余紹蕾 徐洪霞 黃少梅

【摘 要】 目的：觀察抗氧化貼劑對(duì)UV照射造成的皮膚損傷的修復(fù)作用。方法：建立家兔UV照射皮膚損傷模型，治療組于UV照射后分別敷貼抗氧化貼劑不同的時(shí)間，連續(xù)輻照、敷貼30d，觀察皮膚變化情況，檢測皮膚中SOD、CAT和MDA的含量。結(jié)果：治療組紅斑、水腫、出血、滲出癥狀較模型組出現(xiàn)得晚，且癥狀輕，治療組與模型組比較，癥狀評(píng)分均有明顯改善（P<0.01）。治療組與模型組比較，SOD和CAT含量明顯升高， MDA含量明顯降低（P<0.01）。結(jié)論：抗氧化凝膠貼劑對(duì)UV照射造成的皮膚有一定的修復(fù)作用。

【關(guān)鍵詞】 抗氧化貼劑;紫外線;皮膚損傷

Abstract：Objective To observe the repairing effect of Antioxidant Patch on skin damage caused by UV irradiation.Methods The model of rabbit skin injury induced by UV irradiation was established.The treatment group was treated with Antioxidant Patch for 30 days after UV irradiation.The changes of skin were observed and the contents of SOD，CAT and MDA in the skin were detected.Results The symptoms of erythema，edema，bleeding and exudation in the treatment group appeared later than that in the model group，and the symptoms were mild.The symptom scores of the treatment group and the model group were significantly improved，P<0.01.Compared with the model group，the content of SOD and CAT in the treatment group was significantly increased，while the content of MDA was significantly decreased （P< 0.01）.Conclusion The Antioxidant Patch has certain repair effect on the skin damage caused by UV irradiation.

Keywords：Antioxidant Patch;UV;Skin Damage

紫外線（Ultravioletray，UV）在自然界中無處不在，其對(duì)皮膚的損傷已有大量的研究。皮膚長期受紫外線照射，會(huì)造成積累性的損傷，表現(xiàn)為皮膚變黑、色斑、皮膚松弛、皺紋加深;嚴(yán)重的導(dǎo)致局部紅腫、出血、炎癥反應(yīng)等。其作用機(jī)制之一是紫外線使人體皮膚中活性氧自由基含量急劇升高，進(jìn)而會(huì)破壞正常組織細(xì)胞的大分子物質(zhì)代謝，導(dǎo)致蛋白質(zhì)、脂類和DNA的氧化性損傷[1]。

抗氧化水凝膠貼劑是根據(jù)UV照射造成皮膚損傷的機(jī)理，以緩解臨床癥狀、修復(fù)損傷皮膚為目標(biāo)，經(jīng)科學(xué)的方法篩選、優(yōu)化形成的配方，包括海藻糖、透明質(zhì)酸鈉、蘆薈提取物、積雪草提取物、螺旋藻多糖等原料。制成水凝膠貼劑具有保濕性強(qiáng)、載藥量大、劑量準(zhǔn)確、清爽不油膩、使用方便等優(yōu)勢，適合于皮膚局部使用。在對(duì)配方篩選、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的基礎(chǔ)上，對(duì)抗氧化水凝膠貼劑的功效和作用機(jī)理也進(jìn)行了研究，以進(jìn)一步驗(yàn)證配方的可行性。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 30只健康成年白色新西蘭家兔由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（粵）2019-0035;動(dòng)物合格證號(hào)：44116000003 54]， 體重2.0～2.5kg，無皮膚疾病史，雌雄不限。

1.2 材料 聚丙烯酸鈉（NP700）、甘油、丙二醇、甘羥鋁、PVPK-30、氮酮、聚乙烯吡咯烷酮（PVPK-30）、海藻糖、透明質(zhì)酸鈉、積雪草提取物、螺旋藻多糖、膠原蛋白、蘆薈提取物、神經(jīng)酰胺、聚谷氨酸鈉、抗壞血酸葡糖苷、乙酰殼糖胺、無紡布、玻璃板（10cm×20cm）。超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、丙二醛（MDA）檢測試劑盒均為南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。

