薛麗，王剛，王常利

(1.空軍986醫(yī)院檢驗(yàn)病理科；2.解放軍987醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西 西安 710000)

鱗狀細(xì)胞癌是宮頸癌最常見的組織學(xué)類型[1]。近年宮頸癌及癌前病變的早期診斷和治療已得到顯著提高，但浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和分化不良仍是宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)和死亡的重要原因[2-3]。Ki-67是一種與細(xì)胞增殖相關(guān)的蛋白質(zhì)，能反映腫瘤細(xì)胞的增殖能力[4]。MMP9是MMP家族的重要成員之一，與多種腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[5]。本研究擬對(duì)宮頸鱗癌組織中Ki-67和MMP9蛋白的表達(dá)進(jìn)行分析，并探討其與患者臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年1月至2020年6月在空軍986醫(yī)院病理科存檔并經(jīng)兩名病理專家確診的100份宮頸鱗癌組織標(biāo)本和60份經(jīng)病理檢查證實(shí)為正常宮頸組織的癌旁標(biāo)本。所有病例均有完整的臨床病理資料。根據(jù)FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)，Ib-IIa期33例，IIb期46例，III期21例，低分化39例，中高分化61例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移66例。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Ki-67和MMP9蛋白表達(dá) 所有組織標(biāo)本均采用多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片厚度2 μm，。染色步驟如下：組織切片用梯度二甲苯和乙醇脫蠟脫水，放入100 ℃檸檬酸鹽緩沖液加熱20 min，待抗原冷卻至室溫后用3%過氧化氫封閉8 min，然后按照SP組織化學(xué)試劑盒(北京中山金橋生物科技有限公司)說明書進(jìn)行操作，5%正常血清室溫孵育15 min，棄去血清，勿洗，加一抗4℃孵育過夜(Ki-67稀釋比例1∶100，MMP9稀釋比例1∶50，抗體購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司)，次日使用磷酸鹽緩沖溶液沖洗3次，加入生物素標(biāo)記的二抗，37℃孵育60 min，再經(jīng)磷酸鹽緩沖溶液沖洗3次，分別用二氨基聯(lián)苯胺和蘇木精染色，最后，經(jīng)梯度二甲苯和乙醇水合透明后用樹脂封閉切片，于顯微鏡下觀察染色結(jié)果。

1.2.2 免疫組織化學(xué)結(jié)果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) Ki-67蛋白陽(yáng)性表達(dá)為腫瘤細(xì)胞核內(nèi)有黃色和棕黃色顆粒，MMP9蛋白陽(yáng)性表達(dá)為腫瘤胞漿內(nèi)有黃色和棕黃色顆粒。隨機(jī)選取每個(gè)節(jié)段的3個(gè)高倍視野(×400)，每個(gè)視野再選取100個(gè)CSCC細(xì)胞。首先根據(jù)染色強(qiáng)度評(píng)分，即無色、淡黃色、棕黃色和黑褐色分別用0分、1分、2分、3分表示，再根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分率評(píng)分，即0分、1分、2分、3分、4分分別代表陰性，陽(yáng)性細(xì)胞百分率≤10%，11%～40%，41%～75%，≥76%。兩項(xiàng)得分之積為最終得分，即0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽(yáng)性(+)，4～7分為陽(yáng)性(++)，≥8分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)[6]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.00處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，組間比較使用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)，Ki-67、MMP9表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)分析，Ki-67和MMP9相關(guān)性采用非參數(shù)Spearman秩相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ki-67和MMP9在宮頸鱗癌組織及癌旁組織中的表達(dá)

Ki-67定位于細(xì)胞核內(nèi)，主要表現(xiàn)為黃色或棕褐色顆粒，在癌組織中呈弱陽(yáng)性至強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率達(dá)100.0%，在癌旁組織中不表達(dá)；MMP9定位于胞漿內(nèi)，主要表現(xiàn)為棕褐色或褐色顆粒，在癌組織中呈弱陽(yáng)性至強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率達(dá)100.0%，在癌旁組織中不表達(dá)。見圖1。

2.2 宮頸鱗癌組織中Ki-67和MMP9的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系

不同F(xiàn)IGO分期、浸潤(rùn)深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌患者組織中Ki-67、MMP9表達(dá)情況存在明顯差異(P<0.05)，但不同年齡、組織分級(jí)的患者組織中Ki-67、MMP9表達(dá)情況無明顯差異(P>0.05)。見表1和表2。

表1 宮頸鱗癌組織中Ki-67的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

表2 宮頸鱗癌組織中MMP9的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

2.3 宮頸鱗癌組織中Ki-67和MMP9的關(guān)系

宮頸鱗癌組織中Ki-67與MMP9表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.610，P=0.036)。見表3。

表3 宮頸鱗癌組織中Ki-67和MMP9的關(guān)系(例)

3 討論

宮頸鱗癌約占宮頸癌患者總數(shù)的80%[7]。早期宮頸癌患者的生存率高達(dá)90%，但浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和分化不良仍是宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)和死亡的重要原因[8-9]，故早期預(yù)防和治療可有效降低宮頸癌的發(fā)生率和死亡率。

Ki-67是一種與細(xì)胞增殖有關(guān)的核蛋白，其由兩條多肽鏈組成，具有非組蛋白特性，其能準(zhǔn)確反映細(xì)胞增殖的階段[10-11]。Ki-67被認(rèn)為是反映細(xì)胞增殖活性最可靠的標(biāo)志物之一[12]。大量研究[13-15]表明，Ki-67在多種婦科惡性腫瘤中高表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示Ki-67在宮頸鱗癌組織中呈弱陽(yáng)性至強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率達(dá)100.0%。同時(shí)發(fā)現(xiàn)不同F(xiàn)IGO分期、浸潤(rùn)深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌患者組織中Ki-67表達(dá)情況存在明顯差異(P<0.05)，提示Ki-67的表達(dá)增加與宮頸鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移及惡性程度密切相關(guān)。周成美等[16]研究發(fā)現(xiàn)， Ki-67水平可影響乳腺癌細(xì)胞增殖及遷移水平，而宮頸癌患者體內(nèi) Ki-6水平較高可能也與此相關(guān)。MMP9在腫瘤細(xì)胞局部浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移中起到重要作用，其可以通過降解細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原蛋白，幫助腫瘤細(xì)胞穿越基底膜，進(jìn)而發(fā)生浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[17-18]。最近有研究[19]報(bào)道，MMP9還可通過促進(jìn)血管形成及調(diào)控細(xì)胞黏附而參與腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，MMP9定位于胞漿內(nèi)，在宮頸鱗癌組織中呈弱陽(yáng)性至強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率達(dá)100.0%，而在癌旁組織中不表達(dá)，且不同F(xiàn)IGO分期、組織分級(jí)、浸潤(rùn)深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌患者組織中MMP9表達(dá)情況存在明顯差異(P<0.05)，提示宮頸鱗癌組織中MMP9蛋白表達(dá)水平增加與宮頸鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移及惡性程度有關(guān)。李勇軍等[20]研究發(fā)現(xiàn)，MMP9與宮頸癌的發(fā)展有關(guān)，其可促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，這與本研究結(jié)論相一致。

本研究進(jìn)一步分析了宮頸鱗癌組織中Ki-67與MMP9的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ki-67與MMP9表達(dá)水平呈正相關(guān)，推測(cè)宮頸鱗癌組織中Ki-67與MMP9表達(dá)水平越高，患者的預(yù)后可能也越差。

綜上所述，宮頸鱗癌組織中Ki-67和MMP9蛋白表達(dá)水平增加，并與宮頸鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移及惡性程度有關(guān)。