孔凡斌， 袁 勇， 吉 永， 李 錚， 陳 琪， 吳曉明， 高 輝

（昆明醫(yī)科大學(xué)附屬延安醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南 昆明 650051）

視黃醇結(jié)合蛋白4（retinol binding protein 4，RBP4）是一種具有多重生物學(xué)活性的脂肪因子[1]，可通過(guò)促進(jìn)胰島素抵抗、引起向心性肥胖、影響糖脂代謝和參與慢性炎癥反應(yīng)等作用導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化[2-3]。同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）也可通過(guò)多種途徑引起動(dòng)脈粥樣硬化[4]。因此，RBP4、Hcy和血脂在動(dòng)脈粥樣硬化的形成和發(fā)展過(guò)程中可能有相互作用和協(xié)同作用[5]。目前，有關(guān)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生機(jī)制及其各因子在其中所起的作用尚未被完全闡明，特別是關(guān)于Hcy與RBP4相關(guān)關(guān)系的研究很少。為此，本研究擬通過(guò)頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度（intima-medium thickness，IMT）這一動(dòng)脈粥樣硬化早期指標(biāo)分析RBP4、Hcy、血脂與動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系，為動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生機(jī)制的研究提供相關(guān)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2017年7月—2018年11月在昆明醫(yī)科大學(xué)附屬延安醫(yī)院進(jìn)行頸動(dòng)脈IMT測(cè)量的門診、住院和體檢患者236例，其中男123例、女113例，年齡（63.14±9.23）歲，包括高血壓70例、冠心病35例、腦梗死22例、其他疾?。ㄖ夤苎?、心悸待查、頭暈待查等）109例。排除患2型糖尿病、腎功能不全、甲狀腺功能減退患者，以及服用氨甲喋呤、抗癲癇藥物的患者。根據(jù)超聲測(cè)量結(jié)果，將IMT＜1 mm的患者納入IMT正常組（39例），將IMT≥1 mm的患者納入IMT增厚組（197例）[6]。2個(gè)組之間年齡和性別差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 采集所有患者測(cè)定IMT當(dāng)日空腹靜脈血3～5 mL，625×g 離心10 min，分離血清，于-70 ℃保存待用。

1.2.2 IMT測(cè)量 采用550型B超機(jī)（探頭頻率7～12 MHz，美國(guó)惠普公司）分別檢查患者頸總動(dòng)脈和分叉部、頸內(nèi)、頸外動(dòng)脈顱外段，舒張末期測(cè)量頸總動(dòng)脈分叉處近端 1 cm后壁的IMT，測(cè)量 3 次，取平均值。

1.2.3 RBP4、Hcy和血脂相關(guān)指標(biāo)檢測(cè) Hcy采用循環(huán)酶法檢測(cè)，載脂蛋白A1（apolipoprotein A1，apo A1）和載脂蛋白B（apolipoprotein B，apo B）均采用免疫透射比濁法檢測(cè)，試劑盒（批號(hào)分別為18-0302、18-0421、18-0416）均購(gòu)自北京九強(qiáng)公司?？偰懝檀迹╰otal cholesterol，TC）采用膽固醇氧化酶法檢測(cè)，三酰甘油（triglyceride，TG）采用磷酸甘油氧化酶-過(guò)氧化物酶法檢測(cè)，試劑盒（批號(hào)分別為20180312、20180411）均購(gòu)自上?？迫A公司。高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）采用選擇性抑制法檢測(cè)，低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）采用表面活性劑清除法檢測(cè)，試劑盒（批號(hào)分別為811RFM、831RDP）均購(gòu)自日本積水公司。生化復(fù)合室內(nèi)質(zhì)控血清購(gòu)自美國(guó)賽默飛世爾公司。檢測(cè)儀器為AU5421全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司）。RBP4采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）測(cè)定，試劑盒（批號(hào)201711）購(gòu)自美國(guó)R&D公司，檢測(cè)儀器為iMark酶標(biāo)儀（美國(guó)伯樂(lè)公司）。所有項(xiàng)目均在室內(nèi)質(zhì)控在控的情況下測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以±s表示，2個(gè)組之間比較采用t檢驗(yàn)。呈非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)（M）[四分位數(shù)（P25～P75）]表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。采用Spearman相關(guān)分析評(píng)估各項(xiàng)目之間的相關(guān)性。采用Logistic回歸分析評(píng)估各項(xiàng)指標(biāo)之間的關(guān)系。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IMT正常組與IMT增厚組各項(xiàng)指標(biāo)的比較

IMT增厚組TG、LDL-C、Hcy和RBP4水平均高于IMT正常組（P=0.000），HDL-C和apo A1水平均低于IMT正常組（P=0.000）。TC和apo B水平2個(gè)組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

表1 IMT正常組和IMT增厚組各項(xiàng)指標(biāo)的比較

2.2 各項(xiàng)目之間的相關(guān)性分析

對(duì)IMT正常組與IMT增厚組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的項(xiàng)目（TG、LDL-C、Hcy、RBP4、HDL-C和apo A1）進(jìn)行Spearman相關(guān)分析。結(jié)果顯示，R B P 4與T G呈正相關(guān)（r=0.745，P＜0.05），與HDL-C和apo A1呈負(fù)相關(guān)（r值分別為-0.727、-0.512，P＜0.05）；TC與LDL-C、apo B呈正相關(guān)（r值分別為0.881、0.852，P＜0.05）；TG與HDL-C、apo A1呈負(fù)相關(guān)（r值分別為-0.682、-0.353，P＜0.05）。其他各項(xiàng)目之間均無(wú)相關(guān)性（P>0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各項(xiàng)目之間的r值