1.3 儀器 透射電子顯微鏡（日本日立公司）、電子天平（梅特勒-托利多）、恒溫水浴箱（上海赫田科學(xué)儀器有限公司）、UVA燈管 （40W）、紫外線輻射儀（江蘇省金壇市宏華儀器廠）、紫外可見光分光光度計(jì)（日本日立公司）。

1.4 受試物制作 將5.0g NP700與50.0g甘油的混合液低速攪拌混合均勻，加入組合物5.0g（海藻糖、透明質(zhì)酸鈉、蘆薈提取物、積雪草提取物、螺旋藻多糖、膠原蛋白、神經(jīng)酰胺、聚谷氨酸鈉、抗壞血酸葡糖苷、乙酰殼糖胺）、2.0g PVPK-30、0.4g甘羥鋁、2.5g氮酮、2.5g丙二醇，低速攪拌混合均勻后作為A相，0.4g酒石酸溶于32.2g水中作為B相。在一定轉(zhuǎn)速攪拌下將A和B相混合，充分?jǐn)嚢璩绅こ頎畎牍虘B(tài)流體，均勻涂布于無紡布上，蓋上背襯，室溫放置24h，沖切成5cm×5cm大小，包裝即得。

1.5 動(dòng)物分組 30只無皮膚病史的健康家兔，適應(yīng)飼養(yǎng)7d后隨機(jī)分為6組，對(duì)照1組、對(duì)照2組、模型組、治療A組、治療B組和治療C組。

1.6 實(shí)驗(yàn)方法 參照文獻(xiàn)方法[2]，每只動(dòng)物在背部兩側(cè)剃出5cm×5cm的兩塊裸露皮膚。除對(duì)照組外，其余四組采用紫外燈照射造模，輻照強(qiáng)度10Mw/cm2，每天照射2h，連續(xù)30d。對(duì)照1組在其余組給藥時(shí)涂抹生理鹽水;對(duì)照2組，每天貼一片抗氧化水凝膠貼劑，貼敷3h后撕下;模型組在紫外燈照射后，涂抹生理鹽水;治療A組在紫外燈照射后貼一片抗氧化水凝膠貼劑，貼敷1h后撕下;治療B組在紫外燈照射后貼一片抗氧化水凝膠貼劑，貼敷2h后撕下;治療C組在紫外燈照射后貼一片抗氧化水凝膠貼劑，貼敷3h后撕下。

1.7 評(píng)價(jià)指標(biāo)

1.7.1 創(chuàng)面外觀情況 參照文獻(xiàn)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)[3]，每天定時(shí)觀察、記錄每只動(dòng)物皮膚變化情況。按照創(chuàng)面情況評(píng)分表評(píng)分。以最后一天觀察記錄數(shù)據(jù)作為統(tǒng)計(jì)用數(shù)據(jù)。

1.7.2 檢測指標(biāo) 用藥結(jié)束后第2天，麻醉家兔，每只家兔取裸露部分皮膚，處理后按試劑盒說明書檢測SOD、CAT和MDA的含量。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。其中計(jì)量資料采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，三組間比較采用方差分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 創(chuàng)面外觀情況 模型組動(dòng)物UVB 照射后第5天開始出現(xiàn)皮膚發(fā)紅、蛻皮的現(xiàn)象，第12天起開始出現(xiàn)紅斑、紅腫、出血、滲出等現(xiàn)象，并逐漸加重，反復(fù)蛻皮、結(jié)痂，無新毛長出。治療A組動(dòng)物UVB 照射后第8天開始出現(xiàn)皮膚發(fā)紅、蛻皮的現(xiàn)象，第15天起開始出現(xiàn)紅斑、紅腫、出血、滲出等現(xiàn)象，有少量新毛長出;治療B組動(dòng)物UVB 照射后第12天開始出現(xiàn)皮膚發(fā)紅、蛻皮的現(xiàn)象，第18天起開始出現(xiàn)紅斑、紅腫、出血、滲出等現(xiàn)象，反復(fù)蛻皮、結(jié)痂，新毛長出明顯;治療C組動(dòng)物UVB 照射后第15天開始出現(xiàn)皮膚發(fā)紅、蛻皮的現(xiàn)象，第20天起開始出現(xiàn)紅斑、紅腫、出血、滲出等現(xiàn)象，較為輕微，發(fā)展速度慢，新毛逐漸長出;對(duì)照1組動(dòng)物刮毛后很快有絨毛均勻長出，7d覆蓋滿，并均勻生長;對(duì)照2組動(dòng)物刮毛區(qū)域未出現(xiàn)紅斑、水腫、出血等不良反應(yīng)，絨毛生長快，陰性對(duì)照組小鼠剃毛后，很快有絨毛均勻覆蓋于背部，背毛生長快且均勻，5d覆蓋滿。

