唐燕萍，趙玉霞，宋煒熙

(湖南中醫(yī)藥大學中西醫(yī)結(jié)合學院，湖南 長沙 410208)

抑郁癥是由多種復雜原因引起的以心境低落、興趣喪失、認知和睡眠障礙為主要癥狀的一種情感性障礙，是目前最常見的精神疾患之一[1]。預計到2030年, 抑郁癥將成為全球疾病負擔之首[2]。抑郁癥患者常有胃腸功能障礙癥狀，胃腸功能紊亂又會引起抑郁癥的進一步發(fā)生、發(fā)展。胃腸疾病的發(fā)生與胃腸激素變化有密切關(guān)系，胃動素(MOT)和胃泌素(GAS)等胃腸激素分泌紊亂會導致胃腸黏膜水電解質(zhì)分泌紊亂，加速胃腸運動，進而引起腹瀉[3]。逍遙丸主要由逍遙散演變制成，源自《太平惠民合劑局方》，是治療情志疾病的經(jīng)典方劑,具有明顯的抗抑郁作用。本實驗采用慢性輕度不可預見性應激抑郁模型大鼠，通過行為學測試進一步驗證逍遙丸的抗抑郁作用，并通過觀察大鼠血清MOT、GAS水平來探討逍遙丸的抗抑郁作用機制，以期為逍遙丸的臨床應用提供更為豐富的實驗依據(jù)。

1 實驗材料與方法

1.1動物 健康雄性SD大鼠，清潔級，體重(180±20)g，由湖南中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供，動物許可證編號：SCXK(湘)2009-0010。馴養(yǎng)1周后，實驗前用曠場分析試驗(Open-field法)對每只大鼠進行行為學評分，選擇各項行為學指標得分相近的40只大鼠，嚴格控制條件下飼養(yǎng)：自由飲食，光/暗周期為12 h/12 h(光照時間為6：00—18：00)，背景噪聲(40±10)dB，溫度(20±3)℃，濕度40%～70%。

1.2藥品與試劑 逍遙丸(主要成分：當歸、白芍、柴胡、茯苓、白術(shù)、生姜、薄荷、甘草)由湖南九芝堂股份有限公司提供，國藥準字Z43020469；鹽酸氟西汀分散片由禮來蘇州制藥有限公司提供，國藥準字J20160029，規(guī)格：20 mg/粒；MOT和GAS試劑盒均購自布蘭哲生物試劑公司。

1.3主要儀器 酶標儀(芬蘭Labsystems Multiskan MS)；電子分析天平(上海精密科學儀器有限公司)；離心機(微量高速離心機，國產(chǎn))；移液器(吉爾森P型移液器，Pipetman)；敞箱(自制木箱，高40 cm，底面為1 m×1 m的正方形，內(nèi)壁及底面均漆為黑色，底面分隔成面積相等的25個方格)。

1.4分組、造模及干預方法 將大鼠隨機分為正常組、模型組、氟西汀組和逍遙丸組，每組10只。正常組不做任何處理，其余3組參照文獻[4]進行造模：給予禁食24 h、禁水24 h、夾尾1 min、45 ℃環(huán)境5 min、晝夜顛倒、陌生氣味、陌生物品、電擊足底(電壓50 mV,每隔50 s刺激1次，每次持續(xù)10 s，共30次)、居住環(huán)境改變(潮濕墊料、鼠籠傾斜)、噪聲干擾(1 500 Hz，95 dB，1 h/d)等刺激，每日給予1種刺激，同種刺激不在連續(xù)的2 d出現(xiàn)，使大鼠不能預料刺激的發(fā)生，以避免產(chǎn)生適應性，連續(xù)21 d。從實驗第8天開始，氟西汀組予以氟西汀1.8 mg/kg配以蒸餾水灌胃，逍遙丸組予以逍遙丸2 g/kg用蒸餾水稀釋后灌胃[5]，正常組和模型組予以等量蒸餾水灌胃，每日1次，均連續(xù)灌胃14 d。正常組每籠5只飼養(yǎng),其他組均單籠飼養(yǎng)。

1.5觀察指標及方法

1.5.1糖水偏好實驗 參考文獻[6]方法，禁食禁水24 h后，于實驗前1 d和實驗第21天進行基礎糖水/純水消耗實驗：每只大鼠給予2個已稱重水瓶，一瓶1%的蔗糖水，一瓶純水，60 min后取走水瓶并稱重，計算每只大鼠的糖水偏好率，糖水偏好率=糖水消耗量/(糖水消耗量+純水消耗量)×100%。

1.5.2曠場測試 參考文獻[1]稍做改進，在實驗前1 d和實驗第21天進行曠場測試。將大鼠放入敞箱中心方格內(nèi)適應2 min后，觀察大鼠3 min內(nèi)水平穿越格數(shù)(以四爪均進入方格內(nèi)計數(shù))和直立次數(shù)(兩個前爪騰空或攀附墻壁計數(shù))，每次曠場測試后要徹底清潔敞箱再進行下一輪曠場測試。每只動物每次僅進行一輪曠場行為測定。

