顧國(guó)慶 張小軍 顧劍

揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)江蘇海慈生物藥業(yè)有限公司 江蘇 泰州 225300

引言

鹽酸米諾環(huán)素是四環(huán)素類(lèi)抗菌藥物，抗菌作用較強(qiáng)，對(duì)產(chǎn)氣桿菌、流感嗜血桿菌、克雷白桿菌等敏感菌引起的感染，抗菌作用較好。為保證鹽酸米諾環(huán)素臨床用藥安全性，應(yīng)嚴(yán)格控制鹽酸米諾環(huán)素中雜質(zhì)殘留，提升藥品質(zhì)量控制水平[1]。結(jié)合鹽酸米諾環(huán)素原料藥的起始物料和生產(chǎn)工藝研究顯示，其可能存在甲醛殘留，其檢測(cè)方法以高效液相色譜法為主，為明確其檢測(cè)效果，本次研究選擇2020年1月～2021年1月期間選擇三批次鹽酸米諾環(huán)素原料藥，各120粒（6000mg），對(duì)HPLC法測(cè)定甲醛殘留量的效果進(jìn)行分析，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 儀器與試劑

1.1 樣品與儀器

2020年1月～2021年1月期間選擇三批次（產(chǎn)品批號(hào)200228、201028、200917）鹽酸米諾環(huán)素原料藥（規(guī)格50mg*10s，揚(yáng)子江藥業(yè)江蘇海慈生物藥業(yè)有限公司），各120粒（6000mg）；儀器Agilent 1100型HPLC儀；調(diào)速攪拌器（D-971型鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（重慶銀河試驗(yàn)儀器有限公司）；分析天平（上海天平儀器廠）。

1.2 試劑

2，4二硝基苯肼均為分析純；甲醛溶液（分析純≥99.7%）、磷酸（分析純≥99.7%）和無(wú)水乙醇（分析純≥99.7%）均為國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑。

1.3 方法

（1）色譜條件

ZORBAX Extend-C18(4. 6mm×250mm， 5μm)，流動(dòng)相：以磷酸溶液-乙腈(50：50)，取磷酸和乙腈，各5.75g，加水至1000mL，pH值調(diào)整至2. 85)，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為336nm；供試品約2.0g，置25mL量瓶中，加1mL對(duì)照溶液和19ml無(wú)水乙醇，充分混勻，離心分離；取5ml上清液，10ml量瓶中，精密加入3mL磷酸水溶液、1ml2，4二硝基苯肼無(wú)水乙醇溶液，無(wú)水乙醇稀釋至25ml，靜置后作為分離度溶液?？瞻兹芤海壕芰咳?mL無(wú)水乙醇，與1ml純凈水混合。按上述色譜條件測(cè)定，參照《中國(guó)藥典》收載的相關(guān)檢測(cè)方法，以甲醛濃度(c)對(duì)峰面積(A)進(jìn)行線性回歸，峰面積與濃度線性關(guān)系良好[2]。測(cè)定按上述色譜條件，測(cè)定3批樣品，以外標(biāo)法計(jì)算甲醛含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20. 0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析所有數(shù)據(jù)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示計(jì)量資料，采用t檢驗(yàn)；以（%，n）表示計(jì)數(shù)資料，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 認(rèn)為差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三批次鹽酸米諾環(huán)素原料藥干擾峰與甲醛峰分離度比較

分離度溶液所得圖譜中，溶劑干擾峰與甲醛峰的分離度應(yīng)＞3.5，HPLC法檢測(cè)三批次鹽酸米諾環(huán)素原料藥干擾峰與甲醛峰分離度均超過(guò)3.5，三批次比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。HPLC法甲醛峰與溶劑干擾峰典型色譜圖（見(jiàn)圖1）和空白圖譜（見(jiàn)圖2）。

表1 三批次鹽酸米諾環(huán)素原料藥干擾峰與甲醛峰分離度比較

圖1 分離度溶液甲醛峰與溶劑干擾峰典型色譜圖

圖2 甲醛峰與溶劑干擾峰空白圖譜

2.2 三批次鹽酸米諾環(huán)素原料藥甲醛含量比較

按上述色譜條件，測(cè)定3批鹽酸米諾環(huán)素原料藥甲醛含量，分別為（0.0015±0.0002）%、（0.0016±0.0003）%、（0.0015±0.0001）%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 三批次鹽酸米諾環(huán)素原料藥干擾峰與甲醛峰分離度比較

3 討論

鹽酸米諾環(huán)素現(xiàn)有的生產(chǎn)方法，主要以山環(huán)素為原料，經(jīng)過(guò)氯代和偶氮化反應(yīng)、鈀碳還原和甲醛反應(yīng)等過(guò)程得到米諾環(huán)素?，F(xiàn)有合成方法異構(gòu)體含量高、純度低等缺陷，影響鹽酸米諾環(huán)素原料藥的潛在雜質(zhì)研究顯示，其可能存在甲醛殘留，為保證其藥品質(zhì)量，應(yīng)積極控制其甲醛的殘留量[3]。

鹽酸米諾環(huán)素的相關(guān)雜質(zhì)檢測(cè)已收載于《中國(guó)藥典》中，應(yīng)嚴(yán)格控制甲醛等雜質(zhì)殘留量，進(jìn)而有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。為增加提升產(chǎn)品競(jìng)爭(zhēng)力，加強(qiáng)產(chǎn)品的質(zhì)量控制，應(yīng)完善鹽酸米諾環(huán)素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)格把控藥品質(zhì)量[4]。但是，鹽酸米諾環(huán)素中甲醛殘留量的研究較多，尤其應(yīng)完善甲醛殘留量的檢測(cè)方法，從而有效控制藥品中實(shí)際含量。大量文獻(xiàn)研究顯示，原料藥中毒性雜質(zhì)，主要采用HPLC檢測(cè)，值得借鑒，可為鹽酸米諾環(huán)素中甲醛殘留量檢測(cè)提供研究依據(jù)。HPLC法為常用的藥物分析方法，近年來(lái)其技術(shù)水平不斷提升，檢測(cè)準(zhǔn)確性得到了有效提升，且具有分離度高、準(zhǔn)確性高、穩(wěn)定性好、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)[5]。HPLC法在鹽酸米諾環(huán)素雜質(zhì)測(cè)定中應(yīng)用較多，對(duì)于甲醛殘留量測(cè)定效果良好，可完全分離甲醛峰與干擾峰，準(zhǔn)確度高[6]。本次研究也發(fā)現(xiàn)，HPLC法檢測(cè)分離度溶液所得圖譜中，三批次鹽酸米諾環(huán)素原料藥干擾峰與甲醛峰分離度均超過(guò)3.5，三批次（6.53±0.62、6.62±0.67、6.79±0.49）比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），可知HPLC法對(duì)甲醛的分離度較高，且各批次分離度均較好。此外，本次研究還發(fā)現(xiàn)，測(cè)定3批鹽酸米諾環(huán)素原料藥甲醛含量，分別為（0.0015±0.0002）%、（0.0016±0.0003）%、（0.0015±0.0001）%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），可知HPLC法可有效檢出鹽酸米諾環(huán)素原料藥甲醛殘留量，且分離度高、準(zhǔn)確性好，檢測(cè)結(jié)果各批次甲醛殘留量相差較小，穩(wěn)定性較高，HPLC法值得推廣借鑒。

綜上所述，HPLC法測(cè)定鹽酸米諾環(huán)素中甲醛殘留量的分離度好、穩(wěn)定性好，檢測(cè)效果良好，應(yīng)用價(jià)值較高。