2.3 RBP4與其他項(xiàng)目的線性回歸分析

以RBP4為因變量，TG、HDL-C、apo A1為自變量，進(jìn)行線性回歸分析。

RBP4（Y）與TG（X）的回歸方程為Y=32.07X-15.30（r=0.745，P＜0.05）。TG在3.5 mmol/L處有1個(gè)折點(diǎn)，部分TG>3.5 mmol/L的患者RBP4水平急劇升高，部分患者RBP4水平升高不明顯。見(jiàn)圖1。

RBP4（Y）與HDL-C（X）的回歸方程為Y=-77.62X+129.3（r=0.452，P＜0.05）。因方程得出的r值較小，進(jìn)行曲線擬合。結(jié)果顯示，RBP4與HDL-C的三次方程得出的相關(guān)性最好，回歸方程為Y=-190.84X3+963.61X2-1 493.03X+746.06（r=0.861，P=0.000）。見(jiàn)圖1。

RBP4（Y）與apo A1（X）的回歸方程為Y=-92.739X+166.40（r=0.420，P＜0.05）。因方程得出的r值較小，進(jìn)行曲線擬合。結(jié)果顯示，RBP4與apo A1的三次方程得出的相關(guān)性最好，回歸方程為Y=-342.66X3+1 571.76X2-2 372.02X+1 212.93（r=0.670，P=0.000）。見(jiàn)圖1。

圖1 RBP4與TG、HDL-C、apo A1的回歸分析

以RBP4為因變量，血脂相關(guān)指標(biāo)和Hcy作為自變量，用逐步法進(jìn)行多重回歸分析，得出的回歸方程為RBP4=40.27+29.43×TG-40.18×apo A1（P＜0.05）。

3 討論

目前，我國(guó)心腦血管疾病的發(fā)病率逐年升高，且發(fā)病年齡有年輕化的趨勢(shì)[7]。頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層增厚是頸動(dòng)脈粥樣硬化的早期征象。血脂是最早被發(fā)現(xiàn)和研究的與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的因素，其代謝異常是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的主要原因，主要機(jī)制包括血管內(nèi)皮損傷、脂質(zhì)沉積導(dǎo)致最終斑塊形成和破裂[8]。Hcy是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)因子，其導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制有：（1）對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的毒性作用；（2）干擾脂代謝正常途徑；（3）促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增生[9]；（4）影響凝血機(jī)制；（5）蛋白質(zhì)Hcy化[10-11]。脂質(zhì)代謝異常是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的前提。有研究結(jié)果顯示，在多種疾病中，RBP4與一些發(fā)生異常代謝的脂質(zhì)或脂蛋白，如TG、TC、LDL-C呈正相關(guān)，與HDL-C呈負(fù)相關(guān)[12]，與本研究部分結(jié)果一致。RBP4與脂代謝相關(guān)的機(jī)制可能是：RBP4能活化維甲酸受體（retinoic acid receptor，RAR）/維甲類X受體（retinoid X receptor，RXR）信號(hào)途徑，使脂蛋白酯酶的激動(dòng)劑血清載脂蛋白CⅢ表達(dá)上調(diào)，抑制極低密度脂蛋白（very low-density lipoprotein，VLDL）分解，從而間接使VLDL升高，HDL-C降低[13]；潴留的VLDL通過(guò)膽固醇酯化轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白途徑轉(zhuǎn)化為TG和TC，導(dǎo)致血清TC和TG水平升高[14]。本研究結(jié)果顯示，RBP4與TG呈正相關(guān)（r=0.745，P＜0.05），但與TC無(wú)相關(guān)性（r=0.046，P>0.05）。具體原因有待進(jìn)一步研究。

Hcy一直被認(rèn)為是動(dòng)脈粥樣硬化和心腦血管疾病發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制可能是干擾脂質(zhì)代謝，導(dǎo)致脂質(zhì)代謝紊亂[15]。對(duì)于高Hcy水平的患者，長(zhǎng)期服用B族維生素和葉酸可有效降低Hcy水平[16]，但通過(guò)上述治療并不能顯著改變動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程和降低心腦血管事件的發(fā)生率[17]。這也使學(xué)者們推測(cè)Hcy可能不是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的因素，只是動(dòng)脈粥樣硬化代謝過(guò)程中的一個(gè)產(chǎn)物[18]，但這個(gè)觀點(diǎn)目前還沒(méi)有被明確的證據(jù)證明。本研究結(jié)果顯示，Hcy與RBP4和血脂相關(guān)指標(biāo)之間均無(wú)相關(guān)性（P>0.05）。

本研究在課題設(shè)計(jì)之初考慮到樣本留取的難度，未局限于某一種單一疾病，而選擇了動(dòng)脈粥樣硬化這一多種疾病共有的病變，這可能會(huì)引入一些混雜因素。然而，在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，血脂、Hcy、RBP4等仍是目前公認(rèn)的危險(xiǎn)因素，分析這些指標(biāo)之間的關(guān)系可為研究動(dòng)脈粥樣硬化的致病機(jī)制及各種因素在其中所起的作用提供一定的參考。