1.5.3血清MOT、GAS水平檢測 實驗第22天將大鼠用3%戊巴比妥鈉(100 mg/kg)腹腔注射麻醉后，腹主動脈采血3～5 mL，取血后立即3 000 r/min離心15 min，吸取上層血清，置-20 ℃冰箱保存,嚴格按照試劑盒說明采用ELISA法檢測MOT、GAS水平。

2 結(jié) 果

2.1各組大鼠糖水偏好率比較 實驗前1 d各組大鼠的糖水偏好率比較差異無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。實驗第21天，模型組大鼠糖水偏好率明顯低于正常組(P<0.05)，氟西汀組和逍遙丸組均明顯高于模型組(P均<0.05)，氟西汀組和逍遙丸組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組大鼠糖水偏好率比較

2.2各組大鼠曠場測試情況比較 實驗前1 d各組大鼠的水平穿越格數(shù)和直立次數(shù)比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。實驗第21天，模型組大鼠的水平穿越格數(shù)和直立次數(shù)均明顯少于正常組(P均<0.05)，氟西汀組和逍遙丸組均明顯多于模型組(P均<0.05)，氟西汀組和逍遙丸組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。見表2。

表2 各組大鼠曠場測試情況比較

2.3各組大鼠血清MOT和GAS水平比較 實驗第22天，模型組大鼠血清MOT和GAS水平均明顯低于正常組(P均<0.05)，氟西汀組和逍遙丸組均明顯高于模型組(P均<0.05)，氟西汀組和逍遙丸組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。見表3。

表3 各組大鼠血清MOT和GAS水平比較

3 討 論

抑郁癥具有高發(fā)病率、高自殺率和低就診率、低治療率的特點，屬中醫(yī)學的情志疾病，相當于中醫(yī)的“郁證”。慢性輕度不可預見性應激是經(jīng)典的建立動物抑郁模型的應激方法，造模成功動物既有抑郁的行為學表現(xiàn),又有胃腸活動的顯著減弱,應激引起情緒變化是胃腸功能紊亂的原因之一[7]。

逍遙丸是逍遙散的成方制劑，是治療肝郁脾虛證的中醫(yī)經(jīng)典方劑，由當歸、白芍、柴胡、茯苓、白術(shù)、生姜、薄荷、甘草等組成。方中以柴胡疏肝解郁，使肝氣條達，當歸、白芍養(yǎng)血和血柔肝，茯苓、白術(shù)健脾益氣、生化氣血，生姜散寒溫中，薄荷散熱解郁、疏泄條達，甘草調(diào)和諸藥，全方氣血兼顧，肝脾同調(diào)，使肝郁得疏，脾虛得健[8]。臨床上逍遙丸廣泛應用于多種精神系統(tǒng)疾病的治療，亦可用于治療胃腸神經(jīng)官能癥、腸易激綜合征等消化系統(tǒng)疾病。本實驗結(jié)果顯示，模型組大鼠糖水偏好率較正常組明顯降低，提示大鼠快感明顯缺乏，表明采用慢性輕度不可預見性應激結(jié)合孤養(yǎng)方式復制抑郁模型成功。連續(xù)干預14 d后，逍遙丸組大鼠的糖水偏好率明顯增高，水平穿越格數(shù)和直立次數(shù)明顯增加，表明逍遙丸具有良好的抗抑郁作用。

胃腸激素是調(diào)節(jié)消化器官活動的生物活性物質(zhì)，不僅存在于胃腸道,還存在于神經(jīng)組織和胰腺內(nèi)。胃腸激素不僅有激素作用，還有神經(jīng)遞質(zhì)和調(diào)質(zhì)作用，對于維持胃腸道正常的生理功能具有重要意義[9]。MOT和GAS是較為重要的胃腸激素，MOT主要由小腸Mo細胞分泌，在消化間期激發(fā)肌電活動Ⅲ相，進而影響胃腸運動及胃腸道對水、電解質(zhì)的運輸[10]；GAS由胃及十二指腸的G細胞合成分泌，可以促進胃黏膜細胞增殖，使黏膜血流量增加，同時可以促進胃酸分泌，使胃竇收縮[11]。姜俊[12]研究發(fā)現(xiàn)抗抑郁治療后胃腸道癥狀改善，血中MOT、GAS水平較治療前明顯增加，提示MOT和GAS可作為評估抗抑郁療效的指標。本實驗結(jié)果顯示,模型組大鼠MOT、GAS水平均較正常組明顯降低, 提示慢性輕度不可預見性應激可致大鼠胃腸激素分泌紊亂、胃腸功能失調(diào)，與國內(nèi)文獻[6]報道一致。而逍遙丸組大鼠MOT、GAS水平較模型組明顯升高，由此推斷逍遙丸的抗抑郁作用與調(diào)節(jié)血液中胃腸激素水平有關(guān)。

綜上所述，逍遙丸抗抑郁作用療效顯著，其作用機制可能與調(diào)節(jié)胃腸激素MOT、GAS的分泌，進而調(diào)整胃腸動力有關(guān)。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。