shí)間。同時(shí)，小球藻的光合作用又為有機(jī)物的氧化分解、微生物及魚(yú)苗的呼吸提供溶解氧，從而構(gòu)成一個(gè)良性生態(tài)循環(huán)，調(diào)節(jié)菌相、藻相動(dòng)態(tài)平衡，為魚(yú)苗生長(zhǎng)創(chuàng)造良好水環(huán)境。

（二）病害防控

苗種生產(chǎn)過(guò)程中，病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)等病害暴發(fā)已成為石斑魚(yú)苗種繁育的“瓶頸”。尤其是病毒性神經(jīng)壞死病（Viral nervous necrosis，VNN），癥狀主要表現(xiàn)為魚(yú)苗基本不攝食，游動(dòng)異常，在水面上呈漂浮狀，橫著打轉(zhuǎn)，魚(yú)苗死亡率可高達(dá)90%。該病毒可經(jīng)養(yǎng)殖水體水平傳播，也可通過(guò)受精卵垂直傳播，來(lái)自受感染親魚(yú)的垂直傳播是魚(yú)苗感染的主要途徑。

林克冰等用5ppm 10%的聚維酮碘+3ppm鹽酸嗎啉胍浸泡消毒輪蟲(chóng)、橈足類(lèi)30min，可有效滅活所攜帶的神經(jīng)壞死病毒活力。本試驗(yàn)在投喂前對(duì)生物餌料消毒，一定程度上有效減少了病原。同時(shí)，通過(guò)投喂鮮活生物餌料和加強(qiáng)水質(zhì)管理，防止由水體敗壞，氨氮、亞硝酸鹽過(guò)高引起的弧菌等致病菌總數(shù)過(guò)高；通過(guò)定期補(bǔ)充微生物制劑，使益生菌形成優(yōu)勢(shì)菌群；通過(guò)餌料營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化，保證苗種生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)需求，提高其抗病和抗應(yīng)激能力，從而加強(qiáng)病害防控。

（三）幾種石斑魚(yú)育苗期間生物學(xué)觀察及管理技術(shù)比較

水溫是影響受精卵胚胎發(fā)育和仔魚(yú)開(kāi)口快慢的主要水環(huán)境因子。據(jù)研究表明，云龍石斑魚(yú)在水溫（22±1）℃條件下，雜交受精卵經(jīng)過(guò)35h23min完成整個(gè)胚胎發(fā)育，仔魚(yú)孵化后移至（24±1）℃條件的育苗池，第四天開(kāi)口攝食。珍珠龍膽石斑魚(yú)雜交受精卵在水溫27℃～28℃條件下，受精卵經(jīng)過(guò)25h25min完成整個(gè)胚胎發(fā)育，第三天仔魚(yú)開(kāi)口攝食。斜帶石斑魚(yú)受精卵在水溫（25±0.5）℃條件下，則為28h30min，第三天少部分仔魚(yú)開(kāi)口攝食。

仔魚(yú)開(kāi)口方面比較，實(shí)踐觀察，正常情況下多種石斑魚(yú)受精卵在水溫約24℃條件下仔魚(yú)第四天開(kāi)口，在水溫約26℃條件下第三天開(kāi)口。生產(chǎn)過(guò)程中要頻繁觀察卵黃囊、油球變化情況，擬定開(kāi)口餌料投喂時(shí)間，有計(jì)劃購(gòu)買(mǎi)牡蠣確保新鮮，尤其要注意某些批次的仔魚(yú)在傍晚過(guò)后開(kāi)口，次日要盡早投喂。

孵化效果方面比較，筆者通過(guò)實(shí)踐觀察及走訪了解，目前云龍石斑魚(yú)雜交受精卵孵化率（20%～80%）明顯低于珍珠龍膽石斑魚(yú)雜交受精卵孵化率（50%～90%）和斜帶石斑魚(yú)受精卵孵化率（50%～90%）。卵子、精子質(zhì)量決定魚(yú)卵受精卵率、胚胎畸形率和孵化率。云龍石斑魚(yú)主要采用擠卵擠精人工授精方式，福建地區(qū)的云紋石斑魚(yú)適齡雌性親魚(yú)存欄量少、產(chǎn)卵期短，利益驅(qū)使下易造成使用的魚(yú)卵成熟度不夠。常溫下鞍帶石斑魚(yú)雄性親魚(yú)性成熟與云紋石斑魚(yú)雌性親魚(yú)性成熟不同步，雄性親本需提前數(shù)月人為加溫調(diào)控其性成熟度，否則雜交用精子也會(huì)普遍不成熟。

餌料投喂管理方面比較，剛開(kāi)口的斜帶石斑魚(yú)仔魚(yú)口裂寬大于珍珠龍膽石斑魚(yú)和云龍石斑魚(yú)，斜帶石斑魚(yú)育苗牡蠣擔(dān)輪幼蟲(chóng)投喂天數(shù)一般為3d～4d，珍珠龍膽石斑魚(yú)、云龍石斑魚(yú)育苗過(guò)程中需延長(zhǎng)至5d～8d。投喂輪蟲(chóng)期階段，珍珠龍膽石斑魚(yú)和云龍石斑魚(yú)的仔魚(yú)攝食量明顯低于斜帶石斑魚(yú)仔魚(yú)，投喂輪蟲(chóng)天數(shù)接近。投豐年蟲(chóng)期、橈足類(lèi)階段，珍珠龍膽石斑魚(yú)和云龍石斑魚(yú)仔魚(yú)、稚魚(yú)生長(zhǎng)速度略快于斜帶石斑魚(yú)。至稚魚(yú)后期，魚(yú)苗相互殘食現(xiàn)象逐漸明顯，尤其是珍珠龍膽石斑魚(yú)苗殘食現(xiàn)象最為明顯，須注意提前早晨一餐、延長(zhǎng)傍晚一餐投喂時(shí)間，待80%的稚魚(yú)體表出現(xiàn)條紋，開(kāi)始分篩減低魚(yú)苗密度和減少大小差異，增加投喂次數(shù)，盡可能減少殘食損失率。各種餌料投喂根據(jù)魚(yú)苗口徑大小、生長(zhǎng)差異適時(shí)過(guò)渡，投喂量視養(yǎng)殖密度和攝食情況酌情增減。