創(chuàng)傷情況評(píng)分詳見表2，兩個(gè)對(duì)照組脫毛區(qū)域未出現(xiàn)紅斑、水腫、出血、滲出癥狀。模型組與對(duì)照1組比較，紅斑、水腫、出血、滲出評(píng)分明顯升高（P<0.01），說明造模成功。3個(gè)治療組與模型組對(duì)比，紅斑、水腫、出血、滲出癥狀均有明顯改善（P<0.01）。

2.2 檢測指標(biāo)結(jié)果 抗氧化水凝膠貼劑對(duì)紫外照射家兔皮膚SOD、CAT和MDA含量影響結(jié)果見表3。模型組與對(duì)照1組比較，SOD和CAT含量明顯降低，MDA含量明顯升高（P<0.01），說明造模成功。3個(gè)治療組與模型組比較，SOD和CAT含量明顯升高， MDA含量明顯降低（P<0.01）。對(duì)照2組與對(duì)照1組比較，SOD和CAT含量明顯升高， MDA含量明顯降低（P<0.01）。

3 討論

UV的穿透力強(qiáng)，可透過表皮直達(dá)真皮層，且有蓄積的作用，長時(shí)間的照射可以導(dǎo)致皮膚紅斑、水腫、增厚、色素沉著、免疫抑制、老化甚至是皮膚腫瘤的發(fā)生。研究表明[4]UV對(duì)皮膚損傷的作用機(jī)制主要有：引起皮膚氧化應(yīng)激、引起細(xì)胞炎癥、引起細(xì)胞凋亡、引起彈性相關(guān)物質(zhì)降解。

根據(jù)UV照射造成皮膚損傷的機(jī)理開發(fā)的抗氧化水凝膠貼劑，其主要成分有海藻糖、透明質(zhì)酸鈉、蘆薈提取物、積雪草提取物、螺旋藻多糖、神經(jīng)酰胺、聚谷氨酸鈉、抗壞血酸葡糖苷、乙酰殼糖胺等。其中，海藻糖對(duì)生物膜、蛋白質(zhì)和核酸有特異性保護(hù)作用，并可進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮替代應(yīng)激因子而起到抗氧化的作用，且可在細(xì)胞表面形成保護(hù)膜而起到保濕和細(xì)胞膜保護(hù)的作用[5-6]。蘆薈提取物具有保濕、抗炎、角質(zhì)軟化，改善傷痕等作用[7]。積雪草提取物能促進(jìn)真皮層中膠原蛋白的形成，使纖維蛋白再生，防止水腫，促進(jìn)受損組織愈合[8]。螺旋藻多糖具有抗輻射、促進(jìn)DHA合成的作用[9]。膠原蛋白有保濕、美白、防皺、祛斑等作用[10]。透明質(zhì)酸鈉、神經(jīng)酰胺、聚谷氨酸鈉均具有保持皮膚水分的作用[11-13]。組方中各種物質(zhì)合用，起到抗輻射、抗氧化、抑制水腫、促進(jìn)組織愈合、保濕、美白的功效。制成凝膠貼劑，其中的透皮劑可進(jìn)一步地促進(jìn)藥物的吸收、發(fā)揮藥效，且使用方便。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證明，健康皮膚家兔使用抗氧化凝膠貼劑后，SOD和CAT含量明顯升高，說明皮膚抗氧化能力提高。3個(gè)治療組在同等UV照射下，給藥劑量越大的治療組皮膚損傷癥狀越輕、恢復(fù)越快，且SOD和CAT含量與模型組比較有明顯升高。結(jié)果顯示，抗氧化凝膠貼劑對(duì)UV照射造成的皮膚損傷癥狀有一定改善和延緩作用，說明抗氧化凝膠貼劑對(duì)UV照射造成的皮膚損傷有一定的修復(fù)作用，其作用機(jī)理可能是通過減少皮膚氧化應(yīng)激實(shí)現(xiàn)的